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標的配列への特異性・切断活性がベストなsgRNAを選択できるキット GenCrispr sgRNA Screening Kit

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:65671

ゲノム上の標的配列にCas9ヌクレアーゼを効率良くリクルートでき,かつ切断効率の高いsgRNA(Single Guide RNA)を,簡単迅速にスクリーニングできるキットです。

Single Guide RNA(sgRNA)スクリーニングの重要性

CRISPR/Cas9システムでゲノム編集を行うとき,Cas9ヌクレアーゼを標的に正しく導くSingle-guide RNA(sgRNA)の設計が重要です。しかし,標的に関する全ての情報からsgRNAを設計したとしても,その特異性と切断効率がベストとなるとは限りません。このため,あらかじめ配列の異なる複数のsgRNAを設計した上で,特異性・切断活性がベストとなるsgRNAを選択することが重要です。


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特長

  • 細胞での実験を行う前に,in vitro でsgRNA機能の有効性を確認することができます。
  • キット中にはポジティブコントロールのsgRNAと基質DNAが含まれています。

本キットで得られたin vitro での切断効率が,in vivo での活性と一致しないことがあります。

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操作方法概略

(1) DNA基質の調製

DNA基質の調製

CRISPR/Cas9の標的となる配列領域を増幅する

(2) 酵素反応

 スクリーニングポジティブコントロール
sgRNA*100~500 ng
ポジティブコントロールsgRNA1μl (100 ng)
GenCrispr Cas9 Nuclease~0.25μl (50 ng)~0.25μl (50 ng)
10× Reaction buffer2μl2μl
RNase-free water0~17μl≦18μl

* キットには含まれていません。

プレインキュベーション:上記反応液と37℃で10分間インキュベート

 スクリーニングポジティブコントロール
DNA基質~160 ng添加
ポジティブコントロールDNA基質2μl
(総反応量)20μl20μl

Cas9による切断反応:先の反応液に上記反応液を穏やかに混合して,37℃で2時間インキュベート

(3) 反応物の分析:1%アガロースゲル電気泳動で分析する

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キット内容

  • GenCrispr Cas9 nuclease
  • 10× Reaction buffer
  • Positive control sgRNA
  • Positive control substrate
  • RNase-free Water

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価格

[在庫・価格 :2021年02月27日 00時13分現在]

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詳細 商品名
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  • 商品コード:L00689-30
  • メーカー:GSC
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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