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グラム陰性菌の外膜小胞を単離するキット ExoBacteria OMV Isolation Kit

掲載日情報:2018/06/07 現在Webページ番号:68058

E. coliP. putidaなどのグラム陰性菌の培養液から、外膜小胞(Outer Membrane Vesicles、OMV)を単離するキットです。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

E. coli由来OMVのTEM(透過型電子顕微鏡)像の比較

OMVのTEM像

本製品で回収したOMV

OMVのTEM像

超遠心法で回収したOMV

OMVのTEM像 Exosome(エキソソーム、エクソソーム)特集バナー

本製品および超遠心分離で単離したE. coli由来OMVのTEM(透過型電子顕微鏡)像

それぞれの手法で得られたOMV(水色矢印)の外見は類似している。また、超遠心分離では不要なタンパク質の凝集体(赤色矢印)が見られる。


特長

  • OMV単離用に開発されたユニークな製品です。
  • 超遠心分離に匹敵する純度・収量で、沈殿操作を用いずに重力式(自然落下式)カラムにより、1時間以内で簡便にOMVを単離できます。
  • 1時間以内にOMVを単離できます。
  • 得られたOMVは、細菌間の情報伝達研究、感染症の発症機序研究、改変OMVを用いたワクチン開発、がん治療、免疫応答の調節などの研究に有用です。
  • 30 mlの培養液からのOMV単離を20回行うのに十分な量の試薬とカラム類がキットには含まれており、単離のスケールはフレキシブルに調整できます。

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使用例

E. coli由来OMVの粒子径分布の比較
E. coli由来OMVの粒子径分布の比較
本製品および超遠心分離で単離したE. coli由来OMVについて、fNTA法(蛍光ナノ粒子トラッキング解析法)により粒子径分布を比較した。本製品の方が、粒子径分布が狭く、より均一なOMVを得られる。


OMVの収量
E. coli由来OMVの収量の比較
本製品では、超遠心分離の約20倍の収量でOMVを得られる。


キャリーオーバータンパク質量の比較
キャリーオーバータンパク質量の比較
OMVのマーカーとしてGroEL、キャリーオーバータンパク質のマーカーとしてFlagellinを検出した。本製品は超遠心分離と比べて、OMVの収量が高く、キャリーオーバータンパク質の量が少ないことがわかる。


OMV_MS解析
単離したOMVに含まれるタンパク質の同定
A. 得られたOMVをMS解析して、含まれるタンパク質の同定を行った。
本製品で単離したOMVのみから同定されたタンパク質が258種類、超遠心分離で単離したOMVのみから同定されたタンパク質が7種類、双方のOMVから同定されたタンパク質が96種類となった。
B. 同定されたタンパク質がEVPediaデータベースに登録されているかを確認した。これは本製品で単離したOMVが、より特異性が高いことの実証となる。


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操作方法概略

  1. バクテリアの培養液を5,000×g、20分、4℃で2回遠心分離して、菌体・デブリを除去する。
  2. 培養液上清を0.45 μmおよび0.22 μmの吸引フィルターでろ過する。
  3. OMV binding resinのボトルを十分に撹拌した後、1 mlのレジンをピペットでGravity flow columnに加える。
  4. 10 mlのBinding bufferをカラムに加えて平衡化し、カラム先端部のキャップを外し、フロースルーを廃棄する。
  5. Column stopperをカラムの底部に取り付け、2. の培養液上清30 mlをカラムに加えた後、カラムの上部にColumn capを取り付ける。
  6. カラムを回転式ラックに設置し、4℃で30分間、撹拌しながらインキュベートする。
  7. カラムをラックに設置し、上下のcap / stopperを取り外す。
  8. 15 mlのBinding bufferでの洗浄を3回行う。
  9. Column stopperをカラムの底部に取り付け、1.5 mlのElution bufferをカラムに加える。
  10. 室温で2分間インキュベートし、その間、30秒毎にカラムを穏やかに撹拌する。
  11. stopperを取り外し、新しいマイクロ遠心チューブにOMVを溶出させる。

User's Voice

Arbor Assays 社アッセイキット関するお客様からのフィードバック

大学ユーザー様
「グラム陰性細菌の外膜小胞を単離するために超遠心機が不要で、簡単に短時間で精製できるので重宝しています。
得られた膜小胞を用いたその後の実験結果にも満足しています。」


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キット内容

  • OMV binding resin
  • Binding buffer
  • Elution buffer
  • Gravity flow column
  • Column stopper
  • Column cap

吸引フィルター(0.45 μmおよび0.22 μm)、カラム用ラック(静置用、回転撹拌用)、ピペット類などが別途必要です。

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価格

[在庫・価格 :2024年03月29日 00時00分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
ExoBacteria OMV Isolation Kit(for E.coli and other gram-negative bacteria)
10日程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
E. coliやP. putidaなどのグラム陰性菌の培養液から,外膜小胞(Outer Membrane Vesicles,OMV)を単離するキット。
法規制等
保存条件 室温,4℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2023年2月1日号 p.20

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ExoBacteria OMV Isolation Kit(for E.coli and other gram-negative bacteria)

文献数: 0

説明文 E. coliやP. putidaなどのグラム陰性菌の培養液から,外膜小胞(Outer Membrane Vesicles,OMV)を単離するキット。
法規制等
保存条件 室温,4℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2023年2月1日号 p.20

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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