イルミナNGSに最適なRNAライブラリー構築キット TrueQuant SmallRNA Seq Kit

1. DNase処理を行った高品質のtotal RNAまたは精製small RNAを準備する。
2. ランダムエンド末端を有するアダプターをsmall RNAの3’末端にライゲーションする。
3. 第2アダプターを5’末端にライゲーションする。
4. 逆転写反応により、1つ目のcDNAを合成する。
5. ユニバーサルフォワードプライマーとサンプルインデックスを割り当てるための特異的リバースプライマーの一つを用いてライブラリーを増幅する。
6. 磁気ビーズを用いて、PCRプライマーを除去する。

• 製品の仕様
• 特長
• 使用例
• キット内容
• 引用文献
• 価格

製品の仕様

品名		TrueQuant SmallRNA Seq Kit
商品コード		16047.1	16047.3
反応数		6 reactions	24 reactions
必要試料量	total RNA（DNase処理）	1～200 ng/reaction
	精製small RNA	≦0.01 ng/reaction

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特長

• miRNA、piRNAおよび他のsmall RNAの正確な同定と定量が可能です。
• 200μlの血漿からsmall RNA-Seqプロファイルを作製できます。
• 単一チューブで全操作を簡便に行うことができ、損失を最小化し、効率は大幅に向上します。
• ゲルを使用しないため、非常に少量のsmall RNAや分解度の大きいtotal RNAも処理することができます。
• 磁性ビーズによってPCRプライマーを除去することで、最高品質のライブラリー配列が得られます。
• 本製品で作製したライブラリーは、イルミナ社のMiniSeq、MiSeq、HiSeqおよびNextSeqプラットホームによるシークエンシングにそのままご使用いただけます。

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使用例

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キット内容

操作ステップ	キット内容
全反応	・Nuclease-free water
3' Adapter Ligation	・3' adapter ・Ligase buffer ・Ligase enhancer ・RI enzyme mix ・3' ligase mix ・AI enzyme mix 1/2
5' Adapter Ligation	・5' adapter ・5' ligase mix
Reverse Transcription	・RT primer mix ・RT buffer mix ・RT enzyme mix ・PI enzyme mix
PCR Amplification	・Index primer ID 2, 4, 6, 12 ・PCR buffer mix ・PCR enzyme mix

• SPRI Beads：Agencourt AMPure XP（BECKMAN COULTER）またはAgencourt SPRIselect（BECKMAN COULTER）
• Fluorometric RNA Quantitation：Qubit RNA High Sensitivity Assay
• Fluorometric DNA Quantitation：Qubit dsDNA High Sensitivity Assay

• Bioanalyzer、TapeStation (Agilent)、LabChip GX/GXII (PerkinElmer)など
• 蛍光測定装置
• マグネチックスタンド（1.5 mlチューブ対応）
• サーマルサイクラー
• 卓上遠心分離機
• ボルテックスミキサー
• シングルチャンネルピペット

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引用文献

• Wecker T,, et al., MicroRNA Profiling in Aqueous Humor of Individual Human Eyes by Next-Generation Sequencing., Invest Ophthalmol Vis Sci., Apr 1;57(4), 1706～1713(2016).
• Muller S, et al., Next-generation sequencing reveals novel differentially regulated mRNAs, lncRNAs, miRNAs, sdRNAs and a piRNA in pancreatic cancer., Mol Cancer, Apr 25;14(1), 94 (2015).

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価格

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