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クローニング不要の簡便なタンパク質合成キット 無細胞タンパク質合成キット

掲載日情報:2018/04/18 現在Webページ番号:67843

遺伝子断片から転写鋳型の作製,転写,翻訳の3ステップで目的タンパク質を合成するキットです。従来の一般的なE.coli を用いたクローニングによる方法では,約2週間を要し,必ずしも合成がうまく行かない場合もありました。本製品は,PCRだけを用いて,わずか1日で,様々なタンパク質高い成功率で合成することができます。
本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。

タンパク質合成系の比較

本製品と一般的なE.coli によるタンパク質合成系の比較

合成実績 タンパク質合成系の比較

本製品を用いたタンパク質の合成実績とウサギ腸炎ビブリオ抗体(右)のFab発現
ELISA Assay Result:合成したFabのELISAによる抗体抗原活性の確認(データ提供:名城大学 加藤研究員,名古屋大学 中野教授)

技術的バックグラウンド

鋳型作成 鋳型作成

A. 鋳型作成

タンパク質の合成確率を飛躍的に向上させる塩基配列の付加!

mRNA を安定化させる非翻訳領域の短い塩基配列が発見されました。
これを3’側に付与することでmRNA の安定性を高め,目的タンパク質の合成能を飛躍的に向上させることに成功しました。
また,本製品を用いることにより,目的タンパク質のN 末端に加えC 末端にもタグ標識をPCR だけで付与することが可能になりました。
これは,目的タンパク質のN 末端側に活性ドメインがあり,タグ付けにより相互作用を阻害する可能性がある場合などに有効です。

B. 翻訳

作製したmRNAは,次に最適化されたコムギ胚芽抽出液を用いてタンパク質の発現を行います。この組み合わせにより,高いタンパク質合成の成功率が得られ,かつ膜タンパク質の合成も可能となりました。

翻訳

BMC(CAS番号:257641-01-3)追加による可溶化画分の増加

リフォールディング剤のBMC(trans-1,2-bis(2-mercaptoacetamido)cyclohexane)をアミノ酸溶液に0.1 mg/ml 供し頂ければ,SS結合をよく誘導することが報告されており,標的タンパク質が十分可溶化発現しない場合,活性が低い場合などに追加の添加試薬としてお使い頂けます。



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転写・翻訳溶液の調製方法と手技の動画

無細胞タンパク質合成キットをつかった、転写・翻訳溶液の調製方法と手技の動画です 。

■転写反応溶液の調製と転写



■エタノール沈殿から遠心



■遠心から翻訳反応まで



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特長

  • 一般的に設備されているラボの機器以外の特殊な装置や試薬類は必要ありません。
  • 約1日で目的タンパク質が得られます。
  • 5’(N末端)側の他に3’(C末端)側にタグを付与することが可能です。
  • mRNAを安定化する40 bpの配列を付与する(特願2015-046470)ことで,タンパク質の合成確率を飛躍的に向上させることができます。
  • タンパク質の局在性に依存せず,細胞内,膜,分泌タンパク質のいずれも合成が可能です。
  • ヘテロダイマーも,2種のmRNAの混合により合成できます。
  • システインリッチのタンパク質の合成実績もあります。
  • 数10~200 kDa超までの分子サイズのタンパク質の合成に適応可能です。
  • 包装:50 reactions
他社競合品とのコストの比較
会社 NUProtein A社 B社
由来 コムギ胚芽 大腸菌(再構成)
合成能 酵素,転写因子
トランスポーター × ×
レセプター × ×
分泌タンパク質,
Fab断片他
×
(追加試薬必要)
修飾機能・タグ付け
スループット 1日 10日 約4時間
収量/培地 0.2~0.8単位 0.2~0.8単位 1単位
価格(mlあたり) 安価 やや高価 高価

スケールアップ(大量合成)の比較
会社 NUProtein C社 D社
翻訳液ベース 真核(コムギ胚芽抽出液) 原核(大腸菌)
応用・スケールアップ ラボ~プロダクション ラボのみ ラボ~プロダクション
転写鋳型作製 PCRベース クローニング
(N末タグはPCR可)
クローニング
セルバンク 不要 不要 必要
代謝システム 変更なし 変更 大幅に変更
合成能力 どんなタンパクも可 膜タンパク質は不可 不明
コスト(1 mlコムギ胚芽) 安価 高価 N/A
コスト(大量合成) 安価 N/A 安価?
糖鎖修飾 不可 不可 不可
収量(翻訳) 0.1 単位/10 時間 0.1 単位/10 時間 1 単位/8~10時間

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本製品で合成したタンパク質の適用

  • タンパク質間相互作用解析
  • タンパク質-DNA相互作用分析
  • 抗原・ペプチドホルモンの合成
  • 酵素・タンパク質の変異体のハイスループット合成
  • Fab断片,糖鎖不要の抗体,ライブラリ作製
  • nanobody,zipbody

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キット内容

・Transcription buffer
・NTP mix
・T7 RNA polymerase
・DTT
・Wheat germ extract
・Amino acid mix
  キット内容

製品プロトコルはこちらをご覧下さい。
プライマーリストを含むサポートページはこちらをご覧下さい。

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価格表

[在庫・価格 :2018年09月24日 23時04分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
詳細 商品名 商品コード メーカー 包装 価格 在庫 納期 文献数 リスト
無細胞タンパク質合成キット
データシート
PSS3050 NUPエヌユープロテイン
NUProtein株式会社
1 kit ¥61,000 2個 - 0 追加

説明文
法規制等
保存条件 -20℃,-80℃ 法規備考
掲載カタログ

ニュース2018年6月15日号 p.28

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AAMX004 NUPエヌユープロテイン
NUProtein株式会社
1x2 ml ¥2,400 2個 - 0 追加

説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ

ニュース2018年6月15日号 p.28

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[在庫・価格 :2018年09月24日 23時04分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。

無細胞タンパク質合成キット

文献数:0


  • 商品コード:PSS3050
  • メーカー:NUP
  • 包装:1kit
  • 価格: ¥61,000
  • 在庫:2個
  • 納期:-

説明文
法規制等
保存条件 -20℃,-80℃ 法規備考
掲載カタログ

ニュース2018年6月15日号 p.28

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文献数:0


  • 商品コード:AAMX004
  • メーカー:NUP
  • 包装:1x2ml
  • 価格: ¥2,400
  • 在庫:2個
  • 納期:-

説明文
法規制等
保存条件 -80℃ 法規備考
掲載カタログ

ニュース2018年6月15日号 p.28

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CONTACT

お問い合わせ先(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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