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メーカー：	Horizon社Dharmacon製品 OriGene Technologies TransOMIC Technologies
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HOME> 試薬> ELISA> ELISA/EIAキット> QRFP-26RFa (human) ELISA kit（Bertin Bioreagent社）
HOME> 試薬> 神経／イオンチャネル> 神経化学関連製品> QRFP-26RFa (human) ELISA kit（Bertin Bioreagent社）

インスリン分泌阻害、食欲促進作用を示すヒト神経ペプチドQRFP-26RFa定量キット QRFP-26RFa (human) ELISA kit（Bertin Bioreagent社）

掲載日情報：2020/02/07 現在Webページ番号：65746

ベルテンバイオリージェント /
Bertin Bioreagent（旧 SPI-BIO）
[メーカー略称：SPB]

ヒト血漿中のQRFP-26RFaを、アセチルコリンエステラーゼ(AChE, Acetylcholineesterase）トレーサーを用いた競合法により比色定量するELISAキットです。

※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

検量線例
QRFP-26RFaとは
MEMO アセチルコリンエステラーゼ（AChE, Acetylcholinesterase）標識のメリット
測定原理
特長
操作方法概略
キット内容
交差性
価格

検量線例

Human QRFP-26RFa検量線例

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QRFP-26RFaとは

QRFP-26RFaは、RFamidesファミリーの26アミノ酸（C末端にアルギニンとアミド化フェニルアラニンモチーフを有する）の神経ペプチドです¹。QRFP-26RFaは、2003年にヨーロッパアオガエルの脳で発見されました¹。その後、26RFaは、ヒト、ラット、ニワトリなどの多くの種で解析が行われました²。ペプチド構造解析では、GPR103⁴と呼ばれるレセプターとの相互作用に用いられる両親媒性αヘリックスが中央ドメイン中に存在することが示されました³。

QRFP-26RFaは、主に視床下部や、脳幹、脊髄の外側角のようないくつかの末梢組織で生成されます⁵。マウスのin vivoにおける研究において、QRFP-26RFaは、NPY／プロオピオメラノコルチン系に対する作用⁶、およびグルコース誘発インスリン分泌阻害⁷により、食欲促進ペプチドであることが示されました。QRFP-26RFaは、高脂肪食の調節、および肥満者の脂肪細胞の脂肪分解に作用します⁸。また、26RFaの睡眠⁸および血圧⁶の調節における関連性についても研究されています。

参考文献

Chartrel, N, et al., Frontiers in Neuroendocrinology, 32, 387～397 (2011).
Thuau, R., et al., Peptides, 26, 779～789 (2005).
Jiang F.Y., et al., J. Biol. Chem., 278, 27652～27657 (2003).
Bruzzone, F., et al., J. Neurochem., 99, 616～627 (20060).
takayasu, S., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103, 7438～7443 (2006).
Egido, E.M., et al., Peptides, 28, 725～730 (2007).
Prevost, G., et al., Diabetes., 64, 2805～2816/DOI:10.2337/db14-1864 (2015).
Mulumba, M., et al., Mol. Endocrinol., 24, 1615～1625 (2010).

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MEMO アセチルコリンエステラーゼ（AChE, Acetylcholinesterase）標識のメリット

Bertin Bioreagent社のELISAキットでは、主に酵素標識としてアセチルコリンエステラーゼ（AChE, Acetylcholinesterase）による方法が採用されています。AChEアッセイは、基質としてアセチルチオコリンを含むエルマン試薬を使用して発色させます。この酵素反応最終生産物（5-チオ-2-ニトロ安息香酸）は405～414 nmに吸収極大を持つ明るい黄色化合物です。AChEは、ELISA法で用いられる他の酵素に比べて以下のような長所を有しています。

AChEは、64,000 sec^-1の代謝回転で真の一次速度を示すため、他の標識酵素に比べてカイネティック測定に適し、また高い感度が得られます。
HRP（Horse Radish Peroxidase）やAP（Alkaline phosphatase）の約3倍の代謝回転速度に相当します。
バッファー中のアセチルコリンの非酵素的加水分解は本質的に起こらないため、低バックグラウンドでアッセイを行うことができます。
高感度かつ低バックグラウンドにより、ELISAキットの測定に求められる高いS/N比を実現しています。
AChEは安定性に優れた酵素であり、その酵素活性は長時間維持されます。そのため、広いダイナミックレンジが得られます。
AChEは安定した酵素であり、その活性は長時間にわたって一定であるため、低～高濃度の試料の同時分析が可能です。

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測定原理

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特長

キットには、回収率算出用のQC controlが含まれています。
測定試料：血漿（EDTA-K₃、C18 SEPカラム処理）
必要試料量：50μl
測定原理：競合ELISA法
フォーマット：96-wellプレート
測定方法：比色
測定波長：405～414 nm
測定範囲：0.10～12.50 pg/ml
検出限界：0.07 ng/ml

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操作方法概略

ELISAワークフロー概略
	Blank	NSB	B₀	Standard	QC	Sample
Bufferの添加	－	100μl	50μl	－	－	－
Standardの添加	－	－	－	50μl	－	－
QCの添加	－	－	－	－	50μl	－
Sampleの添加	－	－	－	－	－	50μl
Tracerの添加	－	50μl
Antiserumの添加	－	－	50μl
プレートにカバーし、室温下、20時間インキュベートする。
ストリップを300μl/wellのWash bufferで5回洗浄し、ウェルの中の液を廃棄する。
Ellman's reagentの添加	200μl
室温、暗所下で、オービタルシェーカー300rpmで撹拌しながらインキュベートする。
OD _{405～414 nm}を測定する。