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高い特異性と効率のqPCRマスターミックス RealQ Plus 2×Master Mix

掲載日情報:2019/06/05 現在Webページ番号:68113

リアルタイムPCR(qPCR)において、高い特異性と効率でDNA増幅を行うマスターミックスです。TaqMan probeなどのプローブ法用の製品と、蛍光色素法用の製品があります。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


再現性

図1:高い再現性
RealQ Plus 2×Master Mix Green, High ROXと20 ngのゲノムDNAを用いた検出を80回行ったところ、標準偏差はわずか0.084だった。


共通の特長

  • 優れた信頼性と、高い安定性および増幅効率が得られます。
  • ホットスタート酵素である TEMPaseを用いているため、室温下で試料調製が可能です。
  • DNAテンプレート、プライマー、プローブ(プローブ法のみ)を添加するだけで、qPCRを行えます。
  • 装置に合わせてROXの有無、濃度が異なる製品があり、ほとんどのリアルタイムPCR装置で最適な性能を発揮します(表参照)。

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プローブ法用製品(Master Mix for Probe)

  • 極めて高い特異性で検出を行えます。
  • TaqMan probeに最適化されていますが、Molecular BeaconやScorpionなどのプローブにも適合しています。
  • マルチプレックス解析にも使用できます。

信頼性

図2:高い増幅効率と信頼性
80 ngから80 pgまで順次4倍希釈をしたヒトゲノムDNAについて、Pthr用プローブ(75 bp)、RealQ Plus 2×Master Mix for Probe, High ROXを用いて検出した(三重試験)。極めて高い精度と増幅効率が示された(左:増幅曲線、右:DNA量とCt値の標準曲線)。


室温での安定性
室温での安定性

図3:調製済み反応液の室温での安定性
RealQ Plus 2×Master Mix for Probeに試料などを加えた反応液を調製し、室温・暗所で48時間(左)または72時間(右)インキュベート後にqPCRを行った。ホットスタートを行う前の段階におけるTEMPaseの高い安定性と完全な不活性化が示された。本製品を用いた場合、あらかじめ反応液を調製後、都合の良い時間にqPCRを実施することができる(上:増幅曲線、下:Ct値のプロット)。


マルチプレックスqPCRの高い増幅効率と信頼性

図4-1:マルチプレックスqPCRの高い増幅効率と信頼性
RealQ Plus 2×Master Mix for Probeは、1本のPCRチューブで最大4種類の標的DNAを解析することができる。本製品のマルチプレックス能力を調べるため、40~0.32 ngの範囲で順次5倍希釈をしたヒトゲノムDNAについて、4種類のプローブおよびRealQ Plus 2×Master Mix for Probeを用いて検出した(三重試験)。
Pthr1(FAM):紫色、DMD4(HEX):緑色、DMD6(Texas red):ピンク色、DMD47(Cy5):オレンジ色。


結果比較PtHr1 結果比較DMD4 結果比較DMD6 結果比較DMD47

図4-2:シングルプレックスとマルチプレックスqPCRとの結果比較
40~0.32 ngの範囲で順次5倍希釈をしたヒトゲノムDNAについて、4種類のプローブおよびRealQ Plus 2×Master Mix for Probeを用いて検出した(三重試験)。シングルプレックスqPCRとマルチプレックスqPCRでは、得られたCq値にわずかな変化が見られるのみであった。


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蛍光色素法用製品(Master Mix Green)

  • DNA結合性の蛍光色素を用いて検出します。
  • 高い特異性と再現性で検出を行えます。

信頼性

図5:高い増幅効率と信頼性
80 ngから80 pgまで順次4倍希釈をしたヒトゲノムDNAについて、PAHを標的としたプライマー(増幅産物203 bp)およびRealQ Plus 2×Master Mix Green, High ROXを用いて検出した(三重試験)。結果から極めて高い精度と増幅効率が示された(左:増幅曲線、中央:DNA量とCt値の標準曲線、右:融解曲線)。
標準曲線はTEMPase Hot Start DNA Polymeraseによる幅広い直線性範囲と高い正確性を示し、融解曲線はPCR産物の高い特異性を示す。


室温での安定性
室温での安定性

図6:調製済み反応液の室温での安定性
RealQ Plus 2×Master Mix Greenに試料などを加えた反応液を調製し、室温・暗所で48時間(左)または72時間(右)インキュベート後にqPCRを行った。ホットスタートを行う前の段階におけるTEMPaseの高い安定性と完全な不活性化が示された。本製品を用いた場合、あらかじめ反応液を調製後、都合の良い時間にqPCRを実施することができる(上:増幅曲線、下:Ct値のプロット)。


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対応するqPCR装置の一覧

表中の○をクリックすると対応した製品の価格表が表示されます。

メーカー名 装置名 プローブ法 蛍光色素法
Master Mix for Probe Master Mix Green
without
ROX
Low ROX High ROX without
ROX
Low ROX High ROX
Bio-Rad CFX 96 Touch / 384 Touch / Connect,
Chromo4, iCycler iQ, MyiQ, Opticon 2
Roche Lightcycler 96 / 480 /1536 / Nano
Qiagen
(Corbett)
Rotor-Gene Q / 6000
Thermo Fisher Scientific
(Applied Biosystems)
ABI 7000 / 7300 / 7700 / 7900 / 7900HT,
StepOne, StepOnePlus
ABI 7500 / 7500 Fast, ViiA7,
QuantStudio 3 / 5 / 6 Flex / 7 Flex
QuantStudio 12K Flex
PikoReal
Agilent Technologies
(Stratagene)
Mx3000P, Mx3005P, Mx4000, AriaMx
Cepheid SmartCycler
Bio Molecular Systems Mic qPCR cycler

OpenArray技術を用いたqPCRを行う場合


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価格表

■ Master Mix for Probe

[在庫・価格 :2024年04月27日 11時15分現在]

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RealQ Plus 2x Master Mix for Probe without ROX 400R
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■ Master Mix Green

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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