クローニング不要の簡便なタンパク質合成キット 無細胞タンパク質合成キット

遺伝子断片から転写鋳型の作製，転写，翻訳の3ステップで目的タンパク質を合成するキットです。従来の一般的なE.coli を用いたクローニングによる方法では，約2週間を要し，必ずしも合成がうまく行かない場合もありました。本製品は，転写鋳型の作製にPCRだけを用いて，わずか1日で，様々なタンパク質を高い成功率で合成することができます。
※ NUProtein株式会社のサポートページはこちらをご覧下さい。プライマーリスト，プライマー設計ツールなど実験に役立つ情報が掲載されています。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

本製品と一般的なE.coli によるタンパク質合成系の比較

本製品を用いたタンパク質の合成実績とウサギ腸炎ビブリオ抗体（右）のFab発現
ELISA Assay Result：合成したFabのELISAによる抗体抗原活性の確認
（データ提供：名城大学 加藤研究員*，名古屋大学 中野教授*）
*：iBody株式会社

A. 鋳型作成

タンパク質の合成確率を飛躍的に向上させる塩基配列の付加！

mRNA を安定化させる非翻訳領域の短い塩基配列が発見されました。
これを3’側に付与することでmRNA の安定性を高め，目的タンパク質の合成能を飛躍的に向上させることに成功しました。
また，本製品を用いることにより，目的タンパク質のN 末端に加えC 末端にもタグ標識をPCR だけで付与することが可能になりました。
これは，目的タンパク質のN 末端側に活性ドメインがあり，タグの付加により相互作用を阻害する可能性がある場合などに有効です。

B. 翻訳

作製したmRNAは，次に最適化されたコムギ胚芽抽出液を用いてタンパク質の発現を行います。この組み合わせにより，高いタンパク質合成の成功率が得られ，かつ膜タンパク質の合成も可能となりました。

※ BMC(CAS番号：257641-01-3）追加による可溶化画分の増加

リフォールディング剤のBMC(trans-1,2-bis(2-mercaptoacetamido)cyclohexane)をアミノ酸溶液に0.1 mg/ml 供し頂ければ，SS結合をよく誘導することが報告されており，標的タンパク質が十分可溶化発現しない場合，活性が低い場合などに追加の添加試薬としてお使い頂けます。

無細胞タンパク質合成キットをつかった、転写・翻訳溶液の調製方法と手技の動画です 。

＊ 本キット中の3′UTR配列は特許技術（特許番号第6738111号）です。また，特許庁より，本キットは，株式会社セルフリーサイエンス特許 第3753358号の特許請求の範囲の請求項3に係わる発明の技術的範囲に属しない，との判定を頂いております。
※ 反応液110 μlに対してWheat germ extractを10 μlより多く使うと，タンパク質収量が低下しますのでご注意下さい。

無細胞タンパク質合成キット（#PSS5100）を用いた新型コロナウイルスのACE2タンパク質レセプター結合ドメイン（RBD）の発現例
遺伝子のご提供：日本獣医生命科学大学 渋井教授

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キット内容（クラシックキット，#PSS5100）

転写試薬（25 μl×50反応）

• T7 RNA polymerase（50 μl）
• 10× Transcription buffer（125 μl）
• 100 mM DTT（62.5 μl）
• 25 mM NTP mix（125 μl）

翻訳試薬（110 μl×100反応）

• Wheat germ extract（1 ml）
• Amino acid mix（1 ml×2）

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キット内容（オールインワンキット，#BCF5100）

PCR試薬（50 μl×60反応）

• PCR DNA polymerase（60 μl）
• 10× PCR buffer（300 μl）
• 25 mM MgSO₄（300 μl）
• 2 mM dNTP mix（300 μl）

転写試薬（25 μl×50反応）

• T7 RNA polymerase（50 μl）
• 10× Transcription buffer（125 μl）
• 100 mM DTT（62.5 μl）
• 25 mM NTP mix（125 μl）

翻訳試薬（110 μl×100反応）

• Wheat germ extract（1 ml）
• Amino acid mix（1 ml×2）

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キット構成品の別売品

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メーカーインタビュー

NUProtein 株式会社は，膜タンパク質の合成も可能な「無細胞タンパク質合成キット」を開発し，販売している名古屋大学発のベンチャー企業です。 今回は，同社社長の南賢尚 氏にお話を伺いました。

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