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タンパク質、抗体、オリゴヌクレオチド複合体作製キット SoluLINK Bioconjugation Kit（Protein, Antibody, Oligonucleotide）

掲載日情報：2020/05/13 現在Webページ番号：69270

ベクターラボラトリーズ /
VECTOR LABORATORIES, INC.
[メーカー略称：VEC]

SoluLINKのバイオコンジュゲーションテクノロジーを用いて、抗体とオリゴヌクレオチド、タンパク質とオリゴヌクレオチド、または2種のタンパク質の複合体を簡便かつ効率的に作製するキットです。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

Figure1

SoluLINKテクノロジーで作製したペプチド-オリゴヌクレオチド複合体のPAGE分析

2つのN末端HyNic修飾ペプチドを5'-4FB修飾22 merオリゴと結合し、ペプチドオリゴ複合体を作製した（Lane 4、5）。複合体形成は、オリゴとペプチドの1：2反応の化学量論を用いて定量した。共役結合の安定性については、PBS中で95℃・2時間の加熱試験を行った（Lane 6、7）。

  1. 5'-4FB 22-mer oligonucleotide
  2. HyNic-peptide 1
  3. HyNic-peptide 2
  4. HyNic-peptide 1 + 5'-4FB 22-mer oligo
  5. HyNic-peptide 2 + 5'-4FB 22-mer oligo
  6. Peptide 1 + 22-mer oligo (incubated at 94°C for 2 hours)
  7. Peptide 2 + 22-mer oligo (incubated at 94°C for 2 hours)

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SoluLINK製品の取り扱い開始のお知らせ

下の画像をクリックすると、SoluLINK標識キットの製品一覧のご案内をご覧いただけます。

SoluLINK製品の取り扱い開始のお知らせ

SoluLINK社製品については、2020年4月よりVector Laboratories社から販売することとなりました。詳細については、当社テクニカルサポート部（試薬担当）までお問い合せ下さい。






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バイオコンジュゲーション ウェビナーシリーズ動画（日本語字幕付き）

①バイオコンジュゲーションとは

②バイオコンジュゲーションの基礎知識とアプリケーション

③SoluLINKバイオコンジュゲーションケミストリーの実例と原理

④SoluLINKバイオコンジュゲーションキット

⑤Q＆A



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Bioconjugation Resource Guide

Bioconjugation Resource Guide

バイオコンジュゲーションの概要、アプリケーションと用途、バイオコンジュゲーションを成功させるためのツールを紹介しています（英語版、32ページ、約8.5Mb）。
ご希望の方は、Vector Laboratories社Webよりダウンロードして下さい。


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SoluLINK標識・バイオコンジュゲーション技術

SoluLINKworkflow

SoluLINKバイオコンジュゲーションシステムのワークフロー

SoluLINKバイオコンジュゲーションテクノロジーは、あらゆる種類の生体分子を迅速かつ低バックグラウンドで標識・結合させることができます。この技術は、HyNicと4FBの反応に基づき、発色性の安定したBis-arylhydrazone-mediated-conjugateを形成します。そのため、吸光度測定によりバッチ間の反応において高い再現性が得られます。

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製品の種類

品名をクリックすると製品の詳細、商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 Antibody-Oligonucleotide
All-in-One Conjugation Kit		 Protein-Oligonucleotide
Conjugation Kit		 Protein-Protein
Conjugation Kit
商品コード A-9202-001 S-9011-1 S-9010-1
結合分子 抗体：オリゴヌクレオチド タンパク質：オリゴヌクレオチド タンパク質：タンパク質
抗体最大標識量 100μg×2 0.5 mg×2 －
キット内容 S-HyNic ● ● ●
S-4FB ● ● ●
Collection tubes ● ● ●
Anhydrous DMF ● ● ●
2-Hydrazinopyridine（HP) reagent ● ● ●
Oligo resuspension solution ● ● －
Modification buffer ● ● －
Affinity magnetic beads ● － ●
Bead wash buffer ● － －
Bead elution buffer ● － －
Red / Yellow / Blue / Brown
cap spin columns		 ● － －
TurboLink catalyst buffer － ● ●
M7K NWCO Zeba spin column － ● ●
2- sulfobenzaldehyde － ● ●
PBS － ● ●
Conjugation buffer － ● ●

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適用

本製品は、以下のような用途に用いることができます。

  • 抗体標識
  • アンチセンス／RNAi
  • アプタマー
  • 免疫療法研究
  • In situ 近接ライゲーションアッセイ
  • ラボ開発テスト（LDT：Laboratory Developed Tests）および測定対象特異的試薬（ASR：Analyte Specific Reagents）

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Antibody-Oligonucleotide All-in-One Conjugation Kit

原理

抗体-オリゴヌクレオチド作製原理

抗体-オリゴヌクレオチド複合体作製原理

特長

  • キットには、1つの抗体－オリゴヌクレオチド複合体を作製するために必要なすべての試薬が含まれています。
  • 未経験者でも使用できるよう、理解しやすい簡易なプロトコルです。
  • 1μmolの合成で、修飾に十分なアミノオリゴが得られます。
  • Specific conjugation calculatorで簡便に結合率の算出が行えます。
  • 高純度でready-to-useの抗体－オリゴヌクレオチド複合体が得られます。
  • 使用可能なオリゴヌクレオチドの鎖長範囲：20～60 bases
  • 使用可能な抗体の動物種：哺乳動物
  • 使用可能な抗体のアイソタイプ：IgG
  • 収量：20～60μg
  • 濃度：0.1～0.3 mg/ml*

＊ 収量は、特定の抗体とオリゴのサイズの両方に依存します。
※ ゼラチン、BSAなどのキャリアタンパク質や、＞25％のグリセロールが試料に存在する場合、結合が妨害されます。少量のトリスなどアミンまたはアジ化ナトリウムは脱塩過程で除去されるので問題にはなりません。
※ ご自身でポリまたはモノクローナル哺乳動物抗体IgG 100μgとHPLC精製済みの3'または5'アミノ修飾オリゴヌクレオチド15～25 OD260 unitsをご用意下さい。

使用例

Figure2



抗体－オリゴヌクレオチド複合体の作製

Antibody-Oligonucleotide All-in-One Conjugation Kit（#A-9202-001)を用いて、20-mer（Lane 6、7）および40-merのオリゴヌクレオチド（Lane 2～4）を抗体に結合し、非還元SDS-PAGEゲル上で銀染色を行った。反応後はLane 3およびLane 6ともに概して未結合の抗体の残存は認められなかった。精製物（Lane 4と7)には過剰のオリゴヌクレオチドの残存は認められなかった。

  • Lane 2：4FB/40-mer oligo
  • Lane 3：Ab/40-mer crude
  • Lane 4：Ab/40-mer purified
  • Lane 5：HyNic-antibody
  • Lane 6：Ab/20-mer crude
  • Lane 7：Ab/20-mer purified

Figure3


Mouse mAb/oligonucleotide conjugates (44-mer and 22-mer)

Silver stain gel：10％ SDS-PAGE SDS/MOPS

  1. Protein molecular weight marker
  2. 4FB-oligonucleotide 44-mer
  3. Crude Mouse anti-FITC mAb/44-mer conjugation reaction 800 ng
  4. Affinity purified Mouse anti-FITC mAb/44-mer reaction 800 ng
  5. Duplicate of lane 4
  6. Mouse anti-FITC mAb 200 ng
  7. Crude mouse anti-FITC mAb/22-mer conjugation reaction 800 ng
  8. Affinity purified mouse anti-FITC mAb/22-mer reaction 800 ng
  9. Duplicate of lane 8
Figure4

Hamster mAb/oligonucleotide conjugate (60-mer)

Silver stain gel：MOPS/SDS buffer 12% NU-PAGE SDS gel

  1. Protein molecular weight marker
  2. 60-mer 4FB-oligonucleotide standard
  3. Hamster mAb anti-CD3 145-C211 standard (250 ng)
  4. All-in-One crude conjugation reaction (60-mer/anti-CD3 mAb) 900 ng protein
  5. Affinity purified anti-CD3-60-mer antibody-oligonucleotide conjugate 900 ng protein

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Protein-Oligonucleotide Conjugation Kit

原理

amino-oligonucleotideから4FB-SS-oligonucleotideの合成

amino-oligonucleotideから4FB-SS-oligonucleotideの合成

  1. 3'または5'-amino modified-oligonucleotideをS-4FBで標識する。このアミン反応性NHSエステルは、オリゴヌクレオチドの標的の末端に芳香族アルデヒド官能基であるホルミルベンズアミド（4FB）を組み込む（上図参照）。
  2. HyNic修飾タンパク質を形成する。
  3. 最後に、2つの修飾した生体分子を混合すると、HyNic修飾タンパク質と4FB修飾オリゴヌクレオチドの反応によって形成される安定性に優れたUVによるトレースが可能な結合が形成される。

タンパク質-オリゴヌクレオチド作製原理

タンパク質-オリゴヌクレオチド作製原理

特長

  • 得られるタンパク質－オリゴヌクレオチド複合体の結合は安定性が高く、温度92℃またはpH2.0～10においても安定です。
  • タンパク質のHyNicリンカーとオリゴヌクレチドの4FBリンカーによる修飾は、比色アッセイで定量できます。
  • HyNic-4FB結合は、UV 354 nm（モル吸光係数：29,000）で計測できます。
  • 置換率（MSR、Molecular Substitution Ratio）も、比色法により定量できます。
  • 温和な反応のため、タンパク質の変性やジスルフィド結合への影響はありません。
  • 金属塩、酸化・還元試薬は必要ありません。
  • 使用可能なオリゴヌクレオチドの鎖長範囲：20～100 bases
  • 使用可能なタンパク質：全種類
  • 置換率：＞90％（3～4当量のオリゴ使用時）
  • 収率：50～80％（対タンパク質量）

使用例

Figure5

Coomassie Stain

Figure6

DNA Silver Stain

Monoclonal mouse anti-human IgG1 (3mg/ml)とOligo (75 bp)の複合体の検証例

  1. MW marker
  2. Mouse anti-human IgG1
  3. Crude HyNic-mouse anti-human IgG1/4FB-oligo
  4. Purified HyNic-mouse anti-human IgG1/4FB-oligo
  5. Oligo (75 bp)

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Protein-Protein Conjugation Kit

原理

SoluLINKworkflow

異種間タンパク質複合体作製原理

特長

  • 得られるタンパク質－オリゴヌクレオチド複合体の結合は安定性が高く、温度92℃またはpH2.0～10においても安定です。
  • タンパク質のHyNicリンカーとの4FBリンカーによる修飾は、比色アッセイで定量できます。
  • HyNic-4FB結合は、UV 354 nm（モル吸光係数：29,000）で計測できます。
  • 置換率（MSR、Molecular Substitution Ratio）も、比色法により定量できます。
  • 温和な反応のため、タンパク質の変性やジスルフィド結合への影響はありません。
  • タンパク質サイズ：25,000～950,000 daltons
  • タンパク質濃度：1.0～5.0 mg/ml
  • タンパク質量：50～650μg
  • タンパク質容量：50～130μl
  • リンカーモル当量：3～20倍
  • 使用可能なタンパク質：全種類
  • 収率：＞95％（対タンパク質量）

使用例

ウシIgGを5、10、20モル当量のS-HyNicで修飾し、BSAを5、10、15モル当量のS-4FBで修飾した。HyNic-ウシIgGおよび4FB-BSAを1：1.5のモル比（bIgG：BSA）で、以下のConjugation cross titration guideに示した組み合わせにより融合した。脱塩後、4μgの各複合体を12％Bis-Tris SDS-PAGEゲルにロードし、Coomassie染色を行った。結果は、HyNic／4FB複合体の低モル当量においては、主にbIgG／BSAは1：1で融合した（lane 4～6）。HyNic／4FB修飾タンパク質のモル当量の増加により、主に1：2、1：3およびbIgG／4FBポリマー複合体の形成が見られた（lane 7～12）。

Figure8 Figure10

MSR of Modified Bovine IgG and BSA

Figure12

Coomassie staining

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  • 1：ProteinMarker, 2：HyNic-Bovine IgG (bIgG)、3：4FB-BSA、4：5×HyNic bIgG／5×4FB BSA、5：5×HyNic bIgG／10×4FB BSA
  • 6：5×HyNic bIgG／15×4FB BSA、7：10×HyNic bIgG／5×4FB BSA、8：10×HyNic bIgG／10×4FB BSA、9：10×HyNic bIgG／15×4FB BSA
  • 10：20×HyNic bIgG／5×4FB BSA、11：20×HyNic bIgG／10×4FB BSA、12：20×HyNic bIgG／15×4FB BSA

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[在庫・価格 ：2025年04月26日 00時00分現在]

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  • 商品コード：S-9010-1
  • メーカー：VEC
  • 包装：1kit
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（テクニカルサポート 試薬担当）

reagent@funakoshi.co.jp

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抗体の作製