RT-PCRの逆転写反応とPCR増幅を同一チューブ内で行えます SunScript One Step RT-PCR Kit
掲載日情報：2015/11/09 現在Webページ番号：64427
SunScript One Step RT-PCR Kitは、熱安定性の高い逆転写酵素および高品質Taqポリメラーゼがあらかじめ混合されているため、RT-PCRの逆転写反応とPCRの増幅反応を同一チューブ内で簡便、迅速かつ特異的に行えます。
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特長
- キットにはRT-PCR反応に必要なすべての試薬が含まれています。
- 同一チューブで全ての反応を行うため、コンタミネーションのリスクを最小化できます。
- 簡便性に優れ、多数の試料の同時処理に最適です。
- 逆転写反応にHIV-1 RTのRNaseHを欠損させた熱安定性のSunScript Reverse Transcriptase RNaseH－を用いています。
- 逆転写反応は最高85℃まで温度上昇が可能で、二次構造やGC含有量が高く増幅が困難なRNAにも適応します。
- 反応試薬にはdNTPs（最終反応濃度250 nM）、MgCl2（最終反応濃度3.5 nM）、スタビライザーも含まれます。
- RNA試料量：10 pg～1μg
- 測定回数：25 reactions (#430025), 100 reactions (#430100)
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反応原理
- SunScript One Step RT-PCR Kitは、逆転写反応にHIV-1 RT由来の熱安定性およびRNaseHを欠損させたSunScript Reverse Transcriptase RNaseH-を用いています。
- この逆転写酵素は、RNAの分解を最小化することでcDNAの収率を向上します。また耐熱性に優れ、必要に応じて通常の反応温度の60℃に対し85℃まで逆転写反応の温度上昇に対応するため、二次構造やGC含有量の高い増幅が困難なRNAにも適応します。
- 逆転写反応時は、Taqポリメラーゼは阻害抗体により不活性化されており、温度を95℃に上昇することで自動的に逆転写によって生成したcDNAの増幅が開始されます。
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操作方法概略
（１）RT-PCR
| Step | 標準試料 | 高GC含量、二次構造を含む試料 |
|---|---|---|
| 1 | 反応成分を溶解、混合し簡単に遠心分離を行う。氷上にて保管する。 | |
| 2 | 各試料について下に示した成分表記載の試薬を滅菌済ヌクレアーゼフリーチューブ中に添加し、氷上に置く。 | |
| 3 | 穏やかに混合し、全成分がチューブの底部にあることを確認する。必要に応じて簡単に遠心分離を行う。 | |
| 4 | サーマルサイクリングによる増幅 | 70℃で5分間試料をインキュベート後、氷上に5分間置き、変性およびプライマーのアニーリングを行う*。 |
| 5 | - | 各試料にReaction bufferとEnzyme Mixを加える。 |
| 6 | 穏やかに混合し、全成分がチューブの底部にあることを確認する。必要に応じて簡単に遠心分離を行う。 | |
| 7 | サーマルサイクリングによる増幅 | |
| 成分表 | ||
| Template RNA (10 pg～1μg) |
Xμg | Xμg |
| Sense primer (10μM) | 2.5μl | 2.5μl |
| Anti-sense primer (10μM) | 2.5μl | 2.5μl |
| H2O最終液量 | 50μl | 24μl |
| － | 変性処理（Step 4）* | |
| 2×Reaction buffer | 25μl | 25μl |
| Enzyme MIX | 1μl | 1μl |
（２）サーマルサイクリング
サーマルサイクリンングのパラメーター
| Step | Cycling Step | Time / Temperature | Cycles |
|---|---|---|---|
| 1 | cDNA synthesis | 15 min / 60℃* | 1× |
| 2 | RT inactivation/Taq activation | 10 min / 95℃ | 1× |
| 3 | Denaturation | 30 sec / 94℃ | － |
| 4 | Annealing | 30 sec / Tann | 35× |
| 5 | Extension | 1 min / 72℃** | － |
| 6 | Final extension | 7 min / 72℃ | 1× |
＊必要に応じて最高85℃まで温度を上げることが可能です。参考まで、50～70℃において高収率が得られます。
＊＊1 kb以上の長さのPCR産物については、1 kb当たり1分間伸長時間を延長して下さい。
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キット内容
- Enzyme MIX
- Reaction buffer
- H2O
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4basebio社製品ご購入のご注意
本製品は、ご注文時に専用のMTA（Material Transfer Agreement）が必要です。必要事項をご記入の上、販売店担当者にお渡し下さい。
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月25日 11時15分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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文献数 | ||
|---|---|---|---|---|---|
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SunScript One-Step RT-PCR Kit (25reactions) |
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0 | |||
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SunScript One-Step RT-PCR Kit (100reactions) |
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0 | |||
[在庫・価格 ：2024年04月25日 11時15分現在]
SunScript One-Step RT-PCR Kit (25reactions)
文献数： 0
- 商品コード：430025
- メーカー：SYN
- 包装：1kit
- 価格：¥101,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：3～4週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
※MTAが必要です。※輸入諸費用(120,000円)を別途いただく製品です。 RT-PCRの逆転写反応とPCRの増幅反応を同一チューブ内で簡便，迅速かつ特異的に行えるキット。 |
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|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
| 法規制等 | |||||||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |||||
| 掲載カタログ |
ニュース2021年7月1日号 p.12
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| 製品記事 | |||||||
| 関連記事 | |||||||
SunScript One-Step RT-PCR Kit (100reactions)
文献数： 0
- 商品コード：430100
- メーカー：SYN
- 包装：1kit
- 価格：¥309,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：3～4週間 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
※MTAが必要です。※輸入諸費用(120,000円)を別途いただく製品です。 RT-PCRの逆転写反応とPCRの増幅反応を同一チューブ内で簡便，迅速かつ特異的に行えるキット。 |
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| 別包装品 | 別包装品あり | ||||||
| 法規制等 | |||||||
| 保存条件 | -80℃ | 法規備考 | |||||
| 掲載カタログ |
ニュース2021年7月1日号 p.12
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| 製品記事 | |||||||
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