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トポイソメラーゼ活性の測定によりがん細胞における阻害物質の評価ができます TOPO Ⅰ&Ⅱ In Vivo Link Kit

掲載日情報:2017/01/13 現在Webページ番号:65450

TOPO Ⅰ In Vivo Link KitおよびTOPO Ⅱ In Vivo Link Kitは、in vivo でトポイソメラーゼ(TOPO, Topoisomerase)酵素の活性を定量化することができます。遊離型とTOPO/DNA複合体をCsCl密度勾配遠心法で分離し、TOPOⅠまたはTOPOⅡに対する抗体を用いるイムノブロッティングによってTOPO/DNA複合体を定量します。
特定のがん細胞において、予測されるトポターゲットに阻害活性を有する新規薬物の評価を行うことができます。

特長

  • 核内の染色体凝集において、新規化学物質の内因性TOPOに対する活性を確認することができます。
  • 任意の腫瘍細胞または組織で使用可能です。
  • 同一実験においてTOPOⅠおよびTOPOⅡのキットを組み合わせて使用することも可能です。
  • キットにはポジティブコントロールとして既知の阻害物質が含まれています。

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操作方法概略

TOPO In Vivo Link Kitの操作方法概略
  1. 細胞を薬物処理し、共有結合性の切断TOPO/DNA複合体のTOPOを捕捉するため、界面活性剤サルコシル(Sarkosyl)を用いて速やかに溶解する。
  2. 非共有結合DNA/タンパク質複合体を分離する。
  3. 共有結合性トポ/DNA複合体、クロマチン凝集、タンパク質をCsCl密度勾配遠心法で分離して分画する。
  4. DNAピークにおけるTOPOの量が共有結合性トポ/DNA複合体の基準となる。
  5. プローブとしてTOPOⅠまたはⅡに対する抗体を用い、イムノブロッティングによってDNAピークにおけるTOPO濃度を測定する。
  6. 切断可能な複合体を安定化する化学物質(Etoposide、Camptothecin)の非存在下では、DNAピーク中にTOPO(特にTOPOⅡ)は低レベルでしか含まれない。TOPOのDNA濃度とタンパク質濃度の比率は、切断可能な複合体の安定化の相対効率を示す。

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使用例動画

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キット内容

  • Camptothecin (#TG1021のみ)
  • Etoposide (#TG1022のみ)
  • Sarkosyl
  • Antibody to topoisomerase Ⅰ(#TG1021のみ)
  • Antibody to topoisomerase Ⅱ(#TG1022のみ)
  • CsCl stock solution

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価格

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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