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高い特異性と効率のqPCRマスターミックス RealQ Plus 2×Master Mix

掲載日情報：2019/06/05 現在Webページ番号：68113

アンプリコン /
Ampliqon
[メーカー略称：AMQ]

リアルタイムPCR（qPCR）において、高い特異性と効率でDNA増幅を行うマスターミックスです。TaqMan probeなどのプローブ法用の製品と、蛍光色素法用の製品があります。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


再現性

図1：高い再現性
RealQ Plus 2×Master Mix Green, High ROXと20 ngのゲノムDNAを用いた検出を80回行ったところ、標準偏差はわずか0.084だった。


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共通の特長

  • 優れた信頼性と、高い安定性および増幅効率が得られます。
  • ホットスタート酵素である TEMPaseを用いているため、室温下で試料調製が可能です。
  • DNAテンプレート、プライマー、プローブ（プローブ法のみ）を添加するだけで、qPCRを行えます。
  • 装置に合わせてROXの有無、濃度が異なる製品があり、ほとんどのリアルタイムPCR装置で最適な性能を発揮します（表参照）。

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プローブ法用製品（Master Mix for Probe）

  • 極めて高い特異性で検出を行えます。
  • TaqMan probeに最適化されていますが、Molecular BeaconやScorpionなどのプローブにも適合しています。
  • マルチプレックス解析にも使用できます。

信頼性

図2：高い増幅効率と信頼性
80 ngから80 pgまで順次4倍希釈をしたヒトゲノムDNAについて、Pthr用プローブ（75 bp）、RealQ Plus 2×Master Mix for Probe, High ROXを用いて検出した（三重試験）。極めて高い精度と増幅効率が示された（左：増幅曲線、右：DNA量とCt値の標準曲線）。


室温での安定性
室温での安定性

図3：調製済み反応液の室温での安定性
RealQ Plus 2×Master Mix for Probeに試料などを加えた反応液を調製し、室温・暗所で48時間（左）または72時間（右）インキュベート後にqPCRを行った。ホットスタートを行う前の段階におけるTEMPaseの高い安定性と完全な不活性化が示された。本製品を用いた場合、あらかじめ反応液を調製後、都合の良い時間にqPCRを実施することができる（上：増幅曲線、下：Ct値のプロット）。


マルチプレックスqPCRの高い増幅効率と信頼性

図4-1：マルチプレックスqPCRの高い増幅効率と信頼性
RealQ Plus 2×Master Mix for Probeは、1本のPCRチューブで最大4種類の標的DNAを解析することができる。本製品のマルチプレックス能力を調べるため、40～0.32 ngの範囲で順次5倍希釈をしたヒトゲノムDNAについて、4種類のプローブおよびRealQ Plus 2×Master Mix for Probeを用いて検出した（三重試験）。
Pthr1（FAM）：紫色、DMD4（HEX）：緑色、DMD6（Texas red）：ピンク色、DMD47（Cy5）：オレンジ色。


結果比較PtHr1 結果比較DMD4 結果比較DMD6 結果比較DMD47

図4-2：シングルプレックスとマルチプレックスqPCRとの結果比較
40～0.32 ngの範囲で順次5倍希釈をしたヒトゲノムDNAについて、4種類のプローブおよびRealQ Plus 2×Master Mix for Probeを用いて検出した（三重試験）。シングルプレックスqPCRとマルチプレックスqPCRでは、得られたCq値にわずかな変化が見られるのみであった。


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蛍光色素法用製品（Master Mix Green）

  • DNA結合性の蛍光色素を用いて検出します。
  • 高い特異性と再現性で検出を行えます。

信頼性

図5：高い増幅効率と信頼性
80 ngから80 pgまで順次4倍希釈をしたヒトゲノムDNAについて、PAHを標的としたプライマー（増幅産物203 bp）およびRealQ Plus 2×Master Mix Green, High ROXを用いて検出した（三重試験）。結果から極めて高い精度と増幅効率が示された（左：増幅曲線、中央：DNA量とCt値の標準曲線、右：融解曲線）。
標準曲線はTEMPase Hot Start DNA Polymeraseによる幅広い直線性範囲と高い正確性を示し、融解曲線はPCR産物の高い特異性を示す。


室温での安定性
室温での安定性

図6：調製済み反応液の室温での安定性
RealQ Plus 2×Master Mix Greenに試料などを加えた反応液を調製し、室温・暗所で48時間（左）または72時間（右）インキュベート後にqPCRを行った。ホットスタートを行う前の段階におけるTEMPaseの高い安定性と完全な不活性化が示された。本製品を用いた場合、あらかじめ反応液を調製後、都合の良い時間にqPCRを実施することができる（上：増幅曲線、下：Ct値のプロット）。


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対応するqPCR装置の一覧

表中の○をクリックすると対応した製品の価格表が表示されます。

メーカー名 装置名 プローブ法 蛍光色素法
Master Mix for Probe Master Mix Green
without
ROX		 Low ROX High ROX without
ROX		 Low ROX High ROX
Bio-Rad CFX 96 Touch / 384 Touch / Connect,
Chromo4, iCycler iQ, MyiQ, Opticon 2		 ○ － － ○ － －
Roche Lightcycler 96 / 480 /1536 / Nano ○ － － ○ － －
Qiagen
(Corbett)		 Rotor-Gene Q / 6000 ○ － － ○ － －
Thermo Fisher Scientific
(Applied Biosystems)		 ABI 7000 / 7300 / 7700 / 7900 / 7900HT,
StepOne, StepOnePlus		 － － ○ － － ○
ABI 7500 / 7500 Fast, ViiA7,
QuantStudio 3 / 5 / 6 Flex / 7 Flex		 － ○ － － ○ －
QuantStudio 12K Flex ○ ＊ ○ － ○ ＊ ○ －
PikoReal ○ － － ○ － －
Agilent Technologies
(Stratagene)		 Mx3000P, Mx3005P, Mx4000, AriaMx － ○ － － ○ －
Cepheid SmartCycler ○ － － ○ － －
Bio Molecular Systems Mic qPCR cycler ○ － － ○ － －

＊OpenArray技術を用いたqPCRを行う場合


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価格表

■ Master Mix for Probe

[在庫・価格 ：2025年04月26日 10時15分現在]

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RealQ Plus 2x Master Mix for Probe without ROX 400R
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（テクニカルサポート 試薬担当）

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