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好中球/単球の呼吸バースト測定キット Neutrophil/Monocyte Respiratory Burst Assay Kit

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:64311

好中球/単球の呼吸バーストをフローサイトメーターにより定量するキットです。細胞透過性非蛍光のジヒドロローダミン123(DHR123)を用いて、過酸化水素や過酸化窒素の酸化作用で蛍光性のローダミン123に変換する原理を用いています。

呼吸バースト(respiratory burst)とは

体内に細菌や真菌を含む微生物が侵入すると、免疫系細胞(好中球、単球、マクロファージ)が食作用により破壊します。この食作用の過程で、酸素分子はNAPDHオキシダーゼによりスーパーオキシドアニオンに変換された後、強力な抗菌作用を持つ過酸化水素や他の活性酸素種に速やかに変換されます。この現象を呼吸バーストと呼び、ホルボールエステルPMA、カルシウムイオノフォアA-23187、細菌やその構成物、酵母など、多くの刺激物質により誘引されると言われています。ヒト好中球では、好中球細胞外トラップの形成に呼吸バーストが不可欠であることが知られています。


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好中球/単球の呼吸バースト測定キットの特長

  • フローサイトメトリーによる好中球/単球の呼吸バースト定量に必要な試薬のセットです。
  • 全血や種々の細胞培養培地中の細胞で用いることができます。
  • 測定は基本的に特異的ではなく、NADPHオキシダーゼ依存性呼吸バースト反応を伴うどの動物種や細胞種にも使用できます。
  • 測定波長:蛍光488 nm/励起 ~530 nm
  • 以下の試料で測定が可能であることを確認済みです。
試料動物種
血液ヒト/マウス
培地中の初代末梢血白血球ヒト/マウス
骨随好中球マウス
腹腔滲出液マウス

測定にはフローサイトメーターが必要です。

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好中球/単球の呼吸バースト測定キットのキット内容

  • Dihydrorhodamine 123 assay reagent
  • PMA assay reagent
  • RBC Lysis buffer
  • Bovine serum albumin assay reagent
  • Calcium chlirode assay reagent

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Neutrophil/Monocyte Respiratory Burst Assay Kitの使用例

#601130のヒト末梢血FCM

ヒト末梢血のフローサイトメトリー分析

ヒト末梢血をDHR123で処理し、次いでPMAで45分間刺激して呼吸バースト誘導した。赤血球を溶解し、フローサイトメーターで白血球を分析した。

左パネル:前方角散乱光(FLS-A)と側方面散乱光(SSC-A)による好中球の分離(gate P1)、単球(gate P2)、白血球(gate P3)以降の他のパネルの分析用
残りのパネル:白血球を除くゲートの好中球と単球において、X軸FL1蛍光の右へのシフトにより、DHR123からローダミン123への酸化が示された。黒線は未処理細胞を示し、赤線はPMA-処理細胞を示す。

#601130のマウス好中球FCM

マウス好中球呼吸バーストのフローサイトメトリー分析

マウス骨髄細胞(上図)とカゼイン誘導腹腔滲出細胞(下図)をDHR123で処理し、次いでPMA(100 nM)で45分間刺激し呼吸バーストを誘導した。赤血球を溶解し、白血球をフローサイトメトリーで分析した。

左パネル:好中球を中間前方角散乱光(FLS-A)と高側面散乱光(SSC-A)で同定し、(P1)を他のパネルの後の分析に取り分けた。
右パネル:PMA処理(赤線)vs 未処理(黒線)細胞の試料から取り分けた好中球において、X軸FL1蛍光の右へのシフトによりDHR123からローダミン123への酸化が示された。

#601130のPMA用量反応

PMA用量反応

ヒト末梢血液をDHR123で処理し、次いで表記の濃度で45分間PMAを処理し呼吸バーストを誘導した。赤血球を溶解し、白血球をフローサイトメトリーで分析した。

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好中球/単球の呼吸バースト測定キットの価格

[在庫・価格 :2024年04月26日 16時15分現在]

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Neutrophil/Monocyte Respiratory Burst Assay Kit
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Neutrophil/Monocyte Respiratory Burst Assay Kit

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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