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Caspase 3/7のハイスループットスクリーニングに最適なキット Apo 3/7 HTS, Caspase-3/-7 Detection Kit

掲載日情報：2020/06/12 現在Webページ番号：68598

イムノケミストリーテクノロジーズ /
Immunochemistry Technologies, LLC
[メーカー略称：ITL]

蛍光性基質Rhodamine 110 (R110) 標識Z-DEVDを用いて、細胞中のカスパーゼ（caspase）3/7活性を蛍光法により検出するキットです。96-well プレートフォーマットで、ワンステップで細胞の溶解と測定を行えるため、簡便、迅速にハイスループットアッセイを行うことができます。
※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


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使用例

測定例

1 mMのstaurosporineで5時間処理後のU937細胞のcaspase 3/7活性を、本製品を用いて測定した。
Pos：staurosporineで処理したU937細胞
Neg：ネガティブコントロール


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アポトーシス（Apoptosis）とカスパーゼ（caspase）について

アポトーシスは、特殊な過程に従った細胞自殺で、その形態は進化的に保存されています。この過程では、カスパーゼと呼ばれるタンパク質分解酵素が中心的な役割を担っています。カスパーゼは、アポトーシス誘導シグナルに対応して起こる一連の反応に関与しており、基質のタンパク質切断や細胞分解を引き起こします1。

カスパーゼは、線虫（C. elegans）からヒトに至る広範な生物で同定されています。哺乳動物のカスパーゼは、アポトーシスと炎症とで異なる役割を果たしています。カスパーゼは、アポトーシスにおける細胞分解を引き起こすタンパク質の分解的切断（エフェクターカスパーゼ）の原因となり、上流の調節（イニシエーターカスパーゼ）に関与しています。活性型カスパーゼは、2つの大きなサブユニット（約20 kDa）と2つの小さなサブユニット（約10 kDa）から成るヘテロ二量体が会合した四量体を形成しています2～4。カスパーゼは他のプロテアーゼと同様に、自己触媒的または同様の特異性を有する酵素によるカスケードにおいて、タンパク質分解成熟を受ける前駆体として合成されます5。

caspase-3（CPP-32、Apopain、Yama）は、アポトーシス経路の主要なエフェクターカスパーゼで6、多くの異なる細胞系統に存在し、ポリADPリボースポリメラーゼ（PARP）、プロテインキナーゼCd、アクチンおよびDNA依存性プロテインキナーゼなど、さまざまな分子の切断に関与しています7。

※ 参考文献

  1. Slee, E.A., et al., Cell Death and Differ., 6, 1067～1074 (1999).[PMID:10578175]
  2. Walker, N.P., et al., Cell, 78, 343～352 (1994).[PMID:8035875]
  3. Rotonda, J., Nature Struct. Biol., 3(7), 619～625 (1996).[PMID:8673606]
  4. Kumar, S., Cell Death and Differ., 6, 1060～1066 (1999).[PMID:10578174]
  5. Alnemri, E.S., et al., Cell, 87, 171 (1996).[PMID:8861900]
  6. Trends Bochem. Sci. 22, 388 (1997). [PMID:9357314]

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測定原理

本製品に含まれる蛍光性基質Rhodamine 110 (R110)標識Z-DEVDは、活性型caspase 3/7の作用で蛍光色素Rhodamine 110 (R110)（励起 488 nm／蛍光 515～530 nm）を遊離します。


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特長

  • caspase 3/7活性をホモローガスに測定できます。
  • 最適化された細胞溶解バッファーにより、カスパーゼ活性を保持します。
  • 洗浄操作は不要で、ワンステップで測定できます。
  • 細胞試料から培地を洗浄除去する必要はなく、試薬を添加するだけで測定を行えます。
  • 細胞溶解液の調製やウエスタンブロッティングは不要です。
  • 浮遊細胞および接着細胞で使用できます。
  • 測定方法：蛍光
  • 測定波長：励起 488 nm／蛍光 515～530 nm

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キット内容

  • caspase 3/7 reagent (Z-DEVD)2 Rhodamine 110
  • Cell lysis buffer

※ 測定には蛍光プレートリーダーが必要です。

キット外観

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お問い合わせ先

（テクニカルサポート 試薬担当）

reagent@funakoshi.co.jp

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アポトーシス誘導／阻害物質