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Human Insulin ELISA Kit（Bertin Bioreagent社）
ヒトインスリンELISA（定量）キット Human Insulin ELISA Kit（Bertin Bioreagent社）
掲載日情報：2019/06/10 現在Webページ番号：68780
試料中のヒトインスリンを、アセチルコリンエステラーゼ（AChE）テクノロジーを用いたサンドイッチ法により比色定量するELISAキットです。
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ヒトインスリン検量線例
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インスリン（Insulin）とは
インスリン（Insulin）は、51アミノ酸からなるポリペプチドで、21アミノ酸残基のA鎖と30アミノ酸残基のB鎖がジスルフィド結合を介して連結し 1、αヘリックスを形成します。膵島のβ細胞によって前駆体のプレプロインスリンが産生され、次にシグナルペプチドが除去されてプロインスリンに変換され、最後にC-ペプチドが外れてインスリンが形成されます。インスリンは主に生体内のグルコース濃度の調節を担っており、インスリン産生の調節不全は糖尿病など多くの疾患に関与します。
参考文献
- Wilcox, Gisela , "Insulin and Insulin Resistance", Clin. Biochem. Rev., 26, 19, (2005).
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アセチルコリンエステラーゼ（AChE）テクノロジーとは
AChEテクノロジーのバックグラウンド
EIAのための標識酵素であるアセチルコリンエステラーゼ（AChE）は、デンキウナギ（Electrophorus electricus）の発電器官から抽出され、電気化学的放電中に他の標識酵素よりも速い代謝回転速度での触媒作用を可能にします。フランスの学術研究機関のCEAは、このAChEの利点を発見し、特許を取得しました 2, 3, 4。Bertin Bioreagent社は、長年に渡るこのAChE技術を使用したEIA / ELISAキットの開発および製造を通して専門的な知識を有しています。
AChEアッセイ系の検出原理
AChEアッセイ系では、基質としてアセチルコリン、発色試薬としてEllman's reagentを用います。酵素反応の最終生産物である5-thio-2-nitrobenzoic acidは、405～414 nmに最大吸収波長を有する鮮明な黄色に発色します。
AChEアッセイ系の利点
- AChEは、ターンオーバーがHRPに比べて約3倍の64,000/secと非常に速いため、高感度な結果が得られます。
- アセチルコリンは、バッファー中で非酵素的な加水分解を基本的に伴わないため、他の酵素基質よりバックグラウンドを低減でき、そのため高いS/N比が得られます。
- AChEは安定した酵素で、活性が長時間一定に保持され、アッセイ系において広範囲のダイナミックレンジが得られます。
- 酵素活性を損なうことのない基質を選択できるため、高濃度試料から低濃度試料までのアッセイで使用可能です。
参考文献
- Grassi, J. and Pradelles, Ph., "Compounds labelled by the acetylcholinesterase of Electrophorus Electricus. Its preparation process and its use as a tracer or marquer in enzymo-immunological determinations", United States patent, No. 1,047,330., September 10 (1991).
- Grassi, J., and Pradelles, P., "The use of Acetylcholinesterase as a Universal marker in Enzyme-Immunoassays", Proceedings of the Third International Meeting on Cholinesterases, American Chemical Society (1991)
- Pradelles, Philippe, et al., "Enzyme Immunoassays of Eicosanoids Using Acetylcholinesterase", Methods in enzymology, 187, 24～34 (1990).
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特長
- 測定動物種：ヒト
- 測定試料：血漿（EDTA K3処理）、バッファー中のインスリン
- 測定時間：4時間
- 試料量：50μl/well（1：10希釈液として）
- 測定方法：比色
- 測定波長：405 nmまたは414 nm
- 測定範囲：0.4～52.0μIU/ml （15.4～2,000 pg/ml）
- 検出限界：0.3 pg/ml
- アッセイ数：96 assays
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交差性
| 動物種 | 因子名 | 交差性（％） |
|---|---|---|
| ブタ | Insulin | 100 |
| ヒト | Pro-insulin | Not detected |
| C-peptide | Not detected |
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操作方法概略
| ELISAワークフロー概略 | |||||
|---|---|---|---|---|---|
| Blank | NSB | Standard | Sample or QC | ||
| EIA bufferの添加 | － | 50μl | － | － | |
| Standardの添加 | － | － | 50μl | － | |
| Sample/QCの添加 | － | － | － | 50μl | |
| Tracerの添加 | － | 50μl | 50μl | 50μl | |
| プレートをカバーし、室温で60分間インキュベートする。 | |||||
| ストリップを300μl/wellのWash bufferで5回洗浄し、ウェルの中の液を廃棄し、吸水紙上で乾燥させる。 | |||||
| Ellman's reagentの添加 | 200μl | ||||
| プレートを室温下、暗所で30分間、オービタルマイクロプレートシェーカー（インキュベート機能：あり、なし）上で300rpmの回転数で攪拌しながらインキュベートする。 | |||||
| OD 405～414 nmを測定する。 | |||||
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キット内容
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価格
[在庫・価格 ：2024年05月07日 16時55分現在]
| 詳細 | 商品名 |
|
文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
|
Insulin (human) ELISA Kit (96wells) |
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0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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[在庫・価格 ：2024年05月07日 16時55分現在]
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