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APOBEC3シトシンデアミナーゼ/APOBEC3A活性測定/阻害物質スクリーニングキット Epigenase APOBEC3 Cytidine Deaminase/APOBEC3A Activity/Inhibition Assay Kit

掲載日情報:2022/02/01 現在Webページ番号:70173

一本鎖DNAおよびRNAの編集に関与する酵素APOBEC3シチジンデアミナーゼまたはそのサブタイプの一つであるAPOBEC3Aについて、細胞抽出物または精製酵素を用いて、酵素活性/阻害を比色法により簡便かつ迅速に測定するキットです。各酵素の阻害物質のスクリーニングにも最適です。

Epigenase APOBEC3 Cytidine Deaminase Activity/Inhibition Assay Kit(#P-3140)の測定例

Epigenase APOBEC3 Cytidine Deaminase Activity/Inhibition Assay Kit(#P-3140)を用いた組換え体APOBEC3A酵素による活性の測定

上表は、OD測定データで、APOBEC3A酵素活性に反比例する。

Epigenase APOBEC3 Cytidine Deaminase Activity/Inhibition Assay Kit(#P-3140)の測定例

Epigenase APOBEC3 Activity/Inhibition Assay Kit(#P-3142)の測定例

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APOBEC3シチジンデアミナーゼとは

APOBEC3シチジンデアミナーゼの役割

一本鎖DNAおよびRNAの編集に関わっているAPOBEC3シチジンデアミナーゼ(Apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide 3)は、7つのサブタイプ(APOBEC3A、APOBEC3B、APOBEC3C、APOBEC3E、APOBEC3F、APOBEC3G、およびAPOBEC3H)により構成されています。APOBEC3は哺乳類にのみ見られ、シチジン(C)塩基からのアミノ基の除去を触媒し、一本鎖DNAまたはRNAにウリジン(U)を形成することができます。

Cytosine deamination reaction catalyzed by APOBEC3

APOBEC3が触媒するシトシン脱アミノ化反応

Methylcytosine deamination reaction catalyzed by APOBEC3A

APOBEC3Aが触媒するメチルシトシン脱アミノ化反応

APOBEC3シチジンデアミナーゼとウイルス感染

APOBEC3による遺伝子への変異導入は、転写およびmRNAプロセッシングを変化させ、多様な生物学的プロセスに積極的に関与しています。APOBEC3は、細胞の完全性の保護のため、さまざまなDNAまたはRNAウイルスに対する自然免疫システムの一部を担っています。ssDNA / RNA上でシチジンからウラシルへの脱アミノ化を促進することにより、APOBEC3はウイルスゲノムを変異させてウイルス複製を阻害します。一例として、SARS-CoV-2ゲノムにおいてAPOBEC3によって誘導されるCからUへの変異が優性変異(> 50%)であると報告されました。APOBEC3は、SARS-CoV-2ウイルスを含むさまざまなウイルス感染に対する固有の宿主耐性を付与しますが、他方でウイルスに潜在的な進化的結果を引き起こす可能性もあります。

APOBEC3Aの疾患への関与

APOBEC3のサブタイプの一つであるAPOBEC3Aは、COVID-19患者において最も豊富に存在するmRNAの一つであることが明らかにされています。これは、ウイルス修復酵素であるnsp14に損傷を与えることで、SARS-CoV-2の複製を阻害する可能性があります。また、APOBEC3Aは、5-メチルシチジンをチミジンに効率的に脱アミノ化できる唯一のAPOBEC3酵素であり、エピジェネティックな細胞のアイデンティティと調節をサポートするため、単独で、またはTETなどのメチル化DNA / RNA酸化酵素と共に局所的なDNA脱メチル化に関与します 。

APOBEC3およびAPOBEC3Aの測定における問題点

これらのことから、APOBEC3およびAPOBEC3Aの酵素活性の測定と阻害の検出は、ウイルス感染防御やがんの診断、標的ベースの治療法の開発において重要となりますが、これまで、APOBEC3の測定にはNMRやゲル電気泳動、ドロップレットデジタル PCR(ddPCR)などの専用機器が必要で、時間も要しました。また、細胞または組織からの細胞抽出物を使用したAPOBEC3Aの検出方法はほとんどありませんでした。Epigentek Group社は、こうした問題点を解決するため、細胞または組織からの細胞抽出物を使用してAPOBEC3およびAPOBEC3Aを簡便、迅速に測定できるマイクロプレートフォーマットのキットを開発しました。

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特長

  • バックグラウンドシグナルが非常に低く、簡便で、かつ正確性、信頼性が高く、データに一貫性があります。
  • 適用:in vivoおよびin vitroでの酵素活性測定、および阻害物質スクリーニング

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測定原理

Epigenase APOBEC3 Cytidine Deaminase Activity/Inhibition Assay Kit(#P-3140

ウェル上にコートされた基質に含まれるシトシンに活性型APOBEC3酵素を結合させ、ウラシル生成物に変換します。ウラシル生成物を特異的プローブで捕捉し、比色定量します。得られたAPOBEC3酵素の活性の割合または定量値に比例します。


Epigenase APOBEC3A Activity/Inhibition Assay Kit(#P-3142

ウェル上にコートされた基質に含まれる5mCに活性型APOBEC3A酵素を結合させ、Tに変換します。基質中の未変換の5mCを高親和性5mC抗体で捕捉し、比色定量します。得られた酵素活性の割合または定量値は、APOBEC3A活性に反比例します。



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製品の種類

品名をクリックすると製品の詳細、商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 Epigenase Activity/Inhibition Assay Kit
APOBEC3 Cytidine Deaminase APOBEC3A
検量線例 Epigenase APOBEC3 Cytidine Deaminase Activity/Inhibition Assay Kit(#P-3140)検量線例

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Epigenase APOBEC3A Activity/Inhibition Assay Kit(P-3142)検量線例

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アッセイ数 48 assays 96 assays 48 assays 96 assays
商品コード P-3140-48 P-3140-96 P-3142-48 P-3142-96
測定動物種 哺乳動物(ヒトを含む)
測定試料 培養細胞、新鮮および凍結組織抽出物、精製酵素
アッセイフォーマット 96 well(ストリップウェルプレート)
測定時間 4時間 5時間
測定方法 比色
測定波長 450 nm
検出限界 10 ng(精製酵素)
キット内容 Assay substrate*
Assay standard*
APOBEC3A substrate
Assay buffer*
Wash buffer
Binding solution
Pre-probe clean buffer
APOBEC3 probe solution
APOBEC3 probe
Capture antibody
Detection antibody
Enhancer solution
Developer solution
Stop solution
8-well assay strips with frame
8-well sample strips(Green-Trimmed)

キットにより内容は異なります。
測定にはマイクロプレートリーダーが必要です。



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操作方法概略

Epigenase APOBEC3 Cytidine Deaminase Activity/Inhibition Assay Kit(#P-3140)

Epigenase APOBEC3 Cytidine Deaminase Activity/Inhibition Assay Kit(#P-3140)ワークフロー

  1. 細胞抽出液またはAPOBEC3精製酵素をウェルに加える。
  2. 基質とアッセイバッファー(および阻害物質)を加え、120分間インキュベートする。
  3. ウェルを洗浄後、プローブを加える。
  4. ウェルを洗浄後、エンハンサーを加える。
  5. 発色剤を加え発色した後に吸光度(OD450 nm)を測定する。


Epigenase APOBEC3A Activity/Inhibition Assay Kit(#P-3142)

Epigenase APOBEC3 Cytidine Deaminase Activity/Inhibition Assay Kit(#P-3140)ワークフロー

  1. 細胞抽出液またはAPOBEC3A精製酵素をウェルに加える。
  2. アッセイバッファー(および阻害物質)を加え、120分間インキュベートする。
  3. ウェルを洗浄後、検出用混合液(捕捉抗体、検出抗体、エンハンサー)を加える。
  4. 発色剤を加え発色した後に吸光度(OD450 nm)を測定する。

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価格

Epigenase APOBEC3 Cytidine Deaminase Activity/Inhibition Assay Kit(#P-3140)

[在庫・価格 :2025年02月08日 12時55分現在]

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詳細 商品名
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  • 価格
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納期 文献数
Epigenase APOBEC3 Cytidine Deaminase Activity/Inhibition Assay Kit, 48 assays
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
  • メーカーサイト
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キャンペーン期間 2024/11/15 ~ 2025/02/28
説明文
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保存条件 4℃,-20℃,暗所保存 法規備考
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キャンペーン期間 2024/11/15 ~ 2025/02/28
[EPG]エピジェネティクス研究用製品 タイマー/ミラープレゼントキャンペーン[~2025/2/28]
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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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