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ルシフェリンがいらないルシフェラーゼアッセイ Autobioluminescent Human Cell Line(自家生物発光性細胞株)

掲載日情報:2018/08/10 現在Webページ番号:65592

従来のホタル(fLuc)またはウミシイタケ(rLuc)を用いたルシフェラーゼ発光システムでは,検出にルシフェリンを添加する必要があります。490Biotech社は,バクテリア由来のルシフェラーゼ(lux)遺伝子および発光に必要な補因子などの6種類の全遺伝子を,単一ベクターを用いてヒト細胞内で発現させることで,発光基質の添加が必要ないユニークな自家生物発光システムを開発しました。このシステムを用いることにより,外来の化学発光基質や蛍光物質が必要になる場合とは異なり,細胞への影響を与えずに発光シグナルの継続的なモニタリングが可能になります。

本製品は研究用です。臨床用途には使用できません。

使用例

in vitro での使用例

in vitro使用例

アルデヒド(n-dodecanal)添加後の細胞毒性の継時的モニタリング
Autobioluminescent Human Cell Lineを,細胞毒性を有するアルデヒド(n-デカナール)で処理し,継時的に生物発光シグナルの変化をモニターした。0.01%以上の濃度(緑色のボックス)ではシグナルが低下したが,それ以下の処理濃度では未処理対照細胞(赤色のボックス)と比べて大差なかった(p = 0.05)。

(解説)
遺伝子操作された細菌由来のルシフェラーゼ遺伝子(lux)カセットシステムは,宿主細胞内で発光に必要な基質や補因子を入手できるために,細胞が健康で代謝が機能している間は生物発光ダイナミクスの調節を迅速に行うことができます。この変化は,定量的な測定と評価が可能な生物発光シグナルの変化と相関します。逆に,遺伝子操作によってlux遺伝子を検体特異的プロモーター制御下に配置することで,標的化合物存在下でのみ生物発光シグナルを誘導するバイオレポーターの開発に利用できます。

in vivo での使用例

in vivo使用例
発光システム バクテリア由来ルシフェラーゼ(lux ホタル由来ルシフェラーゼ(Luc)
平均輝度 1.5 (±0.2)×105 p/s 2.0 (±0.2)×108 p/s
平均誤差 1.6 (±0.3)×104 p/s 4.0 (±0.5)×107 p/s
積分時間 60 秒 1 秒
インジェクションした細胞数 5×106 5×105

バクテリア由来ルシフェラーゼ(lux)とホタル由来ルシフェラーゼ(Luc)システムを用いた,小動物における生物発光の検出の比較

この他の使用例については,こちらをご覧下さい。

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既存実験系との一致

既存実験系との比較で,これまでの検出環境やプロトコルの変更無く,同様のデータが得られていることが示されています。

■MTT Assayとの比較

MTT Assayとの比較

■MTT AssayおよびATP Content Assaysとの比較

ATP Content Assaysとの比較

■IC50の比較

ATP Content Assaysとの比較

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種類

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品名 商品コード 包装 主な適用
Autobioluminescent
Human Kidney, HEK293
490CL0001 1 ml
(約1×106 cells)
・ハイスループットスクリーニング
・代謝活性のモニタリング
・細胞密度の動態のモニタリング
Autobioluminescent
Human Liver, HepG2
490CL0005 ・細胞毒性のスクリーニング
・代謝活性のモニタリング
・新規化合物の開発
Autobioluminescent
Human Breast Cancer, MCF7
490CL0004 ・エストロゲンスクリーニング
・新規化合物のスクリーニング
・バイオアベイラビリティの評価
Autobioluminescent
Human Breast Cancer, T47D
490CL0003
Autobioluminescent
Human Colorectal Cancer, HCT116
490CL0002 ・腫瘍形成および治療研究
・新規化合物の開発
・ハイスループットスクリーニング

本製品の価格は,大学・非営利団体のお客様と企業・営利団体のお客様とで異なります。
ご購入にあたり,使用目的確約書へのご署名が必要となります。
製品は,輸送費を別途申し受けます。

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特長

  • 特別の処理は必要なく,簡単に自動化システムに適応できます。
  • プレーティングとイメージ解析だけの操作で,操作時間を大幅に短縮できます。
  • 高価なルシフェリンなどの発光基質の添加は不要のため,アッセイコストの低減が可能です。
  • 蛍光タンパク質システムとは異なり,自家蛍光によるバックグラウンドへの影響はありません。
  • 細胞の破砕処理は不要です。

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適応例

  • ハイスループットスクリーニング
  • 毒性試験
  • 代謝活性の連続的なモニタリング
  • 腫瘍形成と治療研究
  • エストロゲン活性のスクリーニング
  • 新規化合物のスクリーニングと開発

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自家発光(lux)システムについて

画像をクリックすると拡大図をご覧いただけます。

Luc lux GFP

自家発光システム(lux)と従来の発光(Luc)/蛍光(GFP)タンパク質発現システムの違い

従来のルシフェラーゼ発光システム(Luc)または蛍光発光システム(GFP)は,一般的に1種類の遺伝子のみがベクターに組み込まれています。Autobioluminescent Human Cell Lineで用いられている自家生物発光システム(lux)は,単一ベクター(pCMVlux)に6種類の遺伝子が組み込まれています(上図)。その遺伝子発現により産生される内因性物質(Luciferase:luxAB,Transferase:luxD,Synthetase/Reductase:luxCE)の作用により自家発光システムが構築されています(下図)。

自家生物発光反応経路

Autobioluminescent Human Cell Line(luxシステム)の自家生物発光反応経路

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自家発光システム(lux)と従来の発光・蛍光レポーターアッセイとの比較

生物発光 シグナルタンパク質 ルシフェラーゼ 緑色蛍光
タンパク質
システム名 lux
(バクテリア由来)
fLuc
(ホタル由来)
rLuc
(ウミシイタケ由来)
GFP
基質 不要 不要
コスト
リアルタイム
連続イメージング
不可 不可 不可
操作難易度 中/高 中/高
細胞株の種類
イメージング バックグラウンド
深部組織 不可 不可

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別売り自家生物発光DNAベクター

細胞にお客様自身でトランスフェクションすることで,自家生物発光細胞株の作製も可能なベクターです。

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品名 pCMVlux Vector pEF1αlux Vector
商品コード 490VD0001 490VD0002
ベクター pCMVlux Vector pEF1αlux Vector
詳細 ・Prokaryotic Selection: Ampicillin
・Eukaryotic Selection: G418
・Promoter: CMV
・CMV immediate early enhancer/promoter 30~780 bp
・Human optimized synthetic luciferase cassette 971~7675 bp
・Neomycin resistance region 8450~9814 bp
・Bacterial replication origin 10039~10720 bp
・Ampicillin resistance region 10817~11477 bp
・Prokaryotic Selection: Ampicillin
・Eukaryotic Selection: G418
・Promoter: EF1α
・EF1α promoter 6~1193 bp
・Human optimized synthetic luciferase cassette 1199~7903 bp
・Neomycin resistance region 8678~10042 bp
・Bacterial replication origin 10266~10948 bp
・Ampicillin resistance region 11046~11705 bp

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使用例

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FAQ



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価格

本製品の価格は,大学・非営利団体のお客様と企業・営利団体のお客様とで異なります。
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製品は,輸送費を別途申し受けます。

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詳細 商品名 商品コード メーカー 包装 価格 在庫 納期 文献数 リスト
Autobioluminescent Human Kidney (HEK293), for Academic
データシート
490CL0001 BTH490 バイオテック
490 BioTech, Inc.
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490CL0001 BTH490 バイオテック
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490CL0002 BTH490 バイオテック
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490CL0005 BTH490 バイオテック
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Autobioluminescent Human Kidney (HEK293), for Academic

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Autobioluminescent Human Breast Cancer (T47D), for Commercial Entities

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Autobioluminescent Human Breast Cancer (MCF7), for Academic

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  • 商品コード:490CL0004
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Autobioluminescent Human Breast Cancer (MCF7), for Commercial Entities

文献数:0


  • 商品コード:490CL0004
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Autobioluminescent Human Liver (HepG2), for Academic

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  • 商品コード:490CL0005
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別売り自家生物発光DNAベクターの価格

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詳細 商品名 商品コード メーカー 包装 価格 在庫 納期 文献数 リスト
pCMVlux, for Academic
データシート
490VD0001 BTH490 バイオテック
490 BioTech, Inc.
1 μg ¥150,000
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2週間程度 0 追加

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pCMVlux, for Commercial Entities
データシート
490VD0001 BTH490 バイオテック
490 BioTech, Inc.
1 μg ¥300,000
(未発注)
2週間程度 0 追加

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pEF1αlux, for Academic
データシート
490VD0002 BTH490 バイオテック
490 BioTech, Inc.
1 μg ¥150,000 1個 - 0 追加

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pEF1αlux, for Commercial Entities
データシート
490VD0002 BTH490 バイオテック
490 BioTech, Inc.
1 μg ¥300,000
(未発注)
2週間程度 0 追加

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pCMVlux, for Academic

文献数:0


  • 商品コード:490VD0001
  • メーカー:BTH
  • 包装:1μg
  • 価格: ¥150,000
  • 在庫:無(未発注)
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pCMVlux, for Commercial Entities

文献数:0


  • 商品コード:490VD0001
  • メーカー:BTH
  • 包装:1μg
  • 価格: ¥300,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:2週間程度

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pEF1αlux, for Academic

文献数:0


  • 商品コード:490VD0002
  • メーカー:BTH
  • 包装:1μg
  • 価格: ¥150,000
  • 在庫:1個
  • 納期:-

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pEF1αlux, for Commercial Entities

文献数:0


  • 商品コード:490VD0002
  • メーカー:BTH
  • 包装:1μg
  • 価格: ¥300,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:2週間程度

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