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(抗体のHRP標識キット)

標識試薬のトレースが可能なAll-in-oneのHRP-抗体標識キット HRP Antibody All-in-One Conjugation Kit
(抗体のHRP標識キット)

掲載日情報:2020/04/08 現在Webページ番号:69268

お手持ちの抗体をHRP標識するために必要なすべての試薬、バッファー、脱塩カラムなどを含んだキットです。Solulinkの触媒を介した共役反応化学と高活性の前活性化HRP、新規のQスピンカラムを用いることにより、高い比活性を持つ高純度のHRP標識抗体が高収量で得られます。

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使用例

ポリクローナル/モノクローナル抗体のHRP標識例

Bovine IgG-HRP

Bovine IgG-HRP Conjugate

  1. Protein M.W. marker
  2. HyNic-modified Bovine IgG(5μg)
  3. 4FB-modified HRP(5μg)
  4. All-in-One Bovine IgG-HRP conjugation reaction(crude)(10μg)
  5. All-in-One spin column purified Bovine IgG-HRP conjugate(crude reation purified~5μg)
Anti-FITC-HRP

Mouse Anti-FITC-HRP Conjugate

  1. Protein M.W. marker
  2. HyNic-modified Anti-FITC monoclonal(5μg)
  3. 4FB-modified HRP(low loading)-barely visible(1μg)
  4. All-in-One Mouse Anti-FITC-HRP conjugation reaction(crude)(10μg)
  5. All-in-One spin column purified Anti-FITC-HRP conjugate(crude reation purified~5μg)

HRP標識抗体を用いたDirect ELISA測定例

Direct ELISA

HRP標識抗体を用いて作成したDirect ELISAによる検量線

500~1.95 ng/ml濃度に希釈したFITC標識BSA(FITC MSR=2)100μlを抗原としてプレートにコートした。本製品を用いて作製したHRP標識マウス抗FITCモノクローナル抗体(0.25、0.5、1μg/ml)およびTMB基質(20分、OD450 nm)でプレートに固定化した抗原を検出した。

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SoluLINK製品の取り扱い開始のお知らせ

下の画像をクリックすると、SoluLINK標識キットの製品一覧のご案内をご覧いただけます。

SoluLINK製品の取り扱い開始のお知らせ

SoluLINK社製品は、2020年4月よりVector Laboratories社から販売することになりました。詳細については、当社テクニカルサポート部(試薬担当)までお問い合せ下さい。




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抗体HRP標識原理

S-HyNicとS-4FABのリンカーの構造

S-HyNicとS-4FABリンカーの構造

S‐HyNic (Succinimidyl‐6‐hydrazinonicotinamide)は、保護された芳香族ヒドラジン(HyNicグループ)を修飾し、リジン残基のアシル化を介して抗体に組み込むために使用します。Solulinkでは、2つ目のリンカーであるSulfo-S-4FB(Sulfo-N-succinimidyl-4-formylbenzamide)を用いることにより、高HRP活性を有する活性化4FB-HRPを作製します。

抗体のHRP標識

HRP標識

アニリン触媒の存在下で、HyNic修飾抗体を活性化4FB-HRPと一緒にインキュベートすると、安定したビスアリールヒドラゾン結合が形成され、迅速かつ効率的にHRP標識抗体を作製することができます。




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特長

  • 必要抗体量:100μg×2
  • 全所要時間:約5時間(実際の操作時間:約60分)
  • 得られたHRP標識抗体は、ELISA、ウエスタンブロッティング、免疫組織染色(IHC)などに用いることができます。

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操作方法概略

操作方法概略

ChromaLink Digoxegenin One Shot Antibody-Labeling Kitのワークフロー

  1. 凍結乾燥したIgG 100μgをModification buffer 25μlに溶解し、4 mg/ml濃度のIgG溶液を調製する。(10分)
  2. Red cap spin column Aを用いて溶媒を交換する。(3分)
  3. Anhydrous DMFをS-HyNicに加えて溶解し、次にこの溶液を抗体溶液25μlに加えてインキュベートする。(2時間)
  4. Yellow cap column Aを用いてバッファーを交換する。(3分)
  5. 4FB-HRP 50μlをHyNic修飾抗体(25~35μl)に加え、混合し、インキュベートする。(2時間)
  6. Brown cap column Aを用いてバッファー交換する。(3分)
  7. Q spin columnを用いて精製する(40分)
  8. Blue cap column Aを用いてバッファー交換する。(3分)

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Q spin columnを用いたHRP標識抗体の精製メカニズム

Q spin columnを用いたHRP標識抗体の精製メカニズム (クリックで開閉します)
Purification

アニリン触媒によるヒドラゾン結合形成の効果により、標識抗体の精製が大幅に簡略できます。温和な反応条件下で、アニリンの能力で標識物の形成速度と効率の両方を高め、遊離抗体から定量的に標識抗体を生成します。触媒反応の終わりで遊離抗体が完全に存在しない場合、過剰なHRPと標識抗体のみが残ります。
Q spin filterを用いてIgGはその生物物理学的特性により標識抗体を選択的に結合し、遊離のHRPはフロースルーとして通過します。精製標識抗体は、残留の遊離抗体とHRPをともに含まないフィルターメンブレンから高収量(50~70μg)で溶出できます。

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キット内容

  • S-HyNic
  • 4FB-HRP
  • Modification buffer
  • Q binding buffer A
  • Q elution buffer A
  • Spin column A Red/Yellow/Brown/Blue cap
  • Q spin column
  • Q collection tubes
  • Anhydrous DMF
  • 30K MWCO Vivaspin filters
  • Collection tubes

UV-VISまたはNanoDrop分光光度計およびセミミクロ石英キュベットが別途必要です。

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関連製品 抗体の蛍光標識キット

お手持ちの抗体をSoluLINKテクノロジーにより、FluoresceinまたはR-PE標識するために必要なすべての試薬、バッファー、脱塩カラムなどを含んだキットです。品名をクリックすると製品の詳細、商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 One-Shot Fluorescein Antibody Labeling Kit R-PE Antibody Conjugation Kit
商品コード F-9001-009K P-9002-002
蛍光色素 Fluoresceiin R-Phycoerythrin
抗体最大標識量 100μg 0.5 mg×2

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価格

[在庫・価格 :2024年04月25日 15時35分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
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HRP Antibody All in One Conjugation Kit
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HRP Antibody All in One Conjugation Kit

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  • 商品コード:A-9002-001
  • メーカー:VEC
  • 包装:1kit
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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