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バキュロウイルス-昆虫細胞高発現構築システム BestBac Linearized Baculovirus DNAシリーズ

掲載日情報:2024/05/15 現在Webページ番号:65542

組換えAcNPV(Autographa californicaの核多角体病ウイルス)E2クローン由来のバキュロウイルスの線状化DNAとトランスファーベクターをSf9細胞にトランスフェクションすることでタンパク質を高発現できるキットです*1。野生型のBest Bac 1.0および、Best Bac 1.0の変異型であるBestBac 2.0システムがあります。
BestBac 2.0システムは、v-cath/chiA(カテプシンおよびキチナーゼ)が欠損しているのでプロテアーゼ産生が抑制され目的タンパク質の高発現が可能です。

*1 本製品には、目的遺伝子を組み込んだトランスファーベクターは含まれていません。別売りのpVL1392 / pVL1393 Transfer Vectorを事前にご用意下さい。
本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

BestBac Linearized Δ DNA v-cath/chitinaseの外観

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BestBac Linearized DNA Δ v-cath/chitinaseの外観

BestBac 2.0, Δ v-cath/chiA Baculovirus Cotransfection Systemとは

昆虫細胞(Sf9細胞)-バキュロウイルス発現システムについて

昆虫細胞-バキュロウイルス発現システムは、タンパク質生産のための重要な方法となっています。Autographa californica 核多角体病ウイルス(AcNPV)は、Spodoptera frugiperda の幼虫由来のSf9細胞に感染します。Sf9細胞に豊富に存在するポリヘドリン遺伝子の発現は培養上必須ではありませんが、その強力なプロモーターは外来遺伝子産物合成に用いられます。ポリヘドリンプロモーターは、ウイルスによって宿主細胞が既に細胞死を起こした感染末期になってから高い活性を示すため、特定の毒性タンパク質も大量発現することができます。昆虫細胞では多くの翻訳後修飾が正しく行われるため、大腸菌で発現できないタンパク質も発現できます。

BestBac発現システムとは

BestBac 2.0, Δ v-cath/chiA Baculovirus Constraction Systemは、AcMNPV E2クローン由来の線状化バキュロウイルスDNAを用いてSf9細胞で目的遺伝子を発現します。AcMNPVのゲノムから必須遺伝子ORF1629遺伝子が欠損しているので宿主細胞中で非組換えウイルスが複製できません。しかし、ポリヘドリンプロモーターが組み込まれたトランスフェクションベクターのpVL 1393やpVL1392などと同時にトランスフェクションすることにより、Sf9細胞中における組換えバキュロウイルスがほぼ100%の効率で得られます。この線状化DNAは、野生型のv-cath/chi(カセプシンとキチナーゼ)の遺伝子座を欠損させた変異型のため、有害なプロテアーゼ産生能が欠損しており、またタンパク質生産時の競合も抑制されることから、目的タンパク質を高発現できます。

BestBac System図

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BestBac System図

従来のバキュロウイルス発現システムとBestBac発現システムの比較例

トランスファーベクターの導入(共通)

BestBa System図

従来のバキュロウイルス発現システム(②~⑦ )

大腸菌の形質導入、X-galを用いたコロニー選択、BacmidのDNAの精製などを含む7ステップより成り、BestBac発現システムに比べて時間を要し、また操作が煩雑なために誤操作につながりやすい。

従来のバキュロウイルス発現システム
  • ② 大腸菌の形質導入(所要2日)
  • ③ X-galを用いたコロニー選択およびPCR確認(所要、半日または1~2日の再塗抹処理)
  • ④ 一晩のインキュベーション後の拡大培養(所要2日)
  • ⑤ Bacmid DNAの精製(所要、半日)
  • ⑥ Bacmid DNAを用いたSf9細胞の形質導入
  • ⑦ 5日後にウイルス(P0)の回収

BestBac発現システム(②~③)

BestBac発現システムは、従来のバキュロウイルス発現システムに比べて、わずか3ステップで高い生産性と安定性が得られ、操作を簡略化し、また日数も約5日間で完了します。

BestBac発現システム
  • ② BestBac DNAとプラスミドを用いたSf9細胞の形質導入
  • ③ 5日後にウイルス(P0)の回収

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製品ラインナップ

商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 Baculovirus Cotransfection Kit
BestBac 2.0 Δ v-cath/chiA BestBac 1.0(Wild type)
商品コード 91-200 91-100
キット内容 BestBac 2.0 Δ v-cath/chiA Linearized Baculovirus DNA
BestBac 1.0 Linearized Baculovirus DNA
Transfection medium*2
Expres2 TR Transfection Reagent*3

  • *2 Transfection medium:本製品に含まれる無血清、動物由来成分フリーの昆虫細胞培養用のトランスフェクション培地です。Expres2 TR Transfection Reagentとの使用に最適化されており、高い導入効率を示し、ウイルスベクターの産生と一過性の発現を促進します。
  • P0ウイルス力価の比較

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    P0ウイルス力価の比較

    一過性発現率(%)の比較

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    一過性発現率(%)の比較


  • *3 Expres2 TR Transfection Reagent:本製品に含まれるバキュロウイルスベクター産生におけるコ・トランスフェクションまたはトランスフェクションステップ用カチオン性脂質試薬です。昆虫細胞培養での使用に最適化されており、高い導入効率とウイルスベクター産生と一過性の発現を促進します。

本製品には、目的遺伝子を組み込んだトランスファーベクターは含まれていません。別売りのpVL1392 / pVL1393 Transfer Vectorを事前にご用意下さい。


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特長

  • 野生型の線状化BestBac DNAよりv-cath/chitinase(カセプシンおよびキチナーゼ)遺伝子が欠損した変異型を用いているため、有害なプロテアーゼを除去し、目的タンパク質を高発現できます。
  • AcMNPV E2クローン由来の線状化バキュロウイルスDNAで、in vivo およびin vitroにおいて交互に継代を繰り返すことで、ウイルスの完全性が確認されています。
  • 宿主細胞に対して毒性を有するタンパク質も高レベルで発現できます。
  • 発現系に昆虫細胞を用いているため、多くの翻訳後修飾が正しく行われ、大腸菌で発現できないタンパク質でも発現させることができます。
  • 従来の昆虫細胞による発現構築システムと比較して、大腸菌の形質導入、X-galを用いたコロニー選択、BacmidDNAの精製などの工程をスキップできるために、短縮が可能になり、人為的なミスの発生を軽減し、成功率の向上などのさまざまなメリットがあります。

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別売品 pVL1392 / pVL1393 Transfer Vector

pVL1392およびpVL1393は、目的遺伝子を組み込んだトランスファーベクターです。プロモーターには、Autographa californica核多角体病ウイルス(AcMNPV)のポリヘドリンプロモーター(pPolh)を用いています。

ベクターマップ

pVL 1392/1393ベクターマップ

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pVL 1392/1393ベクターマップ

pVL 1393 MCS部位配列

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pVL 1393 MCS部位配列


pVL 1392 MCS部位配列

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pVL 1392 MCS部位配列

Transfer vector set(#91-030)に含まれるpVL 1393およびpVL 1392


プラスミドの特長

  • 5’ Recombination Seq:1~3,997 bp
  • pPolh:3,998~4,092 bp
  • pVL 1393 MCS:4,129~4,169 bp
  • pVL 1392 MCS:4,134~4,174 bp
  • ColE ori::7,407~8,026 bp
  • Ampicillin Resistance:8,181~9,041 bp
  • 3’ Recombination Seq: 4,180~6,973 bp

保存用バッファー

  • 10 mM Tris-HCl, pH8.0

製品の種類

商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。

品名 pVL1392, pVL1393 Transfer Vector Set pVL1392 Transfer Vector pVL1393 Transfer Vector
商品コード 91-030 91-012 91-013

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価格

BestBac Baculovirus Cotransfection Kit

[在庫・価格 :2024年05月20日 00時00分現在]

※ 表示されている納期は弊社に在庫が無く、取り寄せた場合の納期目安となります。
詳細 商品名
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納期 文献数
BestBac 2.0 D v-cath/chiA Baculovirus Cotransfection Kit
3~4週間 ※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。 0
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※ウイルスベクター関連製品のため,購入時に使用者確認書が必要です。 バキュロウイルス-昆虫細胞高発現構築用キット。組換えAcNPVE2クローン由来のバキュロウイルスの線状化DNAとトランスファーベクターをSf9細胞にトランスフェクションすることでタンパク質を高発現できる。
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※ウイルスベクター関連製品のため,購入時に使用者確認書が必要です。
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[在庫・価格 :2024年05月20日 00時00分現在]

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BestBac 2.0 D v-cath/chiA Baculovirus Cotransfection Kit

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Linearized Baculovirus DNA, BestBac

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Linearized Baculovirus DNA, 2.0, v-cath/chitinase A Deletion, BestBac
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[在庫・価格 :2024年05月20日 00時00分現在]

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Linearized Baculovirus DNA, 2.0, v-cath/chitinase A Deletion, BestBac

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Transfection Medium

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Transfection Medium
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バキュロウイルス-Sf9細胞トランスフェクション用培地。
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バキュロウイルス-Sf9細胞トランスフェクション用培地。
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Transfection Medium

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Expres2 TR Transfection Reagent

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Expres2 TR (Transfection Reagent), 75 ul (included in BestBac kits)
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Expres2 TR (Transfection Reagent), 75 ul (included in BestBac kits)

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別売品 pVL1392 / pVL1393 Transfer Vector

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pVL Vector Set
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pVL 1392, pVL 1393トランスファーベクターセット。
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pVL1392 Transfer Vector
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pVL1393 Transfer Vector
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pVL Vector Set

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説明文 pVL 1392, pVL 1393トランスファーベクターセット。
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pVL1392 Transfer Vector

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pVL1393 Transfer Vector

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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