抗体ダイレクトクローニング技術による組換え抗体作製 ウサギモノクローナル抗体作製受託サービス
掲載日情報：2019/11/13 現在Webページ番号：64781
高親和性のモノクローナル組換え抗体を取得できる独自のシステム「抗体ダイレクトクローニング技術＊」を用いて、お客様の抗原に対するウサギモノクローナル抗体を作製する受託サービスです。抗原を免疫したウサギのリンパ組織から抗体ライブラリーを構築し、大腸菌に遺伝子導入後、コロニー形成時に発現誘導を行うことで、目的抗体を産生するクローンの同定とクローニングを同時に行い、高親和性のモノクローナル組換え抗体を取得します。
ウサギはマウスより免疫機構が複雑であることやVLのCDRが長いことから、抗体のバリエーションが大きく、親和性の高い抗体を取得しやすい事が知られています。
※ 「抗体ダイレクトクローニング」は株式会社バイオピークの商標です。
※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。
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特長
- 抗体ダイレクトクローニング技術により、高親和性を有するウサギモノクローナル抗体を得られることが期待されます。
- 専用の発現ベクターを用いて、抗体遺伝子ライブラリーを構築します。抗体遺伝子ライブラリーを大腸菌に導入し、プレート上にコロニーを形成させると同時に発現誘導することで、短時間に多くのクローンを同時に評価することができます。
- 寒天培地上にクローンを播種するため、ハイブリドーマ法に比べて10倍以上の陽性クローンを得ることが可能です。
- 多数のクローンを評価することにより、多くの陽性クローンを得られることから、高親和性のモノクローナル組換え抗体の取得が可能です。
- 選択した陽性クローンはそのまま抗体を再発現することが可能です。そのため、多種類の項目を簡単に短時間で評価することが可能です。
- 得られる抗体は、一本鎖抗体(scFv : single chain Fv)です。クローンを樹立した後、FabやIgGへ構造を改変することが可能です。
- 得られた抗体に検出酵素やヒトのIgG定常領域を融合することで、様々なアプリケーションに用いることが可能です。
- 組換え抗体の大量生産が可能です。
- 抗体は、分泌発現するため簡便に精製が可能です。
- 得られたクローンが産生する抗体はAPが融合されているため（アルカリフォスファターゼ(AP)融合scFv）、クローンを樹立した後、そのまま検出抗体としても使用可能です。また、FabやIgGに容易に改変することも可能です。
- 納品いたしました抗体可変領域の配列の権利は、お客様に帰属いたしますので、ご自由にお使いいただけます。
※ラット・マウス・ニワトリのモノクローナル組換え抗体作製も可能です。
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抗体ダイレクトクローニング法とは
scFvライブラリーが組み込まれた大腸菌のコロニー形成・scFv発現・抗原抗体反応・クローニングをワンステップで行うことができるバイオピークの独自技術です。
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抗体ダイレクトクローニング技術によるウサギモノクローナル抗体の作製の流れ
| 1.ウサギの免疫 |  |
| ウサギ：2羽 免疫回数：2週間毎5回、抗原 0.2 mg／回 試採血：2回（免疫前、最終免疫前） 全採血：9週間後、全採血からPBMCを精製 |
|
| 2. scFv libraryの作製 | |
| 2-1. PBMCからRNAを精製し、RNAからcDNAを合成 2-2. cDNAを鋳型にVH, VL遺伝子をPCR増幅 2-3. VH, VL遺伝子を発現ベクターに組み込み、AP融合scFv発現vector libraryを作製 2-4. AP融合scFv発現vector libraryにて大腸菌を形質転換 |
|
| 3. 抗体ダイレクトクローニング法によるスクリーニング | |
| 3-1. 大腸菌libraryを培地に播種し、コロニー形成・発現・抗原抗体反応・クローニング 3-2. 抗原抗体反応シグナルを検出し、シグナルの強い12クローンを採取 |
|
| 4. 陽性クローン抗体遺伝子配列解析及びライセートの調製 | |
| 12陽性クローンを液体培養 →プラスミド精製後、抗体遺伝子配列解析 または →テスト発現後、ライセートを調製し、ELISA |
|
| 5. 納品 | |
| 1. 12クローンのVH, VL遺伝子配列 2. ELISA結果 3. 12クローンのテスト発現ライセート（1 ml/クローン） |
追加可能作業
- 抗原作製
- 抗体ダイレクトクローニングの追加
- 陽性クローンの追加
- 陽性クローンの少量発現培養上清（1～10 ml／クローン）
- 取得抗体遺伝子の発現ベクター作製（scFvをご希望のベクターに組み込みます）
- 取得抗体のIgG化、Fab化
ハイブリドーマ法と抗体ダイレクトクローニング法の比較
| 項目 | ハイブリドーマ法 | 抗体ダイレクトクローニング法 |
|---|---|---|
| 期間 | 6ヶ月 | 3ヶ月 |
| 免疫動物種 | マウス・ラットなど | ウサギ・ラット・マウス・ニワトリ |
| 発現細胞 | ハイブリドーマ | 大腸菌 |
| スクリーニング クローン数 |
103 | 105 |
| 取得抗体数 | 少 | 多 |
| 抗体の形態 | IgG | 組換え抗体(scFv) |
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ご提供いただくもの
- 抗原3 mg以上（可溶性抗原を1 mg/ml以上の濃度）
免疫に2 mg、スクリーニングに1 mg使用いたします。
注意点
- 抗原の溶液はPBSを推奨いたしております。
- 抗原や溶液の毒性や感染性につきましての情報はお知らせ下さい。感染の危険がある抗原につきましては、受け入れ出来ない場合がございます。
- 抗原をお客様でご用意いただけない場合や、量を確保できない場合は、ご相談下さい。
- 抗原がペプチドや低分子化合物の場合、抗原にKLHやBSAへのコンジュゲートをお願いいたします
（免疫用にKLH、スクリーニング用にBSAを推奨しております）。
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納品物
- 12陽性クローンのVH, VL遺伝子配列ご報告書
- 12陽性クローンのELISA結果ご報告書
- 12陽性クローンのテスト発現ライセート（1 ml／クローン）
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ご注文方法／価格
詳細は当社受託・特注品業務担当（下記参照）までお問い合わせ下さい。
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