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下水試料からウイルス・バクテリア由来の核酸(DNA / RNA)を抽出するキット ExtractNow Sewage Water DNA / RNA Kit

掲載日情報:2023/06/15 現在Webページ番号:68474

下水試料から、磁気ビーズを用いてウイルス・バクテリア由来の核酸(DNA / RNA混合物)を抽出するキットです。下水試料を遠心分離した沈殿物・上清のいずれか、およびその両方から抽出する3種類のプロトコルが用意されており、実験目的によりご選択いただけます。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


下水試料からの核酸抽出について

最近の研究では、下水試料の沈殿物や上清から、ウイルス・バクテリア由来の核酸(DNA / RNA)や、バクテリア中に存在する薬剤耐性遺伝子をコードしたプラスミドなどの環状遊離DNAが検出されています。


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特長

  • 独自の磁気ビーズの使用により、試料中のDNAやRNAを効率的に濃縮できます。
  • 下水試料を遠心分離した沈殿物・上清のいずれか、およびその両方から抽出する3種類のプロトコルが用意されており、実験目的によりご選択いただけます。
  • 試料の種類・量:下水試料20 ml
    (分離後の沈殿物:100~200 mg、上清:~10 ml)
  • 操作時間:約60分

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操作方法概略

本キットでは、下記の3種類のプロトコルが用意されています。

プロトコル①:下水試料の沈殿物からの核酸抽出の場合

  1. 下水試料を遠心分離した後、上清をできるだけ完全に取り除く。
  2. 1×PBS(別途用意)を添加して再懸濁させた後、遠心分離を行い、上清を新しいチューブに移す。
  3. Lysis buffer E、Proteinase K、Carrier reagentを添加し、ボルテックスで撹拌後、60℃で15分間振とうする。
  4. Binding buffer C、Beads Mを添加し、ボルテックスで撹拌後、室温で5分間インキュベートする。
  5. チューブを磁気ラック上に置いた後、上清をできるだけ完全に取り除く。
  6. Washing buffer添加、撹拌、チューブを磁気ラック上に設置、上清の除去の一連の操作を、Washing buffer Cで2回行った後、続けてWashing buffer Dで2回行う。
  7. バッファー無しの状態で、50℃で5分間振とうする。
  8. RNase-free waterまたは10 mM Tris-HCl、pH 8.0~8.5(いずれも別途用意)を40~100 μl添加し、磁気ビーズを完全に再懸濁させた後、50℃で5分間振とうする。
  9. チューブを磁気ラック上に置いた後、上清(核酸溶出液)を新しいチューブに移す。

プロトコル②:下水試料の上清からの核酸抽出の場合

  1. 下水試料を遠心分離した後、上清を新しいチューブに移す。
  2. Enrichment reagent 1 / 2を順次添加し、撹拌後、室温で10分間インキュベートする。
  3. 遠心分離した後、上清をできるだけ完全に取り除く。
  4. RNase-free water(別途用意)を添加してチューブを3回反転させた後、遠心分離を行い、上清をできるだけ完全に取り除く。
  5. Lysis buffer E、Proteinase K、Carrier reagentを添加し、ボルテックスで撹拌後、60℃で15分間振とうする。
  6. 以下、プロトコル①のステップ4以降と同じ。

プロトコル③:下水試料の沈殿物・上清両方からの核酸抽出の場合

  1. 下水試料を遠心分離した後、上清を新しいチューブに移す(上清はステップ3で使用する)。
  2. ステップ1の沈殿物に1×PBS(別途用意)を添加して再懸濁させた後、遠心分離を行い、上清を新しいチューブに移す(これをステップ6で使用する)。
  3. ステップ1の上清に、Enrichment reagent 1 / 2を順次添加し、撹拌後、室温で10分間インキュベートする。
  4. 遠心分離した後、上清をできるだけ完全に取り除く。
  5. RNase-free water(別途用意)を添加してチューブを3回反転させた後、遠心分離を行い、上清をできるだけ完全に取り除く。
  6. Lysis buffer Eを添加して、ピペッティングで沈殿を懸濁後、これをステップ2の上清に加える。
  7. Proteinase K、Carrier reagentを添加し、ボルテックスで撹拌後、60℃で15分間振とうする。
  8. 以下、プロトコル①のステップ4以降と同じ。

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キット内容

  • Beads M
  • Proteinase K
  • Carrier reagent
  • Lysis buffer E
  • Binding buffer C
  • Washing buffer C / D
  • Enrichment reagent A / B

磁気ラック、インキュベーター機能を有するシェーカー、チューブ類など、別途必要な装置・器具・試薬類については、製品マニュアルをご確認下さい。


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価格

[在庫・価格 :2024年04月29日 17時15分現在]

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ExtractNow Sewage Water DNA/RNA Kit(50 extractions)
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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