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DNAへのランダム変異導入キット JBS Random Mutagenesis Kitシリーズ
掲載日情報：2020/12/03 現在Webページ番号：67220
DNAへのランダム変異導入技術としてこれまでに開発されてきた三種類の変異導入法それぞれを行えるキットのシリーズです。変異誘発性dNTPアナログ組み込み法、error-prone PCR法、DNA shuffling法を行えるそれぞれのキットがラインナップされています。添付されている詳細なデータシートなどをご覧になることにより、上記手法によるDNA変異導入をすぐに行うことができます。
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製品ラインナップ
- dNTP-Mutagenesis Kit：変異誘発性dNTPアナログを用いたランダム変異導入
- Error-Prone Kit：エラーが発生しやすい条件でのPCRによるランダム変異導入
- DNA-Shuffling Kit：DNAシャッフリングによるランダム変異導入
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dNTP-Mutagenesis Kit
PCRよるDNA断片増幅中に、変異誘発性dNTPアナログであるdPTPまたは8-oxo-dGTPを取り込むことにより、DNA断片にランダム変異を導入するキットです。
特長
- 1回目のPCRは変異誘発性dNTPアナログ存在下で反応を行い、2回目のPCR時に変異誘発性dNTPアナログを除去して通常のdNTPを使用してPCRを行う2ステップPCR法で、高頻度に変異が導入されたDNA断片を得ることができます。
- 合計20％の効率でランダム変異を導入できます。
- 8-oxo-dGTPはテンプレートDNAのアデニンの反対鎖に取り込まれ、A→C、T→Gの変異を導入します。変異導入効率は約2％です。
- dPTPはA→G、T→C、G→A、C→T（約5：4：1：1）の変異を導入します。変異導入効率は19％です。
dPTPおよび8-oxo-dGTPの構造式
8-oxo-dGTP（上図）およびdPTP（下図）は、Taqポリメラーゼを使用したPCRによってDNAに組み込まれる突然変異誘発性のdNTP類似体
使用例
PCRサイクル数と変異導入率の相関（Zaccolo et al.）
dPTPによる変異導入率は8-oxo-dGTPの場合の約10倍となった。
キット内容
- Taq polymerase
- Mutagenesis buffer
- dNTP mix
- dPTP
- 8-oxo-dGTP
- PCR-grade water
価格
[在庫・価格 ：2024年12月12日 00時01分現在]
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JBS dNTP-Mutagenesis Kit, Random Mutagenesis by dNTP Analogs(15reactions) |
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[在庫・価格 ：2024年12月12日 00時01分現在]
JBS dNTP-Mutagenesis Kit, Random Mutagenesis by dNTP Analogs(15reactions)
文献数： 0
- 商品コード：PP-101
- メーカー：JBS
- 包装：1kit
- 価格：¥107,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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Error-Prone Kit
DNAポリメラーゼのエラー率の増加を誘発する条件下でPCRを行うことで、DNA断片にランダム変異を導入するキットです。
特長
- 1回のPCRのみで行うことができ、変異導入効率は0.6～2.0％です。
- 非プルーフリーディング酵素の使用や、反応液中のMg2+濃度の増加、 Mg2+からMn2+への部分的な置換、dNTPの不均一な濃度差等により、DNA合成時の取り込みエラー率が増加します。
error-prone PCR法と通常のPCRの比較
通常のPCRと比較したerror-prone PCR法の変異導入効率
従来のPCR反応に使用される標準的なDNAポリメラーゼは、通常、突然変異誘発実験に適さないエラー率を示す。
例．プルーフリーディング酵素（Pfu Polymeraseなど）：10-6～10-7
非プルーフリーディング酵素（Taq Polymeraseなど）：10-4～10-5の範囲のエラー率を示す。
キット内容
- Reaction buffer
- dNTP Error-prone mix
- Taq polymerase
- PCR-grade water
- Error-prone solution
価格
[在庫・価格 ：2024年12月12日 00時01分現在]
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JBS Error-Prone Kit (15reactions) |
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[在庫・価格 ：2024年12月12日 00時01分現在]
JBS Error-Prone Kit (15reactions)
文献数： 0
- 商品コード：PP-102
- メーカー：JBS
- 包装：1kit
- 価格：¥78,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | |||
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DNA-Shuffling Kit
単一の遺伝子または複数の関連遺伝子からランダムな断片ライブラリーを作製し、自己プライミングPCRを行うことで変異を導入するDNA shuffling法により、DNA断片にランダム変異を導入するキットです。
特長
- 目的のDNAをDNase Iで消化して断片化した後、PCRにより変異を導入します。
- error-prone PCR法と類似していますが、DNA shuffling法では異なる関連遺伝子から配列を組み替えることができます。
- 単一遺伝子shuffling法で得られる点突然変異の導入効率は約0.7％です。
- 複数の相同遺伝子DNAを使用した複数遺伝子shufflingは、in vitroタンパク質分子進化に最適です。
DNA shuffling法とは
一般的なDNA shuffling法のイメージ
DNAシャッフリングには、単一遺伝子のシャッフリングと複数遺伝子のシャッフリングがあります。単一の遺伝子シャッフリングでは、1つの遺伝子のみが消化され、その後再構築されて、約0.7％倍の割合で点突然変異が起こります。複数の遺伝子シャッフリングでは、いくつかの相同DNA配列が消化され、その後再構築されます。その結果、追加の点突然変異を含むキメラ遺伝子のライブラリーが得られます。
1,000 bpのDNA断片をDNase I消化した場合の断片長の経時変化
キット内容
- DNase I
- Digestion buffer
- DNase stop solution
- Taq polymerase
- Shuffling buffer
- dNTP mix
- PCR-grade water
価格
[在庫・価格 ：2024年12月12日 00時01分現在]
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JBS DNA-Shuffling Kit (15reactions) |
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[在庫・価格 ：2024年12月12日 00時01分現在]
JBS DNA-Shuffling Kit (15reactions)
文献数： 0
- 商品コード：PP-103
- メーカー：JBS
- 包装：1kit
- 価格：¥99,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 | |||
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参考文献
- Zang, et al., Journal of Biological Chemistry, 281:2358.(2006).
"Efficient and high fidelity incorporation of dCTP opposite 7,8-dihydro-8-oxodeoxyguanosine by sulfolobus solfatarius DNA polymerase Dpo4." - Zaccolo, et al., J. Mol. Biol., 285(2):775(1999).
"The effect of high-frequency random mutagenesis on in vitro protein evolution: a study on TEM-1 beta-lactamase." - Crameri, et al., Nature, 391:288.(1998).
"DNA shuffling of a family of genes from diverse species accelerates directed evolution." - Zaccolo, et al., J. Mol. Biol., 255:589(1996).
"An approach to random mutagenesis of DNA using mixtures of triphosphate derivatives of nucleoside analogues." - Stemmer Nature 370:389(1994).
"Rapid evolution of a protein in vitro by DNA shuffling." - Cadwell, et al., PCR Meth. Appl., 2:28(1992).
"Randomization of genes by PCR mutagenesis."
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関連製品
[在庫・価格 ：2024年12月12日 00時01分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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8-Oxo-dGTP, S pack |
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8-Oxo-dGTP, L pack |
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dPTP, S pack |
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dPTP, L pack |
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[在庫・価格 ：2024年12月12日 00時01分現在]
8-Oxo-dGTP, S pack
文献数： 0
- 商品コード：NU-1117S
- メーカー：JBS
- 包装：30μl
- 価格：¥44,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | CAS No：139307-94-1 |
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| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
| 法規制等 | |||||||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |||||
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| 関連記事 | |||||||
8-Oxo-dGTP, L pack
文献数： 0
- 商品コード：NU-1117L
- メーカー：JBS
- 包装：5x30μl
- 価格：¥127,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | CAS No：139307-94-1 |
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| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
| 法規制等 | |||||||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |||||
| 掲載カタログ |
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| 関連記事 | |||||||
dPTP, S pack
文献数： 0
- 商品コード：NU-1119S
- メーカー：JBS
- 包装：30μl
- 価格：¥50,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | CAS No：173964-83-5 |
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| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
| 法規制等 | |||||||
| 保存条件 | 法規備考 | ||||||
| 掲載カタログ |
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| 関連記事 | |||||||
dPTP, L pack
文献数： 0
- 商品コード：NU-1119L
- メーカー：JBS
- 包装：5x30μl
- 価格：¥145,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | CAS No：173964-83-5 |
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| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
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| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |||||
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