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構築済みファージディスプレイペプチドライブラリー MIM Phage Display Peptide Library Kit

掲載日情報:2022/11/24 現在Webページ番号:67492

Antibody Design Labs社の、構築済みファージディスプレイペプチドライブラリーです。10アミノ酸の環状ペプチドライブラリーを発現するキット(#AL101)と、12アミノ酸の直鎖状ペプチドを発現するキット(#AL103)があります。

ライブラリーの概要

MIM-C10 Phage Display Peptide Library
繊維状ファージFd頭部のminor coat protein pIIIのN末端にリンカー(GGGSGPGGLRGGS)を介して融合した10アミノ酸からなる環状ペプチド、約109種類を含みます。リーダーペプチドが切断されたインサートの配列はNH2-AEGCX10C GGGSGPGGLRGGS-pIIIです。このライブラリーは、不要な停止コドンやシステインを含まないよう、トリマーコドン技術を使用してファージベクターfADL-2blue上に構築されています。

MIM-12 Phage Display Peptide Library
繊維状ファージFd頭部のminor coat protein pIIIのN末端にリンカー(GGGSGPGGLRGGS)を介して融合した12アミノ酸からなる直鎖状ペプチド、約109種類を含みます。リーダーペプチド(シグナルペプチド)が切断されたインサートの配列はNH2-X12GGGSGPGGLRGGS-pIIIです。このライブラリーは、縮重NNKコドンを使用してファージベクターfADL-2blue上に構築されています。

ファージベクターfADL-2blue
fADL-2blueはfd-tetから誘導された(Zacher, 1980)多価タイプ3ファージディプレイベクター(Smith, 1997)です。宿主はfADL-2blueに寛容なため、大きなコロニーと小さなプラークが形成され、ライブラリーのスクリーニングや個別コロニーの取扱いが容易になります。増殖にヘルパーファージは必要ありません。リンカーであるGGGSGPGGLRGGS配列はトリプシン感受性のため、トリプシンを用いた溶出によりペプチドモチーフの収量を向上することが可能です(Thomas 2010)。


バイオパニングの原理

図1. バイオパニングの繰り返しによるライブラリー選択の原理
MIM-C10 Phage Display Peptide Library Kitには、10回のパニングを実施するのに十分な試薬が含まれています(図1)。10 μlのファージ溶液は2 × 1010cfuに相当し、ペプチドあたりの形質導入単位は平均で20です。ライブラリーのパニングは、ペプチドバインダーの迅速な同定につながります(図2、3)。


M2抗体のエピトープマッピング

図2. MIM-C10ライブラリーを用いた抗DYKDDDDK-tag抗体(クローン:M2)のエピトープマッピング
抗DYKDDDDK-tag抗体(クローン:M2)を用いたMIM-C10ライブラリーのパニングでは、3回目のラウンドでタグ配列と一致するモチーフを含む配列が90%以上得られた。

M2抗体のエピトープマッピング

図3. MIM-12ライブラリーを用いた抗DYKDDDDK-tag抗体(クローン:M2)のエピトープマッピング
抗DYKDDDDK-tag抗体(クローン:M2)を用いたMIM-12ライブラリーのパニングでは、解析した全ての配列が3回目のラウンドでタグ配列と一致した。


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アプリケーション

  • エピトープマッピング
  • 新規ペプチドバインダーの分離
  • ペプチド結合モチーフの同定

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キット内容

  • MIMライブラリー*
  • PHI8S3プライマー
  • PSIR2プライマー
  • Phage-Competent TG1 cell
  • Phage-Competent SS320 cell

* キットにより含まれる試薬が異なります。


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参考文献

  1. Thomas W.D. and Smith G.P., "The case for trypsin release of affinity-selected phages.″ Biotechniques, 49(3), 651~654(2010). PMID:20854266
  2. Smith, G.P. and Petrenko, V.A., "Phage Display.″ Chem. Rev., 97(2), 391~410(1997). PMID:11848876
  3. Zacher, A.N., 3rd et al., "A new filamentous phage cloning vector: fd-tet.″ Gene, 9(1-2), 127~140(1980). PMID:6247241

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ファージ粒子産生の際にヘルパーファージの使用を必要としないベクター。F-菌株で増幅することができ,ファージライブラリーを構築する際のファージミドベクターの代わりとして使用できる。X-galとIPTG存在下でコロニーの青白選択,リンカーにトリプシン切断部位がありトリプシンによる結合ファージの溶出が可能。
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説明文 ファージ粒子産生の際にヘルパーファージの使用を必要としないベクター。F-菌株で増幅することができ,ファージライブラリーを構築する際のファージミドベクターの代わりとして使用できる。X-galとIPTG存在下でコロニーの青白選択,リンカーにトリプシン切断部位がありトリプシンによる結合ファージの溶出が可能。
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