植物葉組織からルビスコを除去して総タンパク質を抽出するキット Minute Rubisco Depletion Kit

• 特長
• 従来のRubisco除去方法について
• 操作方法概略
• 使用例
• キット内容
• 価格

特長

• ルビスコ除去バッファーと専用フィルターカートリッジを使用することにより、1時間以内にルビスコ除去ができるキットです。
• ほとんどの葉組織で、100〜200 µgのタンパク質が得られます（TCA沈殿後の最終的な収量）。
• 可溶化ミクロソーム画分と水溶性画分を別々に抽出し、最後に混合することで、ルビスコ除去済み全タンパク質を抽出します。
• 得られた総タンパク質はSDS-PAGE、2DE、LC-MS/MS分析など、様々なアプリケーションに使用できます（別途TCA沈殿が必要です）。
• ルビスコの除去やTCA沈殿を行わずに水溶性タンパク質画分のみを回収し、免疫沈降などのアプリケーションに直接使用することもできます。
• 20回分

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従来のRubisco除去方法について

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操作方法概略

1. 150〜200 mgの新鮮または冷凍の葉を、フィルターカラムをセットしたコレクションチューブに入れる。100µlのBuffer Aと80 mgのprotein extraction powderを加える。
   ※あらかじめBuffer Aにプロテナーゼインヒビターを添加しておくことをお勧めします。
2. ペッスルで葉をすりつぶす。
3. さらに200µlのBuffer Aを加え、葉を200µlのピペットチップで数回かき混ぜる。16,000×gで1分間遠心し、フィルターカラムを捨てる。ペレットをピペッティングにより再懸濁し、新しい1.5 mlマイクロチューブに移す。
4. 新たに80～100 mgのProtein extraction powderをチューブに加え、ペレットをペッスルで粉砕する。300×gで2分間遠心し、200µlの上清を新しい1.5 mlマイクロチューブに移す。
5. 16,000×gで30分間遠心し、すべての上清を新しい1.5 mlマイクロチューブに移す。チューブはオンアイスにしておく（⇒水溶性タンパク質画分）。
6. 200µlのBuffer Aをステップ5のペレット（⇒ミクロソーム画分）にゆっくりと加え、ペレットの形を乱さないようにバッファーをすぐに取り除く。
   ※上記は残留した細胞質タンパク質を洗い流すステップです。
   ペレットを200µlのバッファーAで再懸濁し、ピペッティングしてから20µlのBuffer Cを加える。よく混合し、室温で5分間インキュベートする。16,000×gで5分間遠心する。上清を新しい1.5 mlマイクロチューブに移す（⇒水溶性ミクロソーム画分）。チューブはオンアイスにしておく。
7. ステップ5で得た200µlの水溶性タンパク質画分に200µlのBuffer Bを加える。短時間ボルテックスし、氷上で10分間インキュベートする。10,000×gで5分間遠心する。このペレットには除去されたルビスコが含まれる。 400µlの上清を、上記のステップ6で可溶化したミクロソーム画分200µlに加え、混合する。
   ⇒ルビスコ除去済みの総タンパク質画分、600µlが得られる。

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使用例

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キット内容

• Buffer A
• Buffer B
• Buffer C
• 1.5 mlマイクロチューブ用ペッスル（20個）
• フィルターカラムカートリッジとコレクションチューブ（各20個）
• Protein extraction powder

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価格

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