サンドイッチELISA測定の実習用キット ELISA Training Kit（Bertin Bioreagent社）
掲載日情報：2020/01/17 現在Webページ番号：69241
試料中のβ-ラクトグロブリン（BLG、β-Lactoglobulin）を、アセチルコリンエステラーゼ(AChE, Acetylcholinesterase）トレーサーを用いたサンドイッチELISAにより簡便かつ迅速に比色定量できる、お求めやすい価格の実習用ELISAキットです。12人（#B05006）または24人（#B05005）の学生または研修者がそれぞれ4試料（各試料2回測定時）を測定することができます。
本製品は、サンドイッチELISAによる操作や原理を習得するための実習に最適なキットです。同じアセチルコリンエステラーゼ(AChE, Acetylcholinesterase）トレーサーを用いた、競合法によるELISA実習用キット（☞ Cayman Chemical社 Practice ELISA Kit（#10009658））もあります。本製品との併用により、プレートリーダーを用いたELISAの測定操作に加えて、ELISAキットの代表的なサンドイッチ法と競合法の測定原理の違いの学習にも有用です。
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- β-ラクトグロブリン（BLG、β-Lactoglobulin）とは
- MEMO アセチルコリンエステラーゼ（AChE, Acetylcholinesterase）標識のメリット
- 特長
- 測定原理
- キット内容
- 測定例
- 操作方法概略
- 関連製品 Cayman Practice ELISA Kit（競合法）
- 価格
β-ラクトグロブリン（BLG、β-Lactoglobulin）とは
β-ラクトグロブリン（BLG、β-Lactoglobulin）は、分子量183 kDaの162残基の比較的小さなタンパク質です。BLGは、ヒトを除く哺乳類の母乳に含まれる主要なホエータンパク質（約3 g/L）で、その構造、特性、および生物学的役割は広く報告されています。BLGは、その特性が乳製品およびその加工物によっては利点にも欠点にもなる可能性があるため、食品産業にとって興味深いものとなっています。
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MEMO アセチルコリンエステラーゼ（AChE, Acetylcholinesterase）標識のメリット
Bertin Bioreagent社のELISAキットでは、主に酵素標識としてアセチルコリンエステラーゼ（AChE, Acetylcholinesterase）による方法が採用されています。AChEアッセイは、基質としてアセチルチオコリンを含むエルマン試薬を使用して発色させます。この酵素反応最終生産物（5-チオ-2-ニトロ安息香酸）は405～414 nmに吸収極大を持つ明るい黄色化合物です。AChEは、ELISA法で用いられる他の酵素に比べて以下のような長所を有しています。
- AChEは、64,000 sec-1の代謝回転で真の一次速度を示すため、他の標識酵素に比べてカイネティック測定に適し、また高い感度が得られます。
- HRP（Horse Radish Peroxidase）やAP（Alkaline phosphatase）の約3倍の代謝回転速度に相当します。
- バッファー中のアセチルコリンの非酵素的加水分解は本質的に起こらないため、低バックグラウンドでアッセイを行うことができます。
- 高感度かつ低バックグラウンドにより、ELISAキットの測定に求められる高いS/N比を実現しています。
- AChEは安定性に優れた酵素であり、その酵素活性は長時間維持されます。そのため、広いダイナミックレンジが得られます。
- AChEは安定した酵素であり、その活性は長時間にわたって一定であるため、低～高濃度の試料の同時分析が可能です。
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特長
- 測定試料：牛乳
- 必要試料量：100 μl（または2滴）
- 測定原理：サンドイッチELISA法
- フォーマット：96-wellプレート
- 測定方法：比色
- 測定波長：405～414 nm
- インキュベーション時間（温度）：30分（室温）*1
- アッセイ数：12×8 strips（#B05006）、24×8 strips（#B05005）
＊1 加温下では、インキュベーション時間を短縮することができます（例：15～20分、30℃）。ただし、AChEの酵素活性が失活するため、37℃以上でのインキュベーションは避けて下さい。
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測定原理
本製品の測定原理は、サンドイッチ法による酵素免疫測定法（ELISA：Enzyme-Linked Immunosorbent assayまたはEIA：enzyme immunoassay）に基づいています。
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キット内容
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測定例
以下の測定結果は、本製品を用いて10分間のインキュベーションを行って測定した吸光度をもとに、希釈した牛乳試料中のBLG濃度を測定した結果です。実験値は、実施例を示すための目的で測定した結果であり、実験条件によって測定値は変化します。
| 測定試料 | 吸光度（A.U.) | |
|---|---|---|
| 試料1 | 試料2 | |
| ネガティブコントロール | 0.009 | 0.010 |
| ポジティブコントロール | 0.769 | 0.796 |
| 希釈した牛乳 | 0.574 | 0.571 |
| BLG濃度 | 1.46 g/L | |
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操作方法概略
測定前の注意
- すべての試料において、有機溶媒の混入を避けて下さい。
- 試料は、調製後すぐに使用して下さい。
- AChEを妨害する有機物の混入を避けるために、水道水ではなくミネラルウォーターの使用をお勧めします。
- Ca2+やMg2+などの2価金属イオンを多く含むミネラルウォーターは、試薬中に存在するリン酸バッファーに沈殿を生じさせるために使用しないで下さい。
試料の調製
1 Lの水に牛乳1滴（50 μl）を加えて希釈する。その他の乳成分を含む飲料、食品も使用できるが、最適希釈率は試料によって異なるため、段階希釈した試料で前実験を行って決定する必要がある。固形試料（クッキー、ケーキ、チーズ）は、水中でホモジナイズする。希釈試料は保管不可。
試薬の調製
試薬は凍結乾燥品で、チューブや蓋の内側に付着している場合もあるので捨てないように注意する。すべての試薬は、使用前に室温（20℃付近）に戻す。BLG tracer、β-BLG standard、Ellman's reagentのそれぞれを, プロトコルに従って水を加えて水溶液を調製する。
測定操作
- 各測定試料は2ウェル以上（duplicate）を用いて測定する。コントロールおよび測定試料は、それぞれ100 μl（または2滴）をピペッティングし、以下の図に示したように2点ずつ各ウェルに添加する。
- ネガティブコントロールから順番に、Tracerを100 μl（または2滴）ずつ各ウェルに添加する。
- プレートを室温で30分間インキュベートする（免疫学的反応）*2。
- プレートを逆さまにして、中の液を廃棄する。水またはリン酸緩衝液でウェルを洗浄後、洗浄液を廃棄し、紙タオル上で液を完全に叩き落す。
- 各ウェルにエルマン試薬を200 μl（または4滴）添加し、室温下で発色させる。この際、直射光を避けるためにプレートをアルミホイルで覆うと良い。
- エルマン試薬添加15分後に405～414 nmで吸光度を測定する。
＊2 加温下では、インキュベーション時間を短縮することができます（例、15～20分、30℃）。ただし、AChEの酵素活性が失活するため、37℃以上でのインキュベーションは避けて下さい。
データ分析
試料中のBLG濃度は、以下の式により算定されます。
- [BLG]：BLG濃度（ng/ml）
- Sample（A.U.）：測定試料の吸光度
- Standard（A.U.）：標準試料（BLG濃度：100 ng/ml）の吸光度
- F：測定試料の希釈率*3
＊3 牛乳の場合：F=20,000（1滴=約50 μl）／水1L
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関連製品 Cayman Practice ELISA Kit（競合法）
競合型 ELISA（酵素免疫測定法）の実習・練習用キットです。AChE（アセチルコリンエステラーゼ）で標識されたトレーサーを用い、AChE により分解された基質の発色を 412nm の吸光度で検出します。（☞ Cayman Practice ELISA Kit製品ページで見る）
特長
操作方法概略
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価格
[在庫・価格 ：2025年04月25日 18時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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ELISA Mini Training Kit (96well) |
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ELISA Training Kit (2x96well) |
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[在庫・価格 ：2025年04月25日 18時55分現在]
ELISA Mini Training Kit (96well)
文献数： 0
- 商品コード：B05006
- メーカー：SPB
- 包装：1kit
- 価格：¥28,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：医薬用外毒物
| 説明文 | |||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | 医薬用外毒物 | ||
| 保存条件 | 4℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2024年5月合併号 p.18 ニュース2024年4月15日号 p.31
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| 製品記事 | Practice ELISA Kit（Cayman社） はじめてのELISA |
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| 関連記事 | |||
ELISA Training Kit (2x96well)
文献数： 0
- 商品コード：B05005
- メーカー：SPB
- 包装：1kit
- 価格：¥42,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：医薬用外毒物
| 説明文 | |||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | 医薬用外毒物 | ||
| 保存条件 | 4℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2023年4月1日号 p.14 ニュース2024年5月合併号 p.18
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| 製品記事 | Practice ELISA Kit（Cayman社） はじめてのELISA |
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| 関連記事 | |||
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