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シアル酸末端糖鎖の特異的検出に SiaFind Lectenz

掲載日情報:2020/12/17 現在Webページ番号:69457

SiaFind Lectenz はシアル酸末端糖鎖(Pan-またはα2,3結合Neu5Ac)を特異的に検出するレクチン様糖鎖結合タンパク質です。天然のシアル酸結合レクチンに比べシアル酸末端に対する高い特異性を有し,従来のレクチンでは検出できなかったシアル酸糖鎖構造の検出も可能です。一次抗体のようにさまざまなアプリケーション(ウエスタンブロット,免疫染色,フローサイトメトリー,アフィニティ精製など)に活用できます。

本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

Lectenz とシアル酸

Lectenz はlectin-like, enzyme-derived proteinsの略で,タンパク質コンピューターシミュレーション技術を駆使して開発された人工デザインタンパク質です。糖鎖末端構造に対する特異性の高い炭水化物プロセッシング酵素群(Carbohydrate-processing enzymes)をもとにコンピューターによる指向性進化法(Computationally guided directed evolution)で改変することでレクチンのような糖鎖結合能を有し,天然のレクチンに比べ糖鎖構造および糖鎖結合様式に対する高い特異性を示します。
シアル酸(Sialic acid)はノイラミン酸修飾体の総称で,主にN-アセチルノイラミン酸(N-acetylneuraminic acid; Neu5Ac)やN-グリコリルノイラミン酸(N-glycolylneuraminic acd; Neu5Gc)が知られ,N型糖鎖の末端によくみられる構造です。SiaFind Lectenz はシアル酸の検出を目的に開発されたLectenz でシアル酸末端糖鎖全般を認識するPan-Specific Lectenz およびα2,3結合Neu5Ac末端特異的なα2,3-specific Lectenz があります。SiaFind Lectenz はシアル酸末端構造を有する糖タンパク質や糖ペプチド鎖およびシアル酸末端糖鎖の検出,分離,濃縮に優れ,シアル酸末端糖鎖の新たな解析ツールとして期待できます。SiaFind Lectenz にはN末端6×His-tagまたはビオチンが付与されており,抗6×His抗体や抗ビオチン抗体/ストレプトアビジン系で検出できるため,一次抗体のようにウエスタンブロット,免疫染色,フローサイトメトリーなどにご活用いただけます。


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ラインナップ

Lectenzの種類 特異性 修飾 検出 商品コード
SiaFind Pan-Specific Lectenz α2,3/α2,6/α2,8結合Neu5Ac/Neu5Gc N末端6×His-tag 抗6×His-tag抗体 SK0501
N末端6×His-tag + Biotin Streptavidin conjugate or 抗biotin抗体 SK0501B
SiaFind α2,3-specific Lectenz α2,3結合Neu5Ac N末端6×His-tag 抗6×His-tag抗体 SK2301
N末端6×His-tag + Biotin Streptavidin conjugate or 抗biotin抗体 SK2301B

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特長

  • SiaFind Pan-Specific LectenzはNeu5Ac/Neu5Gc末端構造およびα2,3/α2,6/α2,8結合様式に広く結合します。
  • SiaFind α2,3-specific LectenzはNeu5Ac-α2,3-Galのみに反応し,Neu5Gc-α2,3-Galやα2,6/α2,8結合には反応しません。
    枝分かれしたシアル酸構造(例 sialyl Lewis A/X)には結合しません。
  • それぞれ指定のシアル酸に対する高い特異性を示し,他の末端糖鎖構造およびペプチドにはほとんど結合が認められていません。
  • 天然由来のシアル酸結合レクチン(Sambucus Nigra Lectin (SNA/EBL),Maackia Amurensis Lectin (MAL))に比べより広範なシアル酸末端含有糖鎖構造を検出できます。
  • 一次抗体と同様にウエスタンブロット,免疫染色,フローサイトメトリー,アフィニティ精製に利用できます。

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SiaFind Lectenzの特異性

さまざまなシアル酸末端糖鎖がスポットされた糖鎖アレイを用いて結合特異性を評価した。

SiaFind Pan-Specific Lectenz と SNAレクチンの比較

SiaFind Pan-Specific LectenzはSNAレクチンに比べシアル酸の種類(Neu5Gc, Neu5Ac),結合様式(α2,3/α2,6/α2,8)問わず幅広いシアル酸末端を有する糖鎖構造を認識していることが分かる。なお,シアル酸を含まないガラクトース(Gal)末端糖鎖には反応していないことが分かる。

SiaFind Pan-Specific Lectenzと SNAレクチンの結合特異性比較

SiaFind α2,3-specific LectenzとMAL-Ⅱレクチンの比較

SiaFind α2,3-specific LectenzはMAL-Ⅱレクチンに比べ,Neu5Ac特異的かつ,より広いα2,3結合Neu5Ac末端含有糖鎖構造を認識していることが分かる。なお,シアル酸を含まないガラクトース(Gal)末端糖鎖には反応していないことが分かる。

SiaFind α2,3-specific LectenzとMAL-Ⅱレクチンの結合特異性比較

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アプリケーション例

ウェスタンブロットによるシアル酸末端糖鎖修飾タンパク質の検出

シアル酸末端糖鎖(α2,3結合およびα2,6結合)を有するfetuin,BSAにシアル酸末端糖鎖を付与した3'-sialyllactose-BSA (3'SL-BSA),6'-sialyllactose-BSA (6'SL-BSA),およびネガティブコントロールとしてBSAをSDS-PAGEで分離後,メンブレンに転写し,SiaFind Lectenz(#SK0501および#SK2301)を用いてウェスタンブロットを行った。検出はHRP標識抗6×His抗体を使用した。SiaFind Pan-specific Lectenzはfetuin, 3'SL-BSA, 6'SL-BSAを検出した。一方SiaFind α2,3-specific Lectenzはfetuinおよび3'SL-BSAを検出したが,6'SL-BSAは検出せずα2,3結合シアル酸特異的に反応していることが分かる。

SiaFind Lectenzを用いたウエスタンブロットによるシアル酸末端糖鎖修飾タンパク質の検出

免疫組織染色によるシアル酸末端糖鎖の検出と特異性検証

正常ヒト大腸組織切片にビオチン修飾SiaFind Lectenzおよびレクチン(MALⅠ,SNA)を処理し,HRP標識ストレプトアビジンおよびDAB色素を用いて検出を行った。レクチンを用いた従来法では事前にノイラミニダーゼ処理してシアル酸を分解してもシグナルが維持されているのに対し,SiaFind Lectenzはノイラミニダーゼ処理により著しくシグナルが減少していることから,SiaFind Lectenzは従来レクチンに比べ高いシアル酸特異性を示すことがわかる。

SiaFind Pan-specific Lectenzを用いた免疫組織染色によるシアル酸末端糖鎖の検出
SiaFind α2,3-specific Lectenzを用いた免疫組織染色によるシアル酸末端糖鎖の検出

免疫細胞染色法による細胞表面シアル酸末端糖鎖の検出

培養ヒト皮膚細胞にビオチン化SiaFind Pan-specific Lectenzを処理し,蛍光標識ストレプトアビジンで検出を行った。細胞表面から蛍光シグナルが観察され,事前にシアル酸転移酵素阻害物質を添加すると著しくシグナルが減少することからシアル酸を特異的に検出していることが分かる。なお,ネガティブコントロールとして,蛍光標識ストレプトアビジンのみを処理した試料を観察した。

SiaFind Pan-specific Lectenzを用いた免疫細胞染色法による細胞表面シアル酸末端糖鎖の検出

フローサイトメトリーによる細胞表面シアル酸末端糖鎖の定量解析

ヒト肺がん細胞MDA-MB231を蛍光標識したSiaFind Lectenzで処理しフローサイトメトリーで測定した。事前にノイラミニダーゼ処理した細胞では蛍光シグナルが顕著に減少しており,シアル酸特異的に反応していることが分かる。

SiaFind Lectenzを用いたフローサイトメトリーによる細胞表面シアル酸末端糖鎖の定量解析

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キット内容

  • SiaFind Lectenz(凍結乾燥品)1 mg
  • 5×Binding buffer 100 ml

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価格

[在庫・価格 :2021年09月18日 00時14分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
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  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
SiaFind Pan-Specific Lectenz Kit
3~4週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
シアル酸末端糖鎖構造を認識するレクチン様タンパク質Lectenzを用いたシアル酸検出キットです。幅広いシアル酸末端糖鎖に反応し,ウェスタンブロット,免疫染色,フローサイトメトリー,アフィニティー精製に利用できます。N末端6xHis-tagが付与されており,抗6xHis-tag抗体で検出できます。キットには専用の結合バッファーが含まれています。
法規制等
保存条件 室温,-20℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2021年3月1日号 p.17

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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