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新型コロナウイルス由来プロタンパク質転換酵素の阻害物質探索研究に! CoviDrop SARS-CoV-2 Targeted Proprotein Convertase Kitシリーズ

掲載日情報:2020/09/18 現在Webページ番号:69566

新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)由来フーリン切断部位(FCS、Furin Cleavage Site)が、フーリン(Furin)またはその他のセリンプロテアーゼにより切断される反応の阻害物質(低分子化合物・ペプチド・抗体)を比色法により迅速かつハイスループットでスクリーニングするキットです。FCSを直接ブロックする物質および、酵素活性を阻害する物質の双方のスクリーニングに使用できます。初期型およびP681R変異株ウイルス由来のFCSを基質とした製品があります。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


測定例

Furin Cleavage Site(Wild Type) Blocker/Inhibitor Screening Kit(#D-1009

SARS-CoV-2(初期型)由来FCSのプロテアーゼ切断反応について、フーリン部位ブロッキング抗体(FbAB)による阻害の確認

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A. SARS-CoV-2(初期型)由来FCSのプロテアーゼ切断反応について、フーリン部位ブロッキング抗体(FbAB)による阻害の確認

  • 1:Furin:8 ng/well
  • 2:Furin:16 ng/well
  • 3:Tripsin:10 ng/well
  • FbAB:200 ng/well
SARS-CoV-2(初期型)由来FCSのプロテアーゼ切断反応について、Aprotinin(Trypsin阻害物質)による阻害の確認

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B. SARS-CoV-2(初期型)由来FCSのプロテアーゼ切断反応について、Aprotinin(Trypsin阻害物質)による阻害の確認

  • 1:Furin:16 ng/well
  • 2:Trypsin:10 ng/well
  • Aprotinin:500 ng/well

Furin Cleavage Site(P681R Mutation) Blocker/Inhibitor Screening Kit(#D-1010

SARS-CoV-2(P681R変異株)由来FCSのプロテアーゼ切断反応について、フーリン部位ブロッキング抗体(FbAB)による阻害の確認

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C. SARS-CoV-2(P681R変異株)由来FCSのプロテアーゼ切断反応について、フーリン部位ブロッキング抗体(FbAB)による阻害の確認

  • 1:Furin:8 ng/well
  • 2:Furin:16 ng/well
  • 3:Tripsin:10 ng/well
  • FbAB:200 ng/well
SARS-CoV-2(P681R変異株)由来FCSのプロテアーゼ切断反応について、フーリン部位ブロッキング抗体(FbAB)による阻害の確認

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D. SARS-CoV-2(P681R変異株)由来FCSのプロテアーゼ切断反応について、フーリン部位ブロッキング抗体(FbAB)による阻害の確認

  • 1:Furin:16 ng/well
  • 2:Trypsin:10 ng/well
  • Aprotinin:500 ng/well

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新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)の感染とProprotein Convertase(PC)について

新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)スパイク糖タンパク質は、S1 / S2サブユニット間の境界にフーリン(furin)/ Protein Convertase(PC)切断部位を持っていることが示されています。これは、気道上皮における宿主細胞および細菌から分泌されるフーリンおよび/またはフーリン様PCによって切断される可能性があります1,2。SARS-CoV-2の細胞侵入はSARS-CoVとは異なり、フーリンやフーリン様PCによって事前に活性化することで、侵入のための標的細胞プロテアーゼへの依存を減少させます3。Sタンパク質の切断活性化は、ACE2へのSARS-CoV-2スパイク媒介ウイルス結合、細胞間融合、およびヒト肺細胞へのウイルス侵入に不可欠であることが明らかにされています4,5。H5N1などのフーリン/PC切断部位を含む他のウイルスが、複製を増加させ、より病原性を増大させることも観察されました。

SARS-CoV-2フーリン/PCの切断部位は、単一のコア領域SPRRAR│SV(8 aa、P6-P2')を含むことが判明しています。P2またはP3の位置は正に帯電した残基(Arg)であり、別の残基は疎水性(Ala)であるため、コア領域は非常にユニークです。これらの要因により、この部位はフーリンまたはフーリン様PCによって切断されます。切断効率は、マトリプターゼ、プラスミン、ヒト気道トリプシン(HAT)、TMPRSS2などの二塩基性アミノ酸部位を標的とする他のセリンプロテアーゼによって促進されます。

PCによるSARS-CoV-2 S1 / S2の切断がSARS-CoV-2の細胞への侵入および複製を増加させ、結果的にはCOVID-19のより高い病原性を発現します。そのためSARS-CoV-2S1 / S2部位特異的切断PCまたはプロテアーゼの促進を阻害する物質のスクリーニングは重要です。

また、P681R変異株では、非極性のプロリン(P)を正電荷のアルギニン(R)に変異させて多塩基性アミノ酸部位を形成することで、S1 / S2境界の開裂をさらに増加させ、ヒト気道でのウイルス複製と感染を増加させる可能性があります6。P681R変異は、COVID-19の世界的パンデミックにおける優勢株であるδ株の特徴であり、初期型ウイルスのスパイクタンパク質を用いたワクチンに対するウイルスの耐性を高めることにつながります7

SARS-CoV-2感染機構

細胞侵入時のPCと他のプロテアーゼによるSARS-CoV-2スパイクタンパク質の切断

参考文献

  1. Andersen, K.G., et al., "The proximal origin of SARS-CoV-2", Nat. Med., 26(4), 450~452 (2020). [PMID:32284615]
  2. Coutard, B., et al., "The spike glycoprotein of the new coronavirus 2019-nCoV contains a furin-like cleavage site absent in CoV of the same clade", Antiviral Research, 176, 104742(2020). [PMID:32057769]
  3. Shang, J., et al.,"Cell entry mechanisms of SARS-CoV-2", Proc. Natl. Acad. Sci., 117(21), 11727~11734 (2020). [PMID:32376634]
  4. Hoffmann, M., et al., "A Multibasic Cleavage Site in the Spike Protein of SARS-CoV-2 Is Essential for Infection of Human Lung Cells", Mol. Cell, 78(4), 779~784 (2020). [PMID:32362314]
  5. Hoffmann, M., et al., "SARS-CoV-2 Cell Entry Depends on ACE2 and TMPRSS2 and Is Blocked by a Clinically Proven Protease Inhibitor", Cell, 181(2), 271~280 (2020). [PMID:32142651]
  6. Saito, A., et al., "SARS-CoV-2 spike P681R mutation, a hallmark of the Delta variant, enhances viral fusogenicity and pathogenicity", BioRxiv. , Aug. (2021).(reference
  7. Planas, D., et al., "Reduced sensitivity of SARS-CoV-2 variant Delta to antibody neutralization", Nature, 596(7871), 276~280 (2021). [PMID:34237773]

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製品の種類

商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 CoviDrop SARS-CoV-2 Specific Furin Cleavage Site Blocker/Inhibitor Screening Kit
Wild Type P681R Mutation
製品概要 初期型SARS-CoV-2由来フーリン切断部位の阻害物質スクリーニング用キット P681R変異を有するSARS-CoV-2変異株(δ株など)のフーリン切断部位の阻害物質スクリーニング用キット
アッセイ数 96 assays 192 assays 96 assays 192 assays
商品コード D-1009-096 D-1009-192 D-1010-096 D-1010-192
測定試料 フーリンを切断する酵素の阻害(候補)物質
測定方法 比色
測定波長 450 nm(補正波長:655 nm)
測定時間 1時間10分

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特長

  • 操作は迅速、簡便です。
  • バックグラウンドは極めて低く抑えられており、簡便、正確で信頼性が高く、一貫性のあるデータが得られます。
  • FCSを直接ブロックする物質および、酵素活性を阻害する物質の双方のスクリーニングに使用できます。
  • マイクロプレートはストリップウェルフォーマットで、マニュアル操作およびハイスループット解析のいずれにも対応します。

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操作方法概略

CoviDrop SARS-CoV-2 Spike-ACE2 Binding Inhibitor Screening Fast Kit workflow

  1. N末端にHisタグ、C末端にビオチンを融合したSARS-CoV-2特異的な基質は、N末端のHisタグとウェルにプレコートされたNi-NTAを介して結合している。
  2. PC(Protein Convertase)の添加により、S1/S2部位において基質の切断が起こる。
  3. 洗浄後に、基質C末端のビオチンと反応してシグナルを生じる切断検出溶液(CDS)を添加する。
  4. マイクロプレートリーダーを用いて吸光度(OD 450nm)を測定する。PCの切断活性に反比例し、シグナルは減少する。阻害物質存在下では、PCによる切断活性が抑制されるため、シグナルの減少度は低下する。

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キット内容

  • Wash buffer
  • PC assay buffer
  • Positive control enzyme
  • Cleavage detection solution
  • Developer solution
  • Stop solution
  • 8-Well assay strips (with Frame)*
  • 8-Well blank control strips (Green trimmed)

キットにより内容は異なります。

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Epigentek Group社の新型コロナウイルス研究用キット

表中の製品名をクリックすると詳細をご覧になれます。

測定対象 検出方法 製品名
SARS-CoV-2に対する抗体 中和抗体 ELISAに似た手法 比色 SeroFlash SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Assay Fast Kit
IgG / IgM抗体 Indirect ELISA 比色 SeroFlash SARS-CoV-2 IgG / IgM ELISA Fast Kit
ラテラルフロー法
(イムノクロマト)
呈色 SeroFlash SARS-CoV-2 IgM / IgG Antibody Detection Kit
SARS-CoV-2スパイクタンパク質とヒトACE2の結合 結合を阻害する抗体や低分子化合物のスクリーニング スパイクタンパク質、ACE2、阻害物質で競合反応をさせた後、検出用抗体、発色試薬を順次加える 比色 CoviDrop SARS-CoV-2 Spike-ACE2 Binding Inhibitor Screening Fast Kit
ヒト由来試料と阻害物質を加えた条件での阻害率測定 比色 CoviDrop SARS-CoV-2 Spike-ACE2 Binding Activity / Inhibition Assay Kit
SARS-CoV-2由来プロタンパク質転換酵素(PC) PCを阻害する低分子化合物のスクリーニング キットに含まれるPC基質と発色試薬の反応による検出 比色 CoviDrop SARS-CoV-2 Specific Furin Cleavage Site Inhibitor Screening Fast Kit
PC活性または阻害物質の阻害率 比色 CoviDrop SARS-CoV-2 Specific Furin Cleavage Site Activity/Inhibition Assay Kit
SARS-CoV-2フーリン切断部位(FCS) 初期型ウイルス由来FCS切断の阻害物質のスクリーニング キットに含まれるFCS基質と発色試薬の反応による検出 比色 CoviDrop SARS-CoV-2 Specific Furin Cleavage Site (Wild Type) Inhibitor Screening Fast Kit
P681R変異ウイルス(δ株を含む)由来FCS切断の阻害物質のスクリーニング 比色 CoviDrop SARS-CoV-2 Specific Furin Cleavage Site(P681R Mutation)Blocker/Inhibitor Screening Kit

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価格

CoviDrop SARS-CoV-2 Specific Furin Cleavage Site (Wild Type) Blocker/Inhibitor Screening Kit

[在庫・価格 :2024年03月29日 20時15分現在]

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CoviDrop SARS-CoV-2 Specific Furin Cleavage Site(Wild Type) Blocker/Inhibitor Screening Kit, 96 Assays
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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