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高親和性かつ安定した検出が可能な各種エピトープタグ抗体 抗エピトープタグ抗体(PROGEN Biotechnik社)

掲載日情報:2020/12/01 現在Webページ番号:69970

PROGEN Biotechnik社の各種エピトープタグ(His,DDDDK,GST,HA,c-myc,GFP,およびStrep)に対する抗体(Anti-tag Antibodies)をご紹介します。
PROGEN Biotechnik社は,実験室規模から大規模なバイオ医薬品の製造まで,タンパク質間相互作用,翻訳後修飾,発現動態または局在化を含む細胞生物学研究で最も頻繁に使用されるタンパク質タグ(Protein tag)を特異的に認識する一次抗体を多数提供しています。


製品ラインナップ


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タンパク質タグ(Protein tag)について

タンパク質タグを使用する理由

タンパク質間相互作用,翻訳後修飾,発現動態または局在化を含む細胞生物学的研究のための組換え体タンパク質の使用は近年増加しています。タンパク質/分子の迅速な同定,修飾,産生,単離,精製を可能にするには,目的のタンパク質を特異的に標的とする抗体などの適切なツールが必要です。便利な分子的手法として,特定のリガンドに対して高い親和性を有する既知のタンパク質タグを,組換え発現させたタンパク質に融合させる方法が挙げられます。


タンパク質タグにより期待される利点

  • 免疫反応性の導入または改善
  • 溶解性の向上
  • 発現レベルの上昇
  • タンパク質の折りたたみ(Folding)をサポート
  • タンパク質分解の減少

タンパク質タグのアプリケーション

  • 特定のタンパク質の同定(ウエスタンブロット(WB)など)
  • 可視化および局在研究(免疫蛍光染色(IF)など)
  • 分離・精製(アフィニティー精製など)
  • タンパク質間相互作用の解析

適切なタグを選択する上で重要な検討事項

潜在的なタグの対象とするアプリケーションは不可欠な要素であり,使用される適切なタグの数を制限します。関心のあるアプリケーションに応じて,小さいサイズまたは大きいサイズのタグを決定することが重要です。タグが小さいほど,通常タグ付けされたタンパク質の構造,活性,または特性への影響は少なくなります。一方,大きなタグを使用して,ターゲットタンパク質の機能を向上させることができます。しかし,より大きなタグを使用することの主な懸念は,生物活性の損失/変化またはタグ付けされた標的タンパク質の毒性が増すことです。タグと標的タンパク質の間の特定のプロテアーゼ認識部位,または自己スプライシング能力を有するタンパク質をコードする配列のいずれかによって,大きなタグを除去する必要があるかもしれません。

もう1つの検討事項は,目的のタンパク質内のタグの位置です。ほとんどのタグは,活性部位との干渉を避けるために,標的タンパク質のC末端またはN末端に配置することが好ましくなっています。さらに,末端の1つにタグを配置することにより,そのリガンドとの相互作用(精製など)を可能にするため,タンパク質表面へのタグの露出を確実にします。一般に,良好な翻訳開始を確かにするために,タグをコードするオリゴヌクレオチドは主に目的遺伝子の5 '末端に挿入されます。場合によっては,遺伝子配列内の配置を選択することも可能かもしれません。

タグ(特に小さなサイズのタグ)の感度を上げるために,シグナル強度を高め,SN比(シグナルとノイズの比率)を強化するタンデムコピーを付加することができます。異なるタググループの機能を組み合わせたタンデムタグシステムを使用することも可能です。これは主にタンデムアフィニティー精製(TAP法)で使用され,2つの連続した精製ステップに基づいてタンパク質複合体の単離と非特異的バックグラウンドの低減を可能にします。


タンパク質タグの付加方法

目的のタンパク質にタグを付けるには,2つの標準的な方法があります。1つ目は,それぞれのタグをコードするオリゴヌクレオチドを標的タンパク質のゲノムコード配列に導入することによりゲノムタグ付けする方法です。より一般的な2つ目の方法は,標的タンパク質コード配列を所望のタグ配列を含む発現ベクターに導入する方法です。哺乳類細胞,酵母,昆虫細胞,またはE.coli用の最新の発現ベクターの大部分は,1つまたは複数のタグを有しています。ベクターベースの方法には,いくつかの利点があります。例えば,ゲノムタグ付けと比較して労力が少なく,はるかに簡単です。さらにこの方法では,解析のために細胞内の野生型タンパク質(タグなし)とタグ付きタンパク質とを区別できます。




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PROGEN Biotechnik社の抗タグ抗体の特長

  • 最も一般的に使用されるタンパク質タグ(His,DDDDK,GST,HA,c-myc,GFP,およびStrep)に対する抗体を取りそろえています。
  • 各タンパク質タグへの高い親和性を有しています。
  • 融合タンパク質の安定的かつ非常に特異的な検出が可能です。
  • ウエスタンブロット(WB),免疫沈降(IP),ELISA,免疫蛍光染色(IF)などに適しています*1

*1 具体的な適用については,各製品のデータシートをご確認下さい。


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抗6-Hisタグ抗体(Anti-6-His-tag Antibody)

His (Polyhistidin) タンパク質タグとは

  • 2~10ヒスチジン残基の長さのものがありますが,通常は6ヒスチジン残基(6-His / His6)が使用されます。
  • C末端またはN末端に融合します。
  • 通常,融合タンパク質の構造と機能に干渉することはありません。
  • タグの位置を変更することにより,タンパク質特異的干渉を解決できます。
  • 精製の際には,固定化金属アフィニティークロマトグラフィー(IMAC)を用います。
  • バクテリア,酵母,哺乳類細胞,昆虫細胞の発現系があります。
  • 幅広い発現ベクターおよび試薬が販売されています。

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品名 特異性 免疫動物 クローン名 適用 容量 商品コード
Anti-6-His-tag Antibody 6-Hisタグ マウス
(モノクローナル)
6His IC,IF,IP,WB 25μg 910HIS
100μg 910HISL

IC:免疫細胞染色,IF:免疫蛍光染色,IP:免疫沈降,WB:ウエスタンブロッティング


抗6-Hisタグ抗体を用いたウエスタンブロッティング像

抗6-Hisタグ抗体を用いたウエスタンブロッティング像


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抗DDDDKタグ抗体(Anti-DDDDK-tag Antibody)

DDDDK(Flag)タンパク質タグとは

  • 8 aa(DYKDDDDK)で構成され*2,タンパク質の構造や機能にほとんど影響を与えません。
  • N末端またはC末端(N末端の方がわずかに有益)に付加します。
  • in vivoおよびin vitroでの検出や,3× FLAGシステムが検出を改善します。
  • 非変性条件下での精製が行えます(抗体を介したアフィニティークロマトグラフィーなど)。
  • 大量の精製や高純度の分離には適していません。
  • 非常に安定しており,細胞内で分解されません。

*2 DDDDK配列はFlagタグ(Sigma Aldrichが特許を取得)の一部で,本抗体(抗DDDDK抗体)はFlagタグの検出に使用できます。


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品名 特異性 免疫動物 クローン名 適用 容量 商品コード
Anti-DDDDK-tag Antibody DDDDKタグ マウス
(モノクローナル)
AP1501 IC,IF,IP,WB 25μg 910DDK
100μg 910DDKL

IC:免疫細胞染色,IF:免疫蛍光染色,IP:免疫沈降,WB:ウエスタンブロッティング


抗DDDDKタグ抗体を用いたウエスタンブロッティング像

抗DDDDKタグ抗体を用いたウエスタンブロッティング像


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抗GSTタグ抗体(Anti-GST-tag Antibody)

GST(Glutathione-S-transferase)タンパク質タグとは

  • 211アミノ酸で構成され,分子量26 kDaになります。
  • C末端またはN末端に融合します。
  • グルタチオンへの高い親和性を用いた非変性のシングルステップ精製を行えます。
  • DNA-タンパク質またはタンパク質-タンパク質の相互作用の研究に有用です。
  • 市販されているベクターシステムには,タンパク質配列とタグとの間にプロテアーゼ切断部位がよく含まれます。
  • 溶解性を高め,融合タンパク質を安定させ,タンパク質分解から保護します。
  • 翻訳開始のサポートにより,遺伝子発現を上方制御することができます。
  • 適切な発現系は,E. coli,哺乳動物細胞,酵母,または昆虫細胞です。

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品名 特異性 免疫動物 クローン名 適用 容量 商品コード
Anti-GST-tag Antibody GSTタグ マウス
(モノクローナル)
F50-3D12.2 WB 25μg 910GST
100μg 910GSTL

WB:ウエスタンブロッティング


抗GSTタグ抗体を用いたウエスタンブロッティング像

抗GSTタグ抗体を用いたウエスタンブロッティング像


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抗HAタグ抗体(Anti-HA-tag Antibody)

HA(Hemagglutinin)タンパク質タグとは

  • ヒトインフルエンザ血球凝集素分子(98~106 aa)に由来します。
  • 8 aaで構成され,分子量約1 kDaになります。
  • タンパク質の構造や機能にはほとんど影響しません。
  • 免疫反応性が高くなっています。
  • 標的タンパク質のN末端またはC末端に融合します。
  • 穏やかな条件下で分離・精製を行えます。
  • in vitroおよびin vivoで検出および特性評価が行われています。
  • タンパク質コード配列内への挿入が可能です。

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品名 特異性 免疫動物 クローン名 適用 容量 商品コード
Anti-HA-tag Antibody HAタグ マウス
(モノクローナル)
12CA5 WB 25μg 9100HA
100μg 9100HAL

WB:ウエスタンブロッティング


抗HAタグ抗体を用いたウエスタンブロッティング像

抗HAタグ抗体を用いたウエスタンブロッティング像


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抗c-mycタグ抗体(Anti-c-myc-tag Antibody)

c-mycタンパク質タグとは

  • c-myc遺伝子に由来する11 aa(1.2 kDa)の小型エピトープタグです。
  • バクテリア,酵母,哺乳類細胞,昆虫細胞に有効です。
  • 標的タンパク質の検出や,細胞内での発現レベルのモニタリングに有用です。
  • 複数コピーにより,シグナル強度を高めることができます。
  • 検出に酵素標識二次抗体を使用した場合,特異性が高くなります。
  • アフィニティー精製に適しています。
  • 溶出は低pHで行われ,これはタンパク質の活性に影響を与える可能性があります。

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品名 特異性 免疫動物 クローン名 適用 容量 商品コード
Anti-c-myc-tag Antibody c-mycタグ マウス
(モノクローナル)
9E10 ELISA,FCM,IP,WB 25μg 910MYC
100μg 910MYCL

FCM:フローサイトメトリー,IP:免疫沈降,WB:ウエスタンブロッティング


抗c-mycタグ抗体を用いたウエスタンブロッティング像

抗c-mycタグ抗体を用いたウエスタンブロッティング像


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抗Strepタグ抗体(Anti-Strep-tag Antibody)

Strep(Streptavidin)タンパク質タグとは

  • オクタペプチド(Octapeptide)で構成され,分子量約1 kDaになります。
  • タンパク質の適切な折りたたみ(Folding)や生物活性に干渉しません。
  • C末端またはN末端に融合します。
  • ビオチン化マトリックスまたはストレプトアビジンカラムのいずれかを使用して精製を行えます。
  • タンパク質間相互作用を含む機能性タンパク質の研究に有用です。
  • タンパク質分解切断に対して安定な場合が多くなっています。
  • バクテリア,酵母,植物,哺乳類細胞,昆虫細胞での発現に成功しています。

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品名 特異性 免疫動物 クローン名 適用 容量 商品コード
Anti-Strep-tag Antibody Strepタグ マウス
(モノクローナル)
C23.21 WB 25μg 910STR
100μg 910STRL

WB:ウエスタンブロッティング


抗Strepタグ抗体を用いたウエスタンブロッティング像

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抗6-Hisタグ抗体(Anti-6-His-tag Antibody)

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抗DDDDKタグ抗体(Anti-DDDDK-tag Antibody)

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抗GSTタグ抗体(Anti-GST-tag Antibody)

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抗HAタグ抗体(Anti-HA-tag Antibody)

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抗Strepタグ抗体(Anti-Strep-tag Antibody)

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Anti-Strep-tag, Mouse-Mono(C23.21)
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