新型コロナウイルス（COVID-19）RNA依存性RNAポリメラーゼ活性測定キット SARS-CoV-2 RNA Polymerase（RdRp）Assay Kit
掲載日情報：2021/05/17 現在Webページ番号：67218
COVID-19を引き起こす新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）のRNA依存性RNAポリメラーゼ（RdRp）活性を測定するキットです。マイクロプレート（96ウェル、384ウェル）と蛍光色素で測定するキット、電気泳動ゲルで測定するキットがあり、ハイスループットスクリーニングや阻害現象の可視化に最適です。
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新型コロナウイルスのRNA依存性RNAポリメラーゼとは
COVID-19のパンデミックは、プラス鎖一本鎖RNAウイルスである、SARS-CoV-2の感染によって引き起こされます。SARS-CoV-2ゲノムの複製と遺伝子の転写にはRNA依存性RNAポリメラーゼ（RdRp）が必要なため、RdRp阻害物質はこのウイルスに対する重要な創薬ターゲットです。
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特長
- RNA依存性RNAポリメラーゼ（RdRp）により合成されたRNA分子を蛍光色素により定量し、RdRp活性を測定します。
- RdRp活性を標的とした阻害物質のハイスループットスクリーニングなどに有用です。
- マイクロプレート方式の場合：酵素生成物の定量に蛍光色素を利用します（測定波長：励起485 nm／蛍光535 nm）。
- ゲルベースアッセイの場合：ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った後に、合成されたRNAをSYBR Green Ⅱ＊で可視化します。
＊SYBR Green Ⅱはキットに含まれていません。別途ご用意下さい。
| 品名 | RdRp | アッセイ数 | 商品コード | ||
|---|---|---|---|---|---|
| 384 wells | 96 wells | Gel base | |||
| SARS-CoV-2 RNA Polymerase Assay Kit-100 | － | 100 | 50 | － | S2RPA100K |
| SARS-CoV-2 RNA Polymerase Assay Kit plus-20 | 〇 | 20 | 10 | － | S2RPA020KE |
| SARS-CoV-2 RNA Polymerase Assay Kit plus-100 | 〇 | 100 | 50 | － | S2RPA100KE |
| Gel-based SARS-CoV-2 RdRp Assay Kit | 〇 | － | － | 20 | GS2RPA020KE |
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使用例
マイクロプレートアッセイの例
左図：本アッセイ系がNTP（基質）依存性であることを確認した。
図中央：抗ウイルス性物質であるレムデシビルの活性型RDV-TP（三リン酸型）による阻害が見られた。
右図：RdRpは2価金属依存性と報告されており、EDTA添加で阻害が見られた。
マイクロプレートアッセイとゲルベースアッセイとの比較
左図：縦軸に蛍光強度を取り、横軸はそれぞれ完全なアッセイ系、RdRp非添加、NTP非添加、阻害物質（活性型レムデシビル）添加、EDTA添加の場合を示した。阻害物質やEDTA添加では阻害が見られた。
右図：ゲルベースアッセイの場合も同様の実験系を組み、反応生成物をポリアクリルアミドゲル電気泳動後にSYBR Green Ⅱで染色した。マイクロプレートアッセイと同様に、完全系以外での阻害が目視にて観察できた。
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操作方法概略
- 水、バッファー、テンプレート、RNAポリメラーゼ、NTPsを混合して反応液を調製する。
- 34℃で2時間インキュベートする。
- 反応液にFluorescence dyeを加え、蛍光強度を測定する（マイクロプレートアッセイ）。
- TAE bufferでポリアクリルアミドゲル電気泳動後、SYBR Green Ⅱで染色し観察する（ゲルベースアッセイ）。
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キット内容
- Buffer
- RNA template
- NTPs（ATP, UTP, GTP, CTP）
- Fluorescence dye（マイクロプレートアッセイ法のみ）
- SARS-CoV-2 RdRp（#S2RPA020KE, #S2RPA100KEのみ）
- Gel loading buffer（#GS2RPA020KEのみ）
※マイクロプレートアッセイ法：マイクロプレート（96ウェルあるいは384ウェル）およびこれらに対応した蛍光プレートリーダーが必要です。
※ゲルベースアッセイ法：電気泳動システムおよびSYBR Green Ⅱが必要です。別途ご用意下さい。
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参考文献
米国NIH国立先進トランスレーショナル科学センター（NCATS）の Yang らは、ProFoldin社のウイルスRNAポリメラーゼアッセイキットを用いて、エメチンの抗ウイルス作用を検討しました。
Yang S. et al., Cell Discov., 4, 31 (2018).【PMID: 29872540】
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月20日 19時35分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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SARS-CoV-2 RNA Polymerase Assay Kit-100 (100assays) |
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SARS-CoV-2 RNA Polymerase Assay Kit Plus-20 (20assays) |
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SARS-Cov-2 RNA polymerase assay kit plus-100 (100 assays, enzyme included) |
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Gel-based SARS-CoV-2 RdRp assay kit (20samples) |
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[在庫・価格 ：2024年04月20日 19時35分現在]
SARS-CoV-2 RNA Polymerase Assay Kit-100 (100assays)
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- メーカー：PFP
- 包装：1kit
- 価格：¥167,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2021年2月15日号 p.28
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- 納期：2～3週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2021年2月15日号 p.28 ニュース2022年2月1日号 p.6
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