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クローニング不要の簡便なタンパク質合成キット 無細胞タンパク質合成キット

掲載日情報:2019/10/16 現在Webページ番号:67843

遺伝子断片から転写鋳型の作製,転写,翻訳の3ステップで目的タンパク質を合成するキットです。従来の一般的なE.coli を用いたクローニングによる方法では,約2週間を要し,必ずしも合成がうまく行かない場合もありました。本製品は,転写鋳型の作製にPCRだけを用いて,わずか1日で,様々なタンパク質高い成功率で合成することができます。
NUProtein株式会社のサポートページはこちらをご覧下さい。プライマーリスト,プライマー設計ツールなど実験に役立つ情報が掲載されています。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。


タンパク質合成系の比較

本製品と一般的なE.coli によるタンパク質合成系の比較

合成実績 タンパク質合成系の比較

本製品を用いたタンパク質の合成実績とウサギ腸炎ビブリオ抗体(右)のFab発現
ELISA Assay Result:合成したFabのELISAによる抗体抗原活性の確認
(データ提供:名城大学 加藤研究員*,名古屋大学 中野教授*
*:iBody株式会社

技術的バックグラウンド

鋳型作成 鋳型作成

A. 鋳型作成

タンパク質の合成確率を飛躍的に向上させる塩基配列の付加!

mRNA を安定化させる非翻訳領域の短い塩基配列が発見されました。
これを3’側に付与することでmRNA の安定性を高め,目的タンパク質の合成能を飛躍的に向上させることに成功しました。
また,本製品を用いることにより,目的タンパク質のN 末端に加えC 末端にもタグ標識をPCR だけで付与することが可能になりました。
これは,目的タンパク質のN 末端側に活性ドメインがあり,タグの付加により相互作用を阻害する可能性がある場合などに有効です。

B. 翻訳

作製したmRNAは,次に最適化されたコムギ胚芽抽出液を用いてタンパク質の発現を行います。この組み合わせにより,高いタンパク質合成の成功率が得られ,かつ膜タンパク質の合成も可能となりました。

翻訳

BMC(CAS番号:257641-01-3)追加による可溶化画分の増加

リフォールディング剤のBMC(trans-1,2-bis(2-mercaptoacetamido)cyclohexane)をアミノ酸溶液に0.1 mg/ml 供し頂ければ,SS結合をよく誘導することが報告されており,標的タンパク質が十分可溶化発現しない場合,活性が低い場合などに追加の添加試薬としてお使い頂けます。



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転写・翻訳溶液の調製方法と手技の動画

無細胞タンパク質合成キットをつかった、転写・翻訳溶液の調製方法と手技の動画です 。

■転写反応溶液の調製と転写



■エタノール沈殿から遠心



■遠心から翻訳反応まで



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特長

  • 一般的に設備されているラボの機器以外の特殊な装置や試薬類は必要ありません。
  • 約1日で目的タンパク質が得られます。
  • 5’(N末端)側の他に3’(C末端)側にタグを付与することが可能です。
  • mRNAを安定化する40 bpの配列を付与することで,タンパク質の合成確率を飛躍的に向上させることができます。
  • タンパク質の局在性に依存せず,細胞内,膜,分泌タンパク質のいずれも合成が可能です。
  • ヘテロダイマーも,2種のmRNAの混合により合成できます。
  • システインリッチのタンパク質の合成実績もあります。
  • 数10~200 kDa超までの分子サイズのタンパク質の合成に適応可能です。

本キット中の3′UTR配列は特許技術(特許番号第6738111号)です。また,特許庁より,本キットは,株式会社セルフリーサイエンス特許 第3753358号の特許請求の範囲の請求項3に係わる発明の技術的範囲に属しない,との判定を頂いております。
反応液110 μlに対してWheat germ extractを10 μlより多く使うと,タンパク質収量が低下しますのでご注意下さい。


他社競合品との機能・コストの比較
製品 本製品 A社製品 B社製品
由来 コムギ胚芽 大腸菌(再構成)
合成能 酵素,転写因子
膜タンパク質の可溶化発現
(リポソーム等の添加が必要)

(リポソーム等の添加が必要)
ジスルフィド結合 ×
(追加試薬が必要)
修飾機能・タグ付け
N末端,C末端共にPCRで様々なタグ付け可能

リニアテンプレート(Hisタグのみ)別売
スループット 1日
(PCR時間込)
10日
(ベクター構築の場合)
約4時間
収量/培地 0.3~0.8単位 0.2~0.8単位 1単位
反応方法 単純混合あるいは透析法
(透析外液別売)
透析法
(透析デバイス込)
単純混合
価格(反応液1mlあたり) 安価 高価 高価
PCR酵素つきキット - -
翻訳試薬セット - -

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本製品で合成したタンパク質の適用

  • タンパク質間相互作用解析
  • タンパク質-DNA相互作用分析
  • 抗原・ペプチドホルモンの合成
  • 酵素・タンパク質の変異体のハイスループット合成
  • Fab断片,糖鎖不要の抗体,ライブラリ作製
  • nanobody,zipbody

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使用例

新型コロナウイルスのACE2タンパク質受容体結合ドメイン(RBD)の発現例

無細胞タンパク質合成キット(#PSS5100)を用いた新型コロナウイルスのACE2タンパク質レセプター結合ドメイン(RBD)の発現例
遺伝子のご提供:日本獣医生命科学大学 渋井教授

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キット内容(クラシックキット,#PSS5100)

転写試薬(25 μl×50反応)

  • T7 RNA polymerase(50 μl)
  • 10× Transcription buffer(125 μl)
  • 100 mM DTT(62.5 μl)
  • 25 mM NTP mix(125 μl)

翻訳試薬(110 μl×100反応)

  • Wheat germ extract(1 ml)
  • Amino acid mix(1 ml×2)
合成キット外観

[在庫・価格 :2023年12月01日 11時51分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
無細胞タンパク質合成キット
1週間程度 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ ニュース2023年3月15日号 p.24
ニュース2022年5月合併号 p.36

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[在庫・価格 :2023年12月01日 11時51分現在]

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無細胞タンパク質合成キット

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掲載カタログ ニュース2023年3月15日号 p.24
ニュース2022年5月合併号 p.36

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キット内容(オールインワンキット,#BCF5100)

PCR試薬(50 μl×60反応)

  • PCR DNA polymerase(60 μl)
  • 10× PCR buffer(300 μl)
  • 25 mM MgSO4(300 μl)
  • 2 mM dNTP mix(300 μl)

転写試薬(25 μl×50反応)

  • T7 RNA polymerase(50 μl)
  • 10× Transcription buffer(125 μl)
  • 100 mM DTT(62.5 μl)
  • 25 mM NTP mix(125 μl)

翻訳試薬(110 μl×100反応)

  • Wheat germ extract(1 ml)
  • Amino acid mix(1 ml×2)
オールインワンキット外観

[在庫・価格 :2023年12月01日 11時51分現在]

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無細胞タンパク質合成 オールインワンキット
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掲載カタログ ニュース2023年3月15日号 p.24
ニュース2022年5月合併号 p.36

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[在庫・価格 :2023年12月01日 11時51分現在]

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無細胞タンパク質合成 オールインワンキット

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掲載カタログ ニュース2023年3月15日号 p.24
ニュース2022年5月合併号 p.36

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キット構成品の別売品

[在庫・価格 :2023年12月01日 11時51分現在]

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翻訳試薬セット 100反応
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透析法用別売アミノ酸ミックス
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[在庫・価格 :2023年12月01日 11時51分現在]

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翻訳試薬セット 100反応

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透析法用別売アミノ酸ミックス

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メーカーインタビュー


メーカーインタビュー

NUProtein 株式会社は,膜タンパク質の合成も可能な「無細胞タンパク質合成キット」を開発し,販売している名古屋大学発のベンチャー企業です。 今回は,同社社長の南賢尚 氏にお話を伺いました。 NUProtein 株式会社の紹介
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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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