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ヒストン結合する抗体やエフェクタータンパク質をスクリーニングできるヒストンペプチドアレイ EpiTitan Histone Peptide Array

掲載日情報:2015/08/25 現在Webページ番号:64269

様々な修飾を受けたコアヒストン(histone) およびその変異体のビオチン化したペプチドを、ストレプトアビジンをコートしたガラススライド上にスポットしたペプチドアレイです。ヒストン修飾物に結合する抗体やエフェクタータンパク質の半定量解析およびハイスループットスクリーニング、ヒストン修飾酵素の基質特異性の決定に用いることができます。

特長

  • 265種類以上の様々な修飾(アセチル化、アルギニンのメチル化、リジンのメチル化およびリン酸化)を受けたコアヒストン(histone) (H3, H4, H2AおよびH2B)およびその変異体からなるヒストンペプチド(各約20 a.a.)がそれぞれ12スポットずつプリントされています。
  • 各ペプチドは、HPLCで精製されています。また質量分析により完全長であることを確認しています。
  • 各ペプチドに対して最大6種類のユニークな修飾を加えています。
  • 各ヒストンペプチドの未修飾物をコントロールとしてスポットしています。
  • タンパク質の結合の検出用コントロールとして、様々なエピトープタグおよびIgGもスポットしてあり、データの分析を簡便に行うことができます。
  • プリント効率や疑陰性の可能性を排除するため、独自の蛍光トレーサーが各ペプチドと一緒にプリントされています。
  • スライド1枚で2種類の異なる実験に用いることができます。
  • 蛍光または一般的な化学発光により検出可能です。
EpiTitan Histone Peptide Arrayの模式図

EpiTitan Histone Peptide Arrayの模式図

アレイ上のペプチドとエフェクタータンパク質の相互作用の検出には、タンパク質またはアフィニティータグに対する一次抗体と、その一次抗体に対する蛍光標識二次抗体が別に必要です。抗ヒストン抗体の特異性の分析には、研究対象のヒストンの修飾に対する一次抗体、およびその一次抗体に対する蛍光標識二次抗体が必要です。

EpiTitan Histone Peptide Arrayのレイアウト

EpiTitan Histone Peptide Arrayのレイアウト

各ペプチドはA、Bでラベルされた2つのサブアレイにスポットされています。それぞれのサブアレイの中では、各ペプチドは3つで1つのグループとし2ヶ所にスポットされています(上図赤色のドット)。このフォーマットでは、アレイを通して決まったポジションで12回スポットされており、1枚のスライドで4,000以上の相互作用の実験ができます。スポッティングの差とスライド表面を横切るハイブリダイゼーションの位置の違いを設けることで、個々のペプチドの相互作用を統計的に評価することができます。

EpiTitan Histone Peptide Arrayのペプチドの詳細とアレイレイアウトについては、こちらをご覧下さい。

EpiTitan Histone Peptide Arrayのグリッド・オーバーレイ

EpiTitan Histone Peptide Arrayのグリッド・オーバーレイ

アレイの上位にペプチドグリッドを持つ単一のサブアレイからスキャンしたデータ(赤色チャンネルのみ)

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使用例

EpiTitan Histone Peptide Arrayのグリッド・オーバーレイ

EpiTitan Histone Peptide Arrayを用いたHistone H3K4Me3とヒストン修飾の結合の検出

緑:トレーサーをスポットしたペプチド
赤:抗H3K4Me3抗体のタンパク質
抗体がセット内の3つの同じペプチドの全てと結合を示す3つの隣接する赤いドットの表示により、結合を認証する。

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