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メーカー：	Horizon社Dharmacon製品 OriGene Technologies TransOMIC Technologies
	Horizon社Dharmacon製品(メーカー略称：DHA)のRNAiコレクション，cDNAコレクション，Yeastコレクションなど，遺伝子機能研究に有用な遺伝子リソースを検索することができます。クローンコレクション検索の使い方はこちら OriGene Technologies社(メーカー略称：ORI)のTrueClone / TrueORF / TrueORF Gold cDNAクローンなど，遺伝子機能研究に有用な遺伝子リソースを検索することができます。クローンコレクション検索の使い方はこちら TransOMIC Technologies社(メーカー略称：TOT)のRNAiコレクション，cDNAコレクション，Yeastコレクションなど，遺伝子機能研究に有用な遺伝子リソースを検索することができます。クローンコレクション検索の使い方はこちら
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HOME> 試薬> 免疫化学> 血液学／免疫学> 血液成分> SARS-CoV-2 IgG Antibody ELISA Kit, COVID-SeroIndex Kantaro Quantitative
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新型コロナウイルスに対するIgG抗体の検出＆定量ELISAキット SARS-CoV-2 IgG Antibody ELISA Kit, COVID-SeroIndex Kantaro Quantitative

掲載日情報：2020/12/04 現在Webページ番号：67199

アールアンドディーシステムス /
R&D Systems, Inc.
[メーカー略称：RSD]

ヒト血清／血漿中の新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）に対するIgG抗体を、2段階方式で検出そして定量するELISAキットです。COVID-19のワクチン開発に有用です。

第一段階：試料中のSARS-CoV2 Spike protein RBDを認識するIgG抗体を、プレートにコートした組換え体SARS-CoV2 Spike protein RBDで捕捉し検出します。同時に測定したRBD controlと比較し、ポジティブ試料を決定します。

第二段階：第一段階のポジティブ試料中のIgG抗体を、プレートにコートした全長の組換え体SARS-CoV-2 Spike proteinで捕捉し、Spike calibrator（ready-to-use）およびSpike low/mid/high controlと共に測定することで、比色定量を行います。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

COVID-SeroIndex Kantaro Quantitative SARS-CoV-2 IgG Antibody ELISA Kit（#DSR200）の製品外観と測定イメージ

新型コロナウイルスとは
特長
操作法概略
キット内容
価格

新型コロナウイルスとは

新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）は、スパイクタンパク質（S）、エンベロープタンパク質（E）、膜タンパク質（M）、およびヌクレオカプシドタンパク質（N）の4つの構造タンパク質で構成されています。スパイクタンパク質は、膜融合とウイルス侵入を仲介する糖タンパク質です。Sタンパク質はホモ三量体であり、各約180 kDaの単量体は2つのサブユニット、S1とS2で構成されています¹。
SARS-CoV-2の活性化には、ほとんどのコロナウイルスと同様に、Sタンパク質の2つの異なるペプチド、S1およびS2サブユニットへのタンパク質分解による切断が必要です。S1サブユニットは宿主レセプターへの結合を担い、S2サブユニットは細胞融合に関与しています^2～4。
アミノ酸（aa）配列相同性に基づくと、SARS-CoV-2 S1サブユニットRBD（レセプター結合ドメイン）はSARS-CoV-1 S1 RBDのRBDと73％の同一性を持っていますが、MERS S1 RBDとは22％の相同性しかありません。アミノ酸配列相同性の低さは、SARSとMERSが異なる細胞レセプターに結合するという発見と一致しています⁵。
SARS-CoV-2ウイルスのSタンパク質は、SARS-CoV-1と同様に、アンジオテンシン変換酵素2（ACE2）に結合しますが、親和性がはるかに高く、結合速度が速くなります⁶。SARS-CoV-2タンパク質のRBDに対するポリクローナル抗体は、ACE2との相互作用を阻害することが示されており、RBDがワクチン接種または抗ウイルス療法の魅力的な標的であることを示唆しています⁷。また、SARS-CoV-2ウイルスへの曝露後に免疫が発達したことと一致して、RBDを使用して患者の血流に存在する中和抗体の存在を検出できることを示す有望な研究も進められています⁸。

■参考文献

Tortorici, M.A. and D. Veesler, Adv. Virus Res., 105:93(2019).
Bosch, B.J., et al., J. Virol., 77:8801(2003).
Belouzard, S., et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 106:5871(2009).
Millet, J.K. and G. R. Whittaker, Virus Res., 202:120(2015).
Jiang, S., et al., Trends. Immunol.,(2020).
Ortega, J.T., et al., EXCLI J., 19:410(2020).
Tai, W., et al., Cell. Mol. Immunol.,(2020).
Okba, N. M. A., et al., Emerg. Infect. Dis.,(2020).

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特長

2段階方式のアッセイにより、偽陽性または陰性の結果を最小限に抑えられます。
測定動物種：ヒト
測定試料：血清、血漿(EDTA／ヘパリン処理)
測定に必要な試料量：10μl / RBD ELISA、10μl / Spike ELISA
測定範囲：3.2～160 AU/ml
測定数：360試料／1 kit
第一段階：シングル測定で最大360試料
第二段階：二重測定で190試料、シングル測定で380試料。
検証結果で特異性99.8％、感度97.8％を示しました。

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操作法概略

第一段階 - ポジティブ反応試料の検出

組換え体SARS-CoV-2 Spike protein RBD（レセプター結合ドメイン）がプレコートされている96ウェルマイクロプレート（RBD antigen microplate）に、試料またはRBD positive/negative controlを加える。
試料中のSARS-CoV-2 Spike protein RBDを認識する抗体がウェルに結合する。
マイクロプレートを洗浄し、未結合のタンパク質や分子を除去する。
HRP標識抗ヒトIgGモノクローナル抗体をウェルに加える。
マイクロプレートを洗浄し、未結合のタンパク質や分子を除去する。
TMB基質をウェルに加えると、青色に発色する。
Color developmentの添加により反応が停止すると黄色に変わる。
450 nm（補正波長：540 nmまたは570 nm）の吸光度を測定する。
検出結果をRBD Positive Controlと比較し、カットオフ値（CI）≧ 0.7のものをポジティブ反応試料とする。

第二段階 - SARS-CoV-2 Spike proteinに対するIgG抗体の定量

組換え体SARS-CoV-2 Spike proteinがプレコートされている96ウェルマイクロプレート（Spike Protein microplate）にポジティブ反応を示した試料、Spike calibrator 1～7、またはSpike low/mid/high controlを加える。
試料中のSARS-CoV-2 Spike proteinを認識する抗体がウェルする。
マイクロプレートを洗浄し、ウェルに結合しなかったものを除去する。
HRP標識抗ヒトIgGモノクローナル抗体をウェルに加える。
マイクロプレートを洗浄し、ウェルに結合しなかったものを除去する。
TMB基質をウェルに加えると、青色に発色する。
Color developmentの添加により反応が停止すると黄色に変わる。
450 nm（補正波長：540 nmまたは570 nm）の吸光度を測定する。