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特異プローブと PCRにより多剤耐性結核菌を簡便、迅速に検出するキット TB Drug-Resistant Mutation Test Kit

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:65209

Multi-color melting curve analysis (MMCA) により、多剤耐性結核(MDR-TB)および超多剤耐性結核(XDR-TB)を簡便、迅速かつ特異的に検出するキットです。

フライヤー

結核菌と多剤耐性

結核菌(Tubercle Bacillus: TB、Mycobacterium tuberculosis)はヒトの結核を引き起こす病原菌で、化学療法ではリファンピシン(REP)、イソニアジド(INH)、カナマイシン(KM)、フロオノキノロン(FQ)などが使用されています。しかし、不適切な薬剤使用などにより耐性菌が出現し、とりわけRFP やINHが無効な「多剤耐性結核(MDR-TB)」および REP, INHに加え FQとKMなどにも耐性を持つ「超多剤耐性結核(XDR-TB)」が出現したことにより、使用できる薬剤が限局されてきています。


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多剤耐性結核菌の検出キットの特長

  • 正確:米国での臨床試験データでは、総一致率は93%以上でした。
  • 鋭敏:検出感度は、103~105 bacterial copies/ mlです。
  • 迅速:従来の方法では最長一か月を要する結果が、本キットではDNA抽出後、2~3時間で得られます。
  • 包括性:本キットは、多剤耐性結核のほとんどの変異のタイプをカバーしています。
  • 信頼性:Tm値は機器で測定するため使いやすく、人間の主観による誤差を低減します。閉鎖系のPCRシステムは、エアロゾル汚染を避けることができます。
  • FAMおよびTET(Fluoroquinoloness耐性キットはFAM)を検出できるリアルタイムPCR装置で解析します。

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Multi-color melting curve analysis (MMCA) の測定原理1~3

PCR増幅後、PCR産物を蛍光プローブとハイブリダイズしTm値を測定します。変異型は、野生型とのTm値の比較によって検出することができます。

MMCAの測定原理

使用するプローブ(Dual-labeled probe)は、片端に蛍光色素、反対側に蛍光クエンチャーで修飾されています。
上段:野生型を元に作製したプローブとPCR産物とが完全に一致した場合。縦軸に蛍光強度、横軸に温度を取ると特有のシグモイド曲線を描きます。次に横軸は温度のまま、縦軸に -dF/dT(蛍光強度の負の一次微分値)を取ると、下向きの矢印の指すピークがTm値となり、野生型の場合が最も高い温度を示します。
中段:標的に変異が入ると、Tm値は低下します(青線)。
下段:変異は野生型ハイブリッドに対しての Tm偏差(△Tm)として検出されます。

参考文献

  1. Luo T. et al., J. Clin. Microbiol., 49 (9), 3132~3138 (2011).
  2. Huang Q. et al., PLoS ONE, 6 (4), e19206 (2011).
  3. Liao Y. et al., J. Clin. Microbiol., 51 (2), 429~435 (2013).

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各キットの変位検出範囲と網羅率

標的化合物商品コード有効検出範囲変異の網羅率
Rifampin2-300-10048rpoB コドン 507 からコドン 533 まで(81 bp)95%
Isoniazid2-300-20048ahpC プロモーター領域 (positions -44 から -30 および -15から 3), inhA コドン 94, inhA プロモーター領域 (positions -17 から -8) およびkatG codon 31550%~90%
Ethambutol2-300-30048embB コドン 306, 368, 378, 380, 406, 49775%~95%
Streptomycin2-300-40048rpsL コドン 43 と コドン 88, rrs positions 513 から 517 と positions 905 から 90870%~90%
Fluoroquinolones2-300-50048gyrA コドン 88 から 9470%~90%

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多剤耐性結核菌の検出キットの価格

[在庫・価格 :2024年03月28日 18時15分現在]

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TB Drug-Resistant Mutation Test Kit(48 tests)
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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