デジタルPCR受託サービス
掲載日情報：2022/01/20 現在Webページ番号：65425
Bio-Rad QX200デジタルPCRシステムを用い、限界希釈＊した試料をマイクロ流路技術により、微小区画（water-in-oilのドロップレット）に分散させてエンドポイントPCRを行います。希少変異解析やCNV（コピー数多型）の測定にご利用いただけます。
＊各微小区画にターゲットDNAが1または0となるような希釈
※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
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特長
- ターゲット遺伝子を含むドロップレットでは増幅シグナル（ポジティブ）とターゲット遺伝子を含まないドロップレット（ネガティブ）の微小区画をカウントし、試料の濃度を測定します。
- ポジティブの数と微小区画の数をポワソン分布で補正することにより最終濃度を算出します。
- Bio-Rad QX200デジタルPCRシステムは、加水分解プローブと二本鎖DNAにインターカレートするEvaGreen色素のどちらでも測定することができます。
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デジタルPCRの利点
- PCR増幅効率に左右されない
- 限界希釈を行うため、試料中のPCR阻害要因を軽減
- 検量線を使わずに定量可能
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変異解析
ゲノムDNAを用いて、希少変異解析を行います。
- Bio-Rad社 ddPCR Mutation Detection Assays
- ThermoFisher Scientific社 TaqMan SNP Genotyping Assays
- ThermoFisher Scientific社 TaqMan Drug Metabolism Genotyping Assays
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CNV解析
ゲノムDNAを用いて、コピー数多型解析を行います。
- Bio-Rad社 ddPCR Copy Number Assays
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サービス概要
- 試料のクオリティチェック（QC）を行います。
- PCRマスターミックスと試料混合を調整し、専用オイルを用いてドロップレットを作成します。
サーマルサイクラーによりエンドポイントまで目的産物のPCRをおこないます。 - PCR終了後、専用のReader（QX200）にセットし、シースフローにより一つ一つのドロップレットを流路内に移動させ、ポジティブドロップレットとネガティブドロップレットの数をカウントします。
- ポアソン分布にあてはめることにより、試料の濃度を測定します。
ddPCR Assays（Bio-Rad社）、TaqMan Assays（Thermo Fisher Scientific社）またはLBx Probe（理研ジェネシス社）に対応しています。
もしくは、お手持ちのddPCR対応のプローブをご提供下さい。
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データ解析
デジタルPCRでは試料の単位容量当たりにターゲット遺伝子が何コピー 存在するかを算出しますが、限界希釈であっても微小区画当たりの断片数が1以上になる場合があります。これを補正するため、ポジティブの数と微小区画の数をポアソン分布にあてはめて最終濃度を算出します。この補正は微小区画数が多いほど精度が高くなり、ばらつきをおさえるには1試料当たり10,000区画以上が必要とされています。
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納品物
●試料QC結果（品質検査結果）
- DNA images（ゲル電気泳動波形画像）
- Sample Data（試料濃度情報）
●Raw Data（数値データ）
- QX200 Droplet Reader エクスポートデータ
●解析結果（コピー数測定結果表など）
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納期
- 試料QC通過後、2か月程度（正式なご注文後に試薬をメーカーに発注します。試薬の納期によって変動する可能性があります）。
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試料送付について
詳細は当社受託・特注品担当（下記参照）までお問い合わせ下さい。
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ご注文方法／価格
詳細は当社受託・特注品担当（下記参照）までお問い合わせ下さい。
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