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CRISPR-Cas9システムによるゲノム編集受託サービス iPS細胞のゲノム編集(CRISPR-Edited iPS Cells)受託サービス

掲載日情報:2020/01/31 現在Webページ番号:68904

guide RNAによるゲノム編集ツール CRISPR-Cas9特集

CRISPR-Cas9システムによるiPS細胞の高効率,高品質なゲノム編集を行う受託サービスです。
ノックアウト,一塩基変異体,またはタグ挿入を行ったiPS細胞株と未編集コントロール細胞をご提供します。

iPS Cell Gene Editing Offerings

健常または患者由来iPS細胞株に,ノックアウト/ノックイン,一塩基変異体(Single Nucleotide Variant)の作製,およびタグ挿入を行うことができます。また,ゲノム編集したiPS細胞は,細胞プールまたはホモ/ヘテロ接合型クローンとしての納品を選択できます。

Synthego社の各種ヒト細胞のゲノム編集は,「各種ヒト細胞のゲノム編集受託サービス 」をご覧下さい。

受託サービスの流れ

iPS Cell Gene Editing Offerings

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特長

  • 自動化されたワークフローと,厳格な品質チェックにより,目的のゲノム編集の導入,多能性の維持,コンタミネーションが無いことを確認しています。
  • 高効率,高品質なノックアウト/ノックイン編集ができます。
  • 正確な一塩基変異体(SNV)の作製ができます。

■品質チェック項目

ゲノム編集前 マイコプラズマ・ウイルス混入,細胞適用,核型,細胞増殖能
iPS細胞のプール 多能性,無菌性,核型(以下オプション)RNA-seq,STR*
クローン単離したiPS細胞 多能性,無菌性,核型(以下オプション)WGS(全ゲノム), RNA-seq,STR*

* STR:Short-tandem repeat

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ゲノム編集iPS細胞の検証例

■ゲノム編集後も多能性を維持

ゲノム編集iPS細胞を多能性維持

CRISPRによりゲノム編集したiPS細胞の蛍光免疫染色像
SSEA-4タンパク質(緑色)の発現が多能性の維持を示している。
核(青色,DAPI)。

■高効率なノックアウト/ノックイン編集

ノックアウト編集効率の解析

ノックアウト編集

5種類のiPS細胞株にHPRTを標的としたMulti-guide sgRNAとCas9のribonucleoprotein (RNP)を共にトランスフェクトした。その後,DNA抽出,PCR増幅,Sanger法シークエンシング,および解析を行った。

タグのノックイン編集効率の解析

ノックアウト編集

GAPDHのN末端を標的として様々なタグを挿入した。その後,DNA抽出,PCR増幅,Sangerシークエンシング,および解析を行った。

■正確な一塩基変異体(SNV)の作製

正確な一塩基変異(SNV)

CRISPRでゲノム編集したホモ接合型クローンの比較
野生型コントロール(下図)のcytosine (C)からthymine (T)へと,CRISPRでゲノム編集したホモ接合型クローンでは一塩基が変化している(オレンジ枠内)。標的配列:黒色下線部分,PAM配列:コントロールの赤色破線部分。

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納品

  • ホモ接合型クローン,ヘテロ接合型クローン,またはプールフォーマットでの供給が可能です。
  • ゲノム編集iPS細胞クローンと未編集コントロール(2 vials each)を納品します。

Synthego社のiPS細胞の正確なCRISPRゲノム編集技術についての情報は,メーカーWEBサイトの「Precision CRISPR Editing of Induced Pluripotent Stem (iPS) Cells Tech Note」をご覧下さい。

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ご注文方法/価格

詳細は,下記の当社受託・特注品業務担当までお問い合わせ下さい。

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