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より鮮明なイメージングのためのNanobody二次抗体 Chromotek社 Nano-Secondaryシリーズ

掲載日情報:2019/06/18 現在Webページ番号:64948

Nanobody(ナノボディ)と呼ばれるイムノグロブリンの軽鎖を欠いたアルカパ(ラクダ科)抗体の可変領域(VHH)を用いた,Alexa Fluor標識の二次抗体です。高い親和性/特異性で一次抗体(ウサギIgG / マウスIgG)に結合します。

Chromotek社は,アルパカのシングルドメイン抗体フラグメント(VHH / Nanobody)を用いて,非常に特異的な組換えモノクローナル二次抗体を開発しました。Nano-Secondaryは配列が完全に決定されており,また微生物における組換え技術によって産生されているため,ロット間のばらつきがなく,一貫した高品質な製品です。


Nano-Secondaryの模式図

Nano-Secondaryの模式図

  • 抗ウサギIgG一次抗体(灰色):2つのFab(薄緑色)および2つのFc(濃緑色)に,部位特異的に結合します。全部で8個の蛍光色素(赤色の星)で一次抗体を標識します。
  • 抗マウスIgG1 / IgG2b一次抗体(灰色):2×2つのFc(濃緑色)に,部位特異的に結合します。全部で8個の蛍光色素(赤色の星)で一次抗体を標識します。
  • 抗マウスIgG3一次抗体(灰色):2つのFab(濃緑色)に,部位特異的に結合します。全部で6個の蛍光色素(赤色の星)で一次抗体を標識します。

MEMO

アルパカ(ラクダ科)抗体とは


ラクダ科(アルパカ,ラマ,ラクダとヒトコブラクダ)は,従来のIgG抗体以外に重鎖抗体(HcAbs)と呼ばれる第2のタイプの抗体を持っています。HcAbsは,重鎖のみで構成され,Nanobodyとして知られる単一の可変領域(VHHドメイン)を介して,その標的タンパク質に結合します。一般の複合体分子を形成しているIgG抗体の分子量は約150 kDaで,その複合体構造上ばらつきが生じるのに対し,このVHHドメインの分子量はわずか約13 kDaで,標的タンパク質に対する高い結合特性や特異性に加えて,ロット間差がなく高い品質で製造できるといった長所があります。

アルパカ(ラクダ科)抗体とは


Nano-Secondaryシリーズのラインナップ

商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。

標識 容量 Alpaca anti-IgG, recombinant VHH
Anti-rabbit IgG Anti-mouse IgG1 Anti-mouse IgG2b, Fc-specific Anti-mouse IgG3, Fab-specific
Alexa Fluor 488 10μl srbAF488-1-10
100μl srbAF488-1-100
Alexa Fluor 568 10μl srbAF568-1-10
100μl srbAF568-1-100
Alexa Fluor 647 10μl srbAF647-1-10 sms1AF647-1-10 sms2bAF647-1-10 sms3AF647-1-10
100μl srbAF647-1-100 sms1AF647-1-100 sms2bAF647-1-100 sms3AF647-1-100


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特長

  • 高解像度イメージングに有用です。
  • 正確で再現性のある結果が得られます。
  • ワンステップ蛍光免疫染色(一次抗体とNano-Secondaryの同時インキュベーション)が可能です
  • 高感度のため,低発現エピトープも検出できます。
  • 高親和性のため,バックグラウンドが低減されます。
  • 特異性:ウサギまたはマウスIgGのFabおよびFcフラグメント
  • 免疫動物:アルパカ(組換え技術によって産生)
  • フォーマット:Nanobody / VHH
  • 標識:Alexa Fluor 488,568,647
  • クロナリティ:
    ウサギIgG,マウスIgG,マウスIgG2b:2種類のモノクローナルNanobodyの混合(バイクローン)
    マウスIgG3:モノクローナルNanobody
  • 適用:免疫蛍光染色(IF),超解像顕微鏡,ウエスタンブロッティング

詳細は「ワンステップ免疫染色の検証」をご覧下さい。

Nano-Secondaryのサブクラス

Nano-Secondaryサブクラスの特異性

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従来の二次抗体とのサイズの比較

従来の二次抗体とのサイズの比較

Chromotek社のNano-Secondary(左,緑色)は,再現性のある様式で一次抗体(灰色)に結合し,エピトープ(赤紫色)に対して小さくて正確な複合体を形成します。一方,従来のポリクローナル二次抗体(右,緑色)は一次抗体と共に,より大きく,無作為な複合体を形成します。

Nano-SecondaryはVHHであり,従来の二次抗体(IgG)の約10分の1の大きさです。蛍光色素とエピトープとの間の距離が短くなるため,より高解像度のイメージングが可能になります。また,従来の二次抗体よりも組織により浸透します。

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ワンステップ蛍光免疫染色の検証

ワンステップ免疫染色の検証

HeLa細胞をrabbit anti-βActin antibody,anti-Histone H2A antibody,anti-Ki67 antibody,anti-LaminB1 antibody,およびalpaca anti-rabbit IgG, recombinant VHH, Alexa Fluor 647(希釈倍率1:1,000)(#srbAF647-1)を用いて免疫染色した。各一次抗体およびNano-Secondaryは,ワンステップ蛍光免疫染色で同時(上段),または標準的な免疫染色プロトコルに従って順次(下段)に使用した。落射蛍光画像は,CellInsight CX 7 HCS顕微鏡および20×対物レンズによって取得した。スケールバー:20μm

Nano-Secondaryはクラスター化しない一価抗体のため,ワンステップ蛍光免疫染色(一次抗体と二次抗体の同時インキュベーション)が可能です。これにより,インキュベーション時間や洗浄工程を減らすことができます。また,多重染色は,複数の一次抗体と異なる蛍光色素を標識したNano-Secondaryをプレインキュベーションした後,試料に添加することで行います。同じサブクラスの一次抗体であっても可能です。もちろん標準的な免疫染色プロトコルに従って順に使用することもできます。

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Nano-Secondaryの使用例

Nano-Secondaryを用いた免疫蛍光染色像

Alpaca anti-rabbit IgG Nano-Secondaryを用いた免疫蛍光染色像

ほぼ内因性のレベルでチューブリン-GFPを安定的に発現するHeLa細胞を,rabbit anti-GFP antibody(#PABG1)およびalpaca anti-rabbit IgG, recombinant VHH, Alexa Fluor 647(希釈倍率1:1,000)(#srbAF647-1)を用いて免疫染色した(赤紫色)。核はH2B-RFPシグナルで検出した(青緑色)。共焦点画像は,Leica TCS SP8顕微鏡および100×対物レンズによって取得し,Huygens Professional(SVI)で画像処理した。スケールバー:20μm


anti-mouse IgG<sub>1</sub>

Anti-mouse IgG1 Nano-Secondaryを用いたHeLa細胞の免疫蛍光染色像
HeLa細胞をAnti-Vimentin mouse IgG1およびalpaca anti-mouse IgG1 VHH Alexa Fluor 647 (#sms1AF647-1)を用いて蛍光免疫染色した(灰色)。核はDAPIで染色した(青色)。スケールバー:10μm


anti-mouse IgG<sub>2</sub>

Anti-mouse IgG2b Nano-Secondaryを用いたHeLa細胞の免疫蛍光染色像
HeLa細胞をAnti-β-Tubulin mouse IgG2bおよびalpaca anti-mouse IgG2b VHH Alexa Fluor 647 (#sms2bAF647-1)を用いて蛍光免疫染色した(赤色)。核はDAPIで染色した(青色)。スケールバー:10μm


anti-mouse IgG<sub>3</sub>

Anti-mouse IgG3 Nano-Secondaryを用いたHeLa細胞の免疫蛍光染色像
HeLa細胞をAnti-Lamin A/C mouse IgG3およびalpaca anti-mouse IgG3 VHH Alexa Fluor 647 (#sms3AF647-1)を用いて蛍光免疫染色した(赤色)。スケールバー:10μm


共焦点顕微鏡および超解像顕微鏡での解析

共焦点顕微鏡および超解像顕微鏡での解析

HeLa細胞をrabbit anti-Lamin B1 antibodyおよびalpaca anti-rabbit IgG, recombinant VHH, Alexa Fluor 568(希釈倍率1:1,000)(#srbAF568-1)を用いて蛍光免疫染色した。共焦点(confocal)およびgated STED画像は,775 nmレーザーでパルス除去したLeica TCS SP8 STED 3X顕微鏡を用いて取得した。


Nano-Secondaryを用いたウエスタンブロッティング像

anti-rabbit IgG Nano-Secondaryを用いたウエスタンブロッティング像

試料:EGFP精製タンパク質(#EGFP-250)を添加したHEK293T細胞ライセート
一次抗体:rabbit anti-GFP antibody(#PABG1
二次抗体:Alpaca anti-rabbit IgG, recombinant VHH, Alexa Fluor 488(希釈倍率1:1,000)(#srbAF488-1


ウエスタンブロッティング像

Nano-Secondaryを用いたウエスタンブロッティング多重蛍光染色像

HEK293T細胞ライセート中のGFP-TOM70,β-Tubulin,およびGFPを多重蛍光検出した。
緑色:rabbit anti-GFP antibody(#PABG1)およびAlpaca anti-rabbit IgG, recombinant VHH, Alexa Fluor 488(#srbAF488-1
赤色:mouse anti-β-TubulinおよびAlpaca anti-mouse IgG2b, recombinant VHH, Alexa Fluor 647(#sms2bAF647-1


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価格表

Alpaca anti-Mouse IgG, recombinant VHH

[在庫・価格 :2019年08月24日 00時14分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
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(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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