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赤血球を溶解するバッファー RBC Lysis Buffer

掲載日情報:2020/06/11 現在Webページ番号:68079

RBC Lysis Bufferは、単細胞の懸濁液中の赤血球を溶解するバッファーです。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


RBC Lysis Bufferボトル

特長

  • 白血球への影響を最小限に抑え、かつ赤血球の溶解に最適化するように調製、検証されています。
  • Ready-to-Useの1×溶液と、10×溶液の製品ラインナップがあります。
  • 滅菌済み
  • pH7.4

有核赤血球の溶解はほとんど生じません。

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1×溶液の組成

  • NH4Cl (155 mmol/L)
  • KHCO3 (10 mmol/L)
  • EDTA (0.1 mmol/L)

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操作方法概略

■ 1×溶液

■ 血液試料からの赤血球溶解の場合

  1. 低温(4~8°C)で保存してある1×RBC Lysis Bufferを取り出す。
  2. 細胞懸濁液を10倍量の1×RBC Lysis Bufferで希釈する。
  3. 5秒間ボルテックスし、4〜8℃で10〜15分間(15分以内)インキュベートする。
  4. 5秒間ボルテックスし、室温、300×gで10分間、遠心分離を行う。
  5. 沈殿を乱さないように上清を除去する。
  6. 沈殿を適切なバッファー(PBS、洗浄用バッファーなど)に再懸濁し、下流の操作を行う。

■ 組織試料からの赤血球溶解の場合

  1. 低温(4~8°C)で保存してある1×RBC Lysis Bufferを取り出す。
  2. 細胞懸濁液を10倍量の1×RBC Lysis Bufferで希釈する。
  3. 5秒間ボルテックスし、4〜8℃で2分間インキュベートする。(透明な赤になったら、赤血球の溶解は完了です。)
  4. 5秒間ボルテックスし、室温、300×gで10分間、遠心分離を行う。
  5. 沈殿を乱さないように上清を除去する。
  6. 沈殿を適切なバッファー(PBS、洗浄用バッファーなど)に再懸濁し、下流の操作を行う。

■ 10×溶液

■ ヒト末梢血および骨髄試料からの赤血球溶解の場合

  1. 10×RBC Lysis Bufferを脱イオン水で1×溶液に希釈する。使用前に、1×溶液を室温に戻す。
  2. 全血溶解のために、試料量の20倍量の1×RBC Lysis Bufferを加える(例:100 μlまでの全血に、2 mlの1×RBC Lysis Bufferを加える)。
  3. RBC Lysis Buffer添加後、直ちにチューブをボルテックスで穏やかに撹拌する。遮光条件下、氷上または冷蔵庫(4℃)中で10~15分間インキュベートする。
  4. 350×gで10分間、遠心分離を行う。沈殿を乱さないように上清を除去する。
  5. 沈殿を適切なバッファー(PBS、洗浄用バッファーなど)に再懸濁し、洗浄を1回行う。
  6. 沈殿を再懸濁し、下流の操作を行う。

■ マウス脾臓試料からの赤血球溶解の場合

  1. マウス脾臓を摘出し、シングルセル懸濁液を調製する。
  2. 350×gで遠心分離を行って細胞を沈殿させ、上清を吸引除去する。
  3. 10×RBC Lysis Bufferを脱イオン水で1×溶液に希釈し、沈殿させた細胞を5 mlの1×RBC Lysis Bufferに再懸濁する。
  4. 氷上または冷蔵庫(4℃)中で4~5分間インキュベートし、時々振とうする。
  5. 1×PBSを20~30 ml加えて、反応を停止させる。
  6. 350×gで遠心分離を行って、上清を除去する。
  7. 沈殿を適切なバッファー(PBS、洗浄用バッファーなど)に再懸濁し、洗浄を1回行う。
  8. 細胞数を計数し、適切な密度に調整後、細胞分離・細胞染色などの操作を行う。

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価格

■ 1×溶液(Ready-to-Use)

[在庫・価格 :2024年07月17日 20時55分現在]

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シングルセルの懸濁液中の赤血球を溶解するバッファー。白血球への影響を最小限に抑え,かつ赤血球の溶解に最適化するように調製,検証されている。
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■ 10×溶液

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RBC Lysis Buffer, 10x

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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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