浮遊細胞・酵母・細菌・組織等のライブイメージングに！ 顕微鏡イメージング用高分子超薄膜Myell^®（マイエル）シリーズ

Myell^®（マイエル）シリーズは顕微鏡イメージング用として開発された高分子超薄膜です。本製品を用いて観察試料をラッピングし、カバーガラスの代替とすることで、既存のプレパラート作製法にはない様々な利点が得られます。
※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

Myell^®（マイエル）の製品イメージ

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※ 本製品は滅菌処理されていません。

Myell Sはポリ乳酸製の超薄膜です。Myell Sで浮遊細胞や酵母などの細胞懸濁液をラッピングすることで、既存の観察法で問題となっていた顕微鏡観察中の細胞の移動を防止し鮮明な画像を得ることができます。
※Myell DおよびMyell Pでも同等の効果が得られます。

Myell Sによる細胞の保持効果を観察するため、Myell Sでラッピングした浮遊細胞を培地に浸し、培地をピペッティングした。その結果、ラッピングしていない細胞は、ピペッティングにより拡散し、観察領域外へ移動している様子が観察された（図1、動画1）。一方、ラッピングを行った細胞は、ピペッティングの影響を受けずに、観察領域内に保持されていた（図2、動画2）。

図1．Myell Sでラッピング処理を行っていない浮遊細胞

動画1．Myell Sでラッピング処理を行っていない浮遊細胞

図2．Myell Sでラッピング処理した浮遊細胞

動画2．Myell Sでラッピング処理した浮遊細胞

Myell Sでラッピングした浮遊細胞に対して、細胞内のカルシウム濃度を律動的に上昇させる作用（カルシウム振動）があるヒスタミン（ヒスタミンはMyell Sを透過する^*）を添加し、カルシウムイメージングを行った。ここではカルシウムバイオセンサーとして、2つの蛍光タンパク質（ECFPとVenus）を連結したYC3.60を用い、カルシウム依存的なECFP由来の蛍光とVenus由来の蛍光輝度比の変化をカルシウム振動の指標とし、その経時変化を観察した（図3、動画3）。その結果、ヒスタミン添加に伴うピペッティング時にも浮遊細胞が顕微鏡観察領域内に保持され、カルシウム振動を30分間にわたって鮮明に可視化することに成功した（図4）。
*物質のMyell S透過性につきましては詳細な検討は行われておりません。ヒスタミン（M.W.：111）はある程度速やかに透過し、トリパンブルー（MW：961）は数分かけて浸透することが確認されています。トランスフェリン（M.W.：80,000）と抗体IgG（M.W.：150,000）は透過しません。外部からの物質をラッピング内部に確実に透過させたい場合には、Myell Pの使用を推奨いたします。

図3．Myell Sでラッピング処理した浮遊細胞のカルシウムイメージング

動画3．Myell Sでラッピング処理した浮遊細胞のカルシウムイメージング

図4．図3の画像中において拡大して示した細胞の蛍光強度比の経時変化をプロットし、カルシウム振動を可視化した。
        励起波長：405 nm、蛍光波長：450 nm、525nm

Myell Dは撥水・撥油性のあるCYTOP^®製の超薄膜です。Myell Dを用いることで組織の深部イメージングを容易に行うことができます。また、長時間のイメージング時の試料の乾燥防止にも効果的です。

深部イメージングは組織の三次元的な構造を理解するために有用な手法です。しかし、一般的に用いられている高倍率の対物レンズの多くは作動距離が短く、カバーガラスをプレパラート作製に用いると、その厚みのために深部イメージングには支障がありました。Myell Dは厚さが一般的なカバーガラスの1/1,000未満と非常に薄く油浸レンズによる観察に対応しているため、高倍率対物レンズの作動距離を劇的に向上し、深部イメージングを容易に行うことが可能です。

透明化したマウス脳切片 （Thy1-EYFP-H transgenic mice）を用いて、カバーガラスで作製したプレパラートとMyell Dで作製したプレパラート間で撮像可能な深度の比較を行った。カバーガラスを用いたプレパラートと比較して、Myell Dを用いたプレパラートでは2倍以上深くまでイメージングすることができた（参考文献1）。

組織片のタイリング撮影や三次元画像の撮影といった長時間を要する画像取得において、鮮明な画像を得るためには試料の乾燥に伴う収縮・変形を防止するための適切な対策が必要です。乾燥防止用途では、カバーガラスの周囲をマニキュアなどでシールする手法がよく用いられますが、マニキュアに含まれる成分が蛍光顕微鏡観察に影響を与えてしまう場合がありました。Myell Dによるラッピングはシーリング材による封入を必要とせずに、試料の乾燥を簡単かつ効果的に防止でき、蛍光顕微鏡観察にも影響を与えません。

GFP発現マウスの脳切片を固定し、Myell Dによってラッピングをした試料と、ラッピングしない試料とでタイリング撮影を行い、得られた画像を比較した（下図）。

Myell Pは多数の細孔が施されたポリ乳酸製の超薄膜です。Myell Pはこれらの多数の細孔を介して水溶性の分子をスムーズに透過します。Myell Pを用いることで、ラッピングした試料を保持し観察しながら、外部から薬剤などの液性刺激因子の投与や抗体標識処理を効率的に行うことができます。

Myell Pに施された細孔の電子顕微鏡画像

Myell Pを用いた試料のラッピングと外部からの液性刺激因子投与の模式図

細胞に対して外部から薬剤や蛍光標識抗体などの水溶性物質を投与し、その反応を観察する実験手法は広く行われる手法です。しかし、浮遊細胞の場合には、既存のプレパラート作製法を用いたライブイメージング中に外部から水溶性物質を投与すると、視野外に細胞が流れ出してしまうため、同一細胞を処理前後で追跡し続けるのは現実的ではありませんでした。Myell Pでラッピングした場合、外部から水溶性物質を投与しても視野内に細胞が保持されるため、継続して観察が行うことが可能です。

Myell PでラッピングしたRaji細胞に対して、外部からAlexa Fluor^®594 標識抗CD20抗体を投与したところ、Raji細胞が速やかにラベリングされる様子が観察された（参考文献2）。

安定な試料台にカバーガラス（直径25 mm以下）を水平に置きます。観察する試料がカバーガラスに乗った状態にして、Myellをくぐらせる（Myellを押し当てて破ります）ことで試料とカバーガラスがラッピングされます。

Myellでラッピングした試料を正立顕微鏡を用いて観察する場合には、スライドガラスまたはシャーレ上に置くか、または顕微鏡のステージに直接のせて観察します。

Myellでラッピングした試料を倒立顕微鏡を用いて観察する場合には、シャーレ上に置いて観察します。この場合には観察試料を水に浸して乾燥を防いだり、アガロースゲルで包埋したりといったことも可能です。また、Myell Pを用いる場合にも同様の方法で薬剤などの水溶性刺激因子を含んだ溶液を加えて試料の応答を観察します。

※Myell A については初回のみ（１研究室１つ）購入可能で、専用注文用紙が必要です。ご注文の際には、専用注文用紙をダウンロードし、必要事項をご記入の上、販売店様にお渡し下さい。