プロテオームの濃縮、分画キット NuGel NRicherシリーズ

6種類の異なる表面処理を施した多孔質シリカビーズを用いて、それぞれのプロテオームへの親和力の違いにより、プロテオーム試料中の少量のタンパク質の濃縮（NuGel NRicher Mx）や12種類のサブプローテオーム分画(NuGel NRicher 6)を行うキットです。タンパク質の構造や機能を保持したまま、濃縮、分画が行えます。

※本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

NuGel NRicher Mx は、Compound-centric Displacement Proteomics(CCDP)と呼ばれる化学的プロテオミクスを採用しており、6種類の異なる表面処理を施したシリカビーズPRO-(A, B, C, L, N, R)がそれぞれ等量予め混合されています。試料中の各種タンパク質と混合ビーズは、それぞれの親和力に応じて非共有結合性の弱い結合力で非選択的に結合します（上図参照）。試料中に多く含まれるタンパク質がビーズ吸着容量より過剰に存在する場合、タンパク質分子間でビーズとの結合に際して競合が生じるために結合率は低下します。一方、試料中に少量しか含まれていないタンパク質では、ビーズとの結合に際して競合がないために、相対的に結合率は高くなります。この原理によって、試料中に少量含まれるタンパク質を効果的に濃縮することができます。濃縮されたプロテオームは、さらにNuGel NRicher 6 Kitにより12種類のサブプロテオームに分画することが可能です。

NuGel NRicher 6 は、6種類の異なる表面処理を施したシリカビーズPRO-(A, B, C, L, N, R)がそれぞれ別々に包装されています。各ビーズは、それぞれタンパク質に対する親和力に違いがあります。この親和力の違いにより、上図に示したようにBead BからBeads Rまで順に吸着画分（Beads）、非吸着画分（Flowthrough）に分けることで、最大12種類のサブプロテオームに分画することができます。

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CCPD法を用いた一般的な組織ホモジェネートからImatinibと相互作用するタンパク質のLC-MS/MSによる同定およびスペクトルの測定値

カフェインを非特異的なコントロール物質とし、採集洗浄バッファーをネガティブコントロールとした。

NuGel NRicher 6のBeads A, B, C, L, N, Rを用いたPEP機能活性解析－正常血清（上カラム）vs. 結腸がん血清（下カラム）（ArrayBridge提供、St. Louis, MO）

各ビーズを用いて血清25μｌの分離を行った。変性SDS-PAGEによりサイズを分画し、電気的に溶出してウェルに添加した。リフォールディング溶液を添加後、カスケード酵素として牛肉エキスを用い、最終的に分光光度計でNADPの減少量の測定により各ウェルのヘキソキナーゼ活性をモニターした。円で囲まれた領域は、バックグラウンドを差し引いた後に上方調節された酵素活性値を示す。これらの数値は、6 NRicher beads A、B、C, L、N、Rのそれぞれで異なるパターンを示し、正常人（上部パネル）の一般的なパターンは、結腸がん患者（下部パネル）と区別される。