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新型コロナウイルス中和抗体測定キット SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection ELISA Kit
(Cayman社 )

掲載日情報:2020/11/02 現在Webページ番号:69591

試料中の抗新型コロナウイルス(Anti-SARS-CoV-2)中和抗体を比色法により検出、または半定量する競合ELISAキットです。SARS-CoV-2のspike S1 RBDタンパク質とACE2間の相互作用の中和抗体の測定に最適です。

検量線例

SARS-CoV-2中和抗体検量線例

SARS-CoV-2中和抗体検量線例

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新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)とは

SARS-CoV-2の基本構造

重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2(SARS-CoV-2, Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2)は、エンベロープを有するプラス鎖RNAウイルスであり、βコロナウイルス属に属します1,2。SARS-CoV-2は、COVID-19の発症原因であり、主に発熱、咳、息切れを特徴とする呼吸器疾患であり、生命を脅かす合併症を引き起こす可能性があります3~5。SARS-CoV-2ゲノムは、約30キロベースの塩基対が含まれており、表面糖タンパク質、エンベロープ、膜、ヌクレオカプシドの4つの構造タンパク質をコードしています1,2

SARS-CoV-2のSpike糖タンパク質とは

SARS-CoV-2のスパイク糖タンパク質としても知られる表面糖タンパク質は、ビリオンの外皮にあります1。これは、他のSARS-CoVには見られないフューリンS-切断部位によって分割されたS1およびS2サブユニットで構成されています6,7。S1サブユニットには、フューリンとTMPRSS2によるスパイク糖タンパク質の事前の活性化後にカルボキシペプチダーゼアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)に結合するレセプター結合ドメイン(RBD)が含まれています。RBDは、S1/S2とST部位でそれぞれ切断して宿主細胞膜とウイルスの融合を促進します8~12。このように、ACE2はSARS-CoV-2の機能的レセプターとして機能します。

ACE2とは

ACE2は、血管内皮細胞だけでなく、腎臓、心臓、肺、小腸、肝臓の上皮細胞にも発現しており13、アンギオテンシンⅡを血管拡張性および抗炎症性ペプチドアンギオテンシンに変換することにより、アンギオテンシンⅡを介したシグナル伝達の負の調節因子として作用します1~7, 14。ACE2は、SARS-CoV-2結合によってダウンレギュレートされ、アンジオテンシンの保護効果を破壊します1~7

SARS-CoV-2とACE2との相互作用と中和抗体について

SARS-CoV-2-ACE2の相互作用は、ウイルス感染を減らすための潜在的な標的です。組換え体ヒト可溶性ACE2は、SARS-CoV-2の細胞への付着を阻害します。また、回復期血漿中の抗体またはSARS-CoV-2スパイク糖タンパク質に対して産生された抗体は、in vitroでのウイルス侵入を減少させます8,15。SARS-CoV-2感染は中和抗体の産生をもたらし、SARS-CoV-2 spike RBDに結合して、症状の発症から約4~10日後にウイルスの侵入と感染を防ぎます16,17。SARS-CoV-2スパイク糖タンパク質特異的IgG抗体の血漿レベルは、症状の発症後少なくとも4週間は増加します16,18。血漿中のSARS-CoV-2抗体レベルは、症状の有無にかかわらず感染後2~3か月で減少し始め、一部の無症状の個人では完全に消失します19。SARS-CoV-2に対する中和抗体の検出は、宿主における特定の抗体の寿命と有効性を評価する上で重要です。

参考文献

  1. Kandeel, M., Ibrahim, A., Fayez, M., et al., "From SARS and MERS CoVs to SARS-CoV-2: Moving toward more biased codon usage in viral structural and nonstructural genes.", J. Med. Virol., 92(6), 660~666 (2020).
  2. Lu, R., Zhao, X., Li, J., et al., "Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus: implications for virus origins and receptor binding.", Lancet, 395(10224), 565~574 (2020).
  3. Meo, S.A., Alhowikan, A.M., Al-Khlaiwi, T., et al., "Novel coronavirus 2019- nCoV: Prevalence, biological and clinical characteristics comparison with SARS-CoV and MERS-CoV.", Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci., 24(4), 2012~2019 (2020).
  4. Klok, F.A., Kruip, M.J.H.A., van der Meer, N.J.M., et al., "Incidence of thrombotic complications in critically ill ICU patients with COVID-19.", Thromb. Res., 191, 145~147 (2020).
  5. Yang, F., Shi, S., Zhu, J., et al., "Analysis of 92 deceased patients with COVID-19.", J. Med. Virol. (2020).
  6. Liu, Z., Xiao, X., Wei, X., et al., "Composition and divergence of coronavirus spike proteins and host ACE2 receptors predict potential intermediate hosts of SARS-CoV-2.", J. Med. Virol., 92(6), 595~601 (2020).
  7. Walls, A.C., Park, Y.-J., Tortorici, M.A., et al., "Structure, function, and antigenicity of the SARS-CoV-2 spike glycoprotein.", Cell, 181(2), 281~292 (2020).
  8. Hoffmann, M., Kleine-Weber, H., Schroeder, S., et al., "SARS-CoV-2 cell entry depends on ACE2 and TMPRSS2 and is blocked by a clinically proven protease inhibitor.", Cell, 181(2), 271~280 (2020).
  9. Yan, R., Zhang, Y., Li, Y., et al., "Structural basis for the recognition of SARS-CoV-2 by full-length human ACE2.", Science, 267(6485), 1444~1448 (2020).
  10. Wrapp, D., Wang, N., Corbett, K.S., et al., "Cryo-EM structure of the 2019- nCov spike in the prefusion conformation.", Science, 367(6483), 1260~1263 (2020).
  11. Bestle, D., Heindl, M.R., Limburg, H., et al., "TMPRSS2 and furin are both essential for proteolytic activation of SARS-CoV-2 in human airway cells.", Life Sci. Alliance, 3(9), e202000786 (2020).
  12. Shang, J., Wan, Y., Luo, C., et al., "Cell entry mechanisms of SARS-CoV-2.", PNAS, 117(21), 11727~11734 (2020).
  13. Perlot, T. and Penninger, J.M. "ACE2-From the renin-angiotensin system to gut microbiota and malnutrition.", Microbes Infect., 15(13), 866~873 (2013).
  14. Verdecchia, P., Cavallini, C., Spanevello, A., et al., "The pivotal link between ACE2 deficiency and SARS-CoV-2 infection.", Eur. J. Intern. Med., 76, 14~20 (2020).
  15. Monteil, V., Kwon, H., Prado, P., et al., "Inhibition of SARS-CoV-2 infections in engineered human tissues using clinical-grade soluble human ACE2.", Cell, 181(4), 1~9 (2020).
  16. Wang, A., Zhang, L., Sang, L., et al., "Kinetics of viral load and antibody response in relation to COVID-19 severity, J. Clin. Invest., 130(10), 5235~5244 (2020).
  17. Xiang, F., Wang, X., He, X., et al., "Antibody detection and dynamic characteristics in patients with coronavirus disease 2019.", Clin. Infect. Dis., ciaa461 (2020).
  18. Li, L., Tong, X., Chen, H., et al., "Characteristics and serological patterns of COVID-19 convalescent plasma donors: Optimal donors and timing of donation.", Transfusion, DOI: 10.1111/trf.15918 (2020).
  19. Long, Q.-X., Tang, X.-J., Shi, Q.-L. et al., "Clinical and immunological assessment of asymptomatic SARS-CoV-2 infections.", Nat. Med., 26, 1200~1204 (2020).

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測定原理

抗ウサギFc特異的抗体でプレコートされたプレートと、それに結合する組換え体ウサギFcタグ融合SARS-CoV-2 spike S1 RBDタンパク質を使用します。また、スタンダードとしてSARS-CoV-2 spike RBDとACE2タンパク質間の相互作用に干渉するSARS-CoV-2中和抗体を用いています。

SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection ELISA Kitの測定原理1

試料中のSARS-CoV-2中和抗体の存在に応じて、SARS-CoV-2スパイクS1RBDとACE2の間の結合を阻害され、その結果、吸光度(OD 450 nm)が減少します。

SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection ELISA Kitの測定原理2

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特長

  • COVID-19の陽性患者と陰性のヒトの試料を用いて検証済みです。
  • 測定は迅速で、4時間以内に結果が得られます。
  • 試料中のSARS-CoV-2中和抗体の検出のほか、キットに含まれるSARS-CoV-2 neutralizing antibody stanbdardにより、およその中和抗体の半定量を行うことができます。
  • フォーマット:96 well plate
  • 測定動物種:ヒト
  • 測定試料:血清、血漿
  • 測定試料数:44 samples(二重試験)/28 samples(三重試験)
  • 測定原理:競合ELISA法
  • 測定方法:比色
  • 測定波長:450 nm
  • 測定範囲:7.8~1,000 ng/ml
  • 感度(80% B/B0):41.3 ng/ml
  • 検出限界:15.4 ng/ml

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ヒト血清試料と血漿試料の相関性の検証例

本製品を用いて、ヒト血清試料と血漿試料の相関性を検証するために、SARS-CoV-2陽性患者の血清および血漿を様々な希釈率において測定した。本試験結果は一例であり、試料中の中和抗体のSpike S1 RBDに対する親和性の違いにより異なる結果が得られる場合がある。

ヒト血清試料と血漿試料の相関性の検証例

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キット内容

  • SARS-CoV-2 spike reagent concentrate
  • ACE2 reagent concentrate
  • SARS-CoV-2 neutralizing antibody standard
  • Anti-His-HRP conjugate
  • SARS-CoV-2 neutralizing antibody positive/negative controls
  • Mouse anti-rabbit IgG-coated plate
  • Immunoassay buffer C/D concentrates
  • Wash buffer concentrate
  • Polysorbate 20
  • TMB substrate solution
  • HRP stop soplution
  • 96-well cover sheet

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関連製品

品名をクリックすると製品の詳細、商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 商品コード 測定試料 測定方法 測定波長 製品概要
SARS-CoV-2 Spike-ACE2 Interaction Inhibitor Screening Assay Kit 502050 分子化合物、天然物、タンパク質(抗体を含む)などの阻害(候補)物質 比色 450 nm 新型コロナウイルス(Anti-SARS-CoV-2)のspike RBDとACE2間における相互作用の阻害物質を比色法により迅速かつ高効率でスクリーニングするキットです。


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価格

[在庫・価格 :2024年04月27日 20時55分現在]

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SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection ELISA Kit (Strip Plate)
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別名:Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 Neutralizing Detection
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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