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標的細胞に特異的なエクソソームを作製するキット XStamp Pro Targeting Kitシリーズ

掲載日情報:2019/12/19 現在Webページ番号:69184

単離したエクソソームなどの細胞外小胞(EV)の表面にストレプトアビジンや特定の抗原に特異的な抗体をコートすることにより、発現ベクターなどを介さず直接的に、標的細胞に特異的なEVを作製することができるキットです。

XStamp Pro anti-HIVワークフロー

XStamp anti-HIV ScFv(#XSTP905A-1)を表面にコートしたEVの効果

GFP標識HIVを感染させたTZMbl細胞に対して、Texas Red標識siRNAを内部に含む非標的化EV(上列)、HIV標的化EV(下列)をそれぞれ添加した。非標的化EVは細胞に取り込まれていないのに対して、HIV感染細胞のみがHIV標的化EVを取り込んだことがわかる。
Drs. Rafal Kaminski and Kamel Khalili, Temple University提供

XStamp Pro模式図

XStamp Pro模式図





操作方法概略

商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 商品コード 標的細胞 ワークフロー 概要
XStamp Pro Streptavidin Customizable EV Targeting Kit XSTP900A-1 任意の標的細胞 XStamp Pro Streptavidinワークフロー ストレプトアビジンをコートしたEVを作製する。別に用意した標的細胞が特異的に発現している抗原に対するビオチン標識抗体をビオチン-ストレプトアビジンの親和作用により結合させ、標的細胞に特異的なEVを作製する。
XStamp Pro anti-HIV EV Targeting Kit XSTP905A-1 HIV感染細胞 XStamp Pro anti-HIVワークフロー 抗HIV抗体をコートしたEVを作製することにより、HIV抗原を有する細胞に特異的なEVを作製する。
XStamp Pro anti-CD16 EV Targeting Kit XSTP910A-1 CD16発現細胞 XStamp Pro anti-CD16ワークフロー 抗CD16抗体をコートしたEVを作製することにより、CD16発現細胞に特異的なEVを作製する。
XStamp Pro anti-PD-1 EV Targeting Kit XSTP915A-1 PD-1発現細胞 XStamp Pro anti-PD-1ワークフロー 抗PD-1抗体をコートしたEVを作製することにより、PD-1発現細胞に特異的なEVを作製する。

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特長

  • 次世代のXStampテクノロジーにより、標的細胞に特異的なEVを迅速に作製できます。
  • 発現ベクターやトランスフェクションは不要です。精製したEVを直接標識することで、操作の合理化ができます。
  • XStamp ScFvでEVを1時間インキュベートし、標的に対する固有のEVを分離するだけの単純なワークフローのため、操作時間を短縮できます。
  • 複数の標的に対するバリアントを簡単に作製できるため、迅速なスクリーニングに有用です。
  • あらゆるEVローディングプロトコルに対応しています。
  • 使用回数:10 reactions

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使用例

XStamp Pro Streptavidin Customizable EV Targeting Kit

XStamp Pro Streptavidin使用例1

ラテックス硫化アルデヒドビーズを用いたXStamp Pro Streptavidin(#XSTP900A-1)によるビオチン標識物への結合の検証

EVには結合するが、ビオチン化Atto-488色素には結合しないラテックス硫化アルデヒドビーズを使用し、蛍光顕微鏡で観察した。最右列のXStamp Pro Streptavidinで表面をストレプトアビジンでコートしたEVのみが、ビオチン化Atto-488と結合し緑色蛍光を発しているのがわかる。


XStamp Pro Streptavidin使用例2

XStamp Pro Streptavidin(#XSTP900A-1)により作製したCCR5+細胞を標的化したEVの評価

血清由来のEVをExoGlow Green EV labeling dye(#EXOGP300A-1)で標識し、XStamp Pro Streptavidin(#XSTP900A-1)でEV表面をストレプトアビジンでコートした後、ビオチン標識抗CCR5抗体を添加し、作製した標識EVをCCR5+細胞に加えた。CCR5発現の非活性化CD4+ T細胞とインキュベートした後、フィコエリトリン(PE)を用いてCCR5+細胞を染色し、フローサイトメトリーを用いて細胞を調べた。
ExoGlow Green標識のみの非標的化EVで処理した細胞は、EVは取り込むものの、CCR5に依存しないため非特異的なものである(C)。CCR5に特異的なEVで細胞を処理すると、ほぼすべてのExoGlow Green標識がCCR5+細胞に限定され(D、B)、EV標的化の特異性と効率が確認できた。
Pooja Bhardwaj and Satish Pillai, UCSF提供


XStamp Pro anti-HIV EV Targeting Kit

XStamp Pro anti-HIV使用例

XStamp Pro anti-HIV(#XSTP905A-1)により作製したHIV感染細胞を標的化したEVの評価

XStamp Pro anti-HIV(#XSTP905A-1)によりHIV感染細胞を標的化し、内部にTexas Red標識siRNAを含むEV6.25、12.5、または25μgをHIV感染GFP標識Jurkat2D10細胞(latent NL4-3-Dgag / pol-GFPリンパ系細胞株)に添加した。24時間後、フローサイトメトリーを用いてEVの取り込みを評価した。標的化EVの取り込みは効率的で、用量依存的であった(下段、Texas Red標識細胞(青色))が、非標的化EVは取り込まれなかった。このことから、XStamp Pro anti-HIVによる標的化の特異性が確認できた。
Drs. Rafal Kaminski and Kamel Khalili, Temple University提供


XStamp Pro anti-CD16 EV Targeting Kit

XStamp Pro anti-CD16使用例

XStamp Pro Anti-CD16(#XSTP910A-1)により作製したCD16+細胞を標的化したEVの評価

ヒト末梢血単核細胞(PBMC)をIL-10で60時間刺激した後、XStamp Pro anti-CD16 ScFv(#XSTP910A-1)でコーティングしたEVを添加した。なお、これらのEVは、ヒト単球に由来し、Cy5標識miRNAを内部に有している。
15時間後、細胞を固定・染色し、フローサイトメーターで分析した。CD16+細胞のみがEVを取り込み、XStamp Pro anti-CD16(#XSTP910A-1)の特異性が示された(CD16-細胞の0.772%と比較して、CD16+細胞の47.9%)。
Dr. Lynn Pulliam, UCSF提供


XStamp Pro anti-PD-1 EV Targeting Kit

XStamp Pro anti-PD-1使用例1

XStamp Pro anti-PD-1(#XSTP915A-1)により作製したPD-1+細胞を標的化したEVの評価

ExoFlow-ONE Topaz Blueフローサイトメトリー色素(#EXOF400A-1)で血清由来のEVを標識し、XStamp Pro anti-HIV ScFv(mistargeted control)またはXStamp Pro anti-PD-1 ScFvでそのEVの表面をそれぞれコーティングした。
EVを活性化CD4+ T細胞と36時間インキュベートし、細胞のPD-1を染色後にフローサイトメトリーで分析した。XStamp Pro anti-PD-1でコートしたEVのみが、PD-1発現細胞に取り込まれた(パネルDとパネルCを比較、青い矢印)。

XStamp Pro anti-PD-1使用例2

各条件における絶対細胞数の比較

XStamp Pro anti-HIV ScFvコートEVがPD-1+細胞に取り込まれなかったことで、XStamp Pro anti-PD-1(#XSTP915A-1)コートEVの特異性を重ねて確認できた。

Drs. Pooja Bhardwaj and Satish Pillai, UCSF提供


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キット内容

  • XStamp Pro purified protein*
  • ExoQuick-TC

製品によって内容は異なります。


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価格

[在庫・価格 :2024年04月27日 11時15分現在]

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詳細 商品名
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XStamp Pro Streptavidin Customizable EV Targeting Kit, 10 rxn
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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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