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イメージング質量分析でのN結合型糖鎖の解析に! Basic N-Glycan Imaging Kit

掲載日情報:2022/08/09 現在Webページ番号:69476

組織切片上のN結合型糖鎖(N-グリカン、N-Glycan)をイメージング質量分析によって解析するためのキットです。
キットにはN結合型糖鎖の処理に必要なPNGase Fやイメージング質量分析のためのマトリックス試薬、ポジティブコントロールが含まれます。また、キットをご購入された方はビデオプロトコルやヒトN結合型糖鎖構造のデータベースなど、豊富な情報をご参照いただけます。

本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
Kitパッケージイメージ

イメージング質量分析原理

本キットを用いたN結合型糖鎖解析の原理

イメージング質量分析の分析例

本キットを用いたN結合型糖鎖解析例

組織切片に糖切断酵素であるPNGase Fを噴霧し、N結合型糖鎖を組織表面から切断する。次いでマトリックス(CHCA)を塗布し、レーザー照射によりN結合型糖鎖をイオン化し、N結合型糖鎖の分布をイメージング質量分析で解析・可視化する。


N結合型糖鎖とGlycoPath社のPNGase F

N結合型糖鎖とは

N結合型糖鎖は、Nグリコシド結合を介してタンパク質のアスパラギン側鎖に共有結合しているオリゴ糖です。糖の種類、付加、分岐により、多種多様な構造が形成されます。インテグリンやTGF-β、EGFRなど細胞表面レセプターのほとんどはN-グリコシル化されています。修飾された糖鎖は、タンパク質のフォールディング、タンパク質の安定化、糖鎖ー糖鎖間の相互作用、糖鎖ータンパク質間の相互作用、糖タンパク質ー糖タンパク質関の相互作用などに影響を与え、様々な生理学的プロセスに関与しています。そのため、この糖鎖の変化はがんや糖尿病など様々な疾患に関係していることが知られます。


PNGase F

PNGase Fは、アスパラギン側鎖に結合したN型糖鎖を特異的に切断する糖切断酵素で、タンパク質のN型糖鎖修飾の主たる解析ツールとして使用されています。

本キットに含まれるPNGaseF PRIMEは、野生型に比べて高い活性と安定性を持ち、広範囲の種類のN型糖鎖を認識・切断できる活性を持ちます。また、変性処理せずにN型糖鎖の切断が可能なため、組織サンプルを用いたイメージング質量分析にも適しています。

アスパラギン側鎖に結合したN型糖鎖を特異的に切断する糖切断酵素の図



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特長

  • PNGaseF PRIMEはイメージング質量分析で検証済みです。
  • 迅速かつシンプルなワークフローです。
  • わかりやすいビデオプロトコル、m/z値や推定構造を含んだ糖鎖データベースをダウンロードできます。


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操作方法概略


実験ワークフローを示した図
  1. 試料の準備(FFPE切片、TMAスライド、凍結切片)
  2. 脱パラフィン
  3. 抗原賦活化
  4. TMSprayerを使用したPNGaseFの塗布
  5. 37℃2時間インキュベーション
  6. TMSprayerを使用したMatrixの塗布
  7. イメージング質量分析

プロトコルには新鮮凍結切片の記載もありますが、現時点で検証されているのはFFPE切片のみですのでご注意ください。



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キット内容

  • PNGaseF PRIME
  • PNGaseF activation solution
  • Matrix(CHCA)
  • Positive control protein
  • Positive control protein buffer
  • メンバーポータルアクセス用パスワード

その他、詳細プロトコルビデオプロトコルデータベース情報メンバーポータルサイトからダウンロードできます。ダウンロードには製品に同梱されているパスワードが必要です。



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使用例

甲状腺がんの切片におけるN結合型糖鎖の分布

m/z値ごとの各N結合型糖鎖の全平均スペクトル

m/z値ごとの各N結合型糖鎖の全平均スペクトル

タイル表示による糖鎖イメージング例

タイル表示による糖鎖イメージング例

腫瘍微小環境(TME)におけるN結合型糖鎖の違い

同一切片上の隣接非腫瘍組織(Adjacent nontumor)、退形成性腫瘍領域(Anaplatic)、壊死領域(Necrotic)における各N結合型糖鎖の量を比較した。

組織顕微鏡像

隣接非腫瘍組織ではハイマンノース型糖鎖量が多く、腫瘍部位や壊死領域と区別

二分岐のN結合型糖鎖は壊死領域に多く、腫瘍部位、非腫瘍隣接部位と区別

Tetrantennaryフコシル化構造は非腫瘍隣接部位で発現が低く、腫瘍部位や壊死領域での高く発現

  • A)組織顕微鏡像。緑枠:隣接非腫瘍組織、赤枠:退形成性腫瘍領域、黒枠:壊死領域
  • B)隣接非腫瘍組織ではハイマンノース型糖鎖量が多く、腫瘍部位や壊死領域と区別できる。
  • C)二分岐のN結合型糖鎖は壊死領域に多く、腫瘍部位、非腫瘍隣接部位と区別できる。
  • D)Tetrantennaryフコシル化構造は非腫瘍隣接部位で発現が低く、腫瘍部位や壊死領域での発現が高い。

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ウェビナー

GlycoPath社による、疾患の診断および予後における糖鎖およびその有用性についてのウェビナーです。
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価格表

[在庫・価格 :2024年09月19日 17時15分現在]

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組織切片上のN結合型糖鎖をイメージング質量分析によって解析するためのキット。キット内容:PNGaseF PRIME,PNGaseF activation solution,Matrix(CHCA),Positive control protein,Positive control protein buffer。
法規制等 医薬用外劇物
保存条件 室温,-20℃ 法規備考
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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