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グラム陰性菌の外膜小胞を単離するキット ExoBacteria OMV Isolation Kit

掲載日情報:2018/06/07 現在Webページ番号:68058

E. coliP. putidaなどのグラム陰性菌の培養液から,外膜小胞(Outer Membrane Vesicles,OMV)を単離するキットです。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

OMVのTEM像

図1:本製品(A)および超遠心分離(B)で単離したE. coli由来OMVのTEM(透過型電子顕微鏡)像の比較
それぞれの手法で得られたOMV(水色矢印)の外見は類似している。また,超遠心分離では不要なタンパク質の凝集体(赤色矢印)が見られる。

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特長

  • OMV単離用に開発されたユニークな製品です。
  • 超遠心分離に匹敵する純度・収量で,沈殿操作を用いずに重力式(自然落下式)カラムにより,1時間以内で簡便にOMVを単離できます。
  • 得られたOMVは,細菌間の情報伝達研究,感染症の発症機序研究,改変OMVを用いたワクチン開発,がん治療,免疫応答の調節などの研究に有用です。
  • 30 mlの培養液からのOMV単離を20回行うのに十分な量の試薬とカラム類がキットには含まれており,単離のスケールはフレキシブルに調整できます。

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使用例

本製品および超遠心分離で単離したE. coli由来OMVの粒子径分布および収量の比較

OMVの粒子径分布

A. fNTA法(蛍光ナノ粒子トラッキング解析法)によるOMVの粒子径分布の比較

本製品の方が,粒子径分布が狭く,より均一なOMVを得られる。

OMVの収量

B. 収量比較

本製品では,超遠心分離の約20倍の収量でOMVを得られる。



本製品および超遠心分離で単離したE. coli由来OMVのウエスタンブロッティングによる収量比較

OMVウエスタン

図3:
OMVのマーカーとしてGroEL(A),キャリーオーバータンパク質のマーカーとしてFlagellin(B)を検出した。本製品は超遠心分離と比べて,OMVの収量が高く,キャリーオーバータンパク質の量が少ないことがわかる。


本製品および超遠心分離で単離したOMVに含まれるタンパク質の同定

OMV_MS解析

A. 得られたOMVをMS解析して,含まれるタンパク質の同定を行った。
本製品で単離したOMVのみから同定されたタンパク質が258種類,超遠心分離で単離したOMVのみから同定されたタンパク質が7種類,双方のOMVから同定されたタンパク質が96種類となった。
B. 同定されたタンパク質がEVPediaデータベースに登録されているかを確認した。これは本製品で単離したOMVが,より特異性が高いことの実証となる。

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操作方法概略

  1. バクテリアの培養液を5,000×g,20分,4℃で2回遠心分離して,菌体・デブリを除去する。
  2. 培養液上清を0.45 μmおよび0.22 μmの吸引フィルターでろ過する。
  3. OMV binding resinのボトルを十分に撹拌した後,1 mlのレジンをピペットでGravity flow columnに加える。
  4. 10 mlのBinding bufferをカラムに加えて平衡化し,カラム先端部のキャップを外し,フロースルーを廃棄する。
  5. Column stopperをカラムの底部に取り付け,2. の培養液上清30 mlをカラムに加えた後,カラムの上部にColumn capを取り付ける。
  6. カラムを回転式ラックに設置し,4℃で30分間,撹拌しながらインキュベートする。
  7. カラムをラックに設置し,上下のcap / stopperを取り外す。
  8. 15 mlのBinding bufferでの洗浄を3回行う。
  9. Column stopperをカラムの底部に取り付け,1.5 mlのElution bufferをカラムに加える。
  10. 室温で2分間インキュベートし,その間,30秒毎にカラムを穏やかに撹拌する。
  11. stopperを取り外し,新しいマイクロ遠心チューブにOMVを溶出させる。

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キット内容

  • OMV binding resin
  • Binding buffer
  • Elution buffer
  • Gravity flow column
  • Column stopper
  • Column cap

吸引フィルター(0.45 μmおよび0.22 μm),カラム用ラック(静置用,回転撹拌用),ピペット類などが別途必要です。



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価格

[在庫・価格 :2020年07月09日 16時51分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
ExoBacteria OMV Isolation Kit(for E.coli and other gram-negative bacteria)
1週間程度  0
説明文
E. coliやP. putidaなどのグラム陰性菌の培養液から,外膜小胞(Outer Membrane Vesicles,OMV)を単離するキット。
法規制等
保存条件 室温,4℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年7月15日号 p.16
ニュース2018年8月1日号 p.36

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[在庫・価格 :2020年07月09日 16時51分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。

ExoBacteria OMV Isolation Kit(for E.coli and other gram-negative bacteria)

文献数:0

  • 商品コード:EXOBAC100A-1
  • メーカー:SBI
  • 包装:1kit
  • 価格:¥87,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
  • 法規制等:

説明文 E. coliやP. putidaなどのグラム陰性菌の培養液から,外膜小胞(Outer Membrane Vesicles,OMV)を単離するキット。
法規制等
保存条件 室温,4℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2019年7月15日号 p.16
ニュース2018年8月1日号 p.36

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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