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導入困難な細胞へのトランスフェクションからハイスループットスクリーニングまで 固相トランスフェクションプレート (CPトランスフェクションプレート)の初代培養細胞と浮遊細胞への適用事例

掲載日情報:2015/08/21 現在Webページ番号:63688

固相トランスフェクションプレートの紹介ページはこちら

平滑筋細胞:Normal Human Umbilical Artery Smooth Muscle Cells (UASMC)

平滑筋細胞1 平滑筋細胞2

Y axis:CellDeath/non-silencing siRNA POC
X axis:solid-phase transfection conditions

生残率アッセイの減少している条件と、顕微画像とは良好な相関が認められた。また、ネガティブコントロールsiRNA導入細胞では、顕著な細胞障害、形態変化は認められなかった。

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内皮細胞:Normal Human Umbilical Vein Endothelial Cells(HUVEC)

内皮細胞

トランスフェクション試薬A (左)>トランスフェクション試薬B (右)
細胞に適したトランスフェクション試薬を選択することで、十分なノックダウン効率及び、低い細胞毒性を有する導入条件を見出すことが可能。

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上皮細胞:Normal Human Bronchial / Tracheal Epithelial Cells (NHBE)

上皮細胞

Y axis:CellDeath/non-silencing viability counts
X axis:solid-phase transfection conditions
Orange arrows indicates excellent transfection condition for NHBE cells
上皮系細胞においても、十分なノックダウン条件、効果が見出された。

上皮細胞

Y axis:CellDeath/non-silencing siRNA viability counts
Y chart:CellDeath/non-silencing siRNA POC
X axis:solid-phase transfection conditions
Gray bar ; un-treated cells viability counts

取得組織が異なる上皮細胞においても、望ましいトランスフェクション条件が見出された。

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初代肝細胞:Primary Human Hepatocytes

初代肝細胞

Y axis:CellDeath/non-silencing siRNA viability counts
初代ヒト肝細胞においても高い導入効率を達成し、細胞障害性も軽度であった。

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ラット由来初代神経細胞:Rat Primary Neuronal Cells

ラット由来初代神経細胞

Cell resource
Primary neuronal cells derived from rat
Evaluation Methods
Total RNA extraction:48hrs after seeding
siRNAs:Negative control siRNA
Target gene siRNA (potency≒80%)
Quantification type:RT-PCR
(Reference gene : GAPDH)
Calculation method : ⊿⊿Ct

初代神経細胞においても、広範な固相系遺伝子導入条件を検討することで、十分なノックダウン効果を見出すことができた。 さらに、細胞障害性および、神経特異的な応答性などについても、無処置群と遜色ないことが確認された。

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マウス由来初代神経細胞:Primary Mouse Neuronal Cells

マウス由来初代神経細胞

ラット初代神経細胞同様、マウス由来初代神経細胞においても、十分なノックダウン効果を達成した。
従来法で最適化された導入条件と比較しても、mRNAノックダウンレベルは、固相法が上回っており、従来法では達成しえない効率でsiRNA導入が可能であることが示された。

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浮遊系細胞への適用 - K562

浮遊系細胞への適用 - K562-1

X axis:non-silencing/un-treated POC (transfection cytotoxicity index)
Y axis:CellDeath/non-silencing siRNA POC
Z axis ; Z’ factor (n=4)
Each transfection condition within the red circle were highly efficient with low cytotoxic/variation.

浮遊系細胞への適用 - K562-2

Relative viability > 60%
POC (%) <15%
Z’ factor >0.5

Y axis:CellDeath/non-silencing siRNA viability counts
Gray bar ; un-treated cells viability counts

接着系細胞と同様に、浮遊系細胞においても十分な導入効率を見出せた。

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浮遊系細胞への適用 - Jurkat

浮遊系細胞への適用 - Jurkat-1

X axis:non-silencing/un-treated POC (transfection cytotoxicity index)
Y axis:CellDeath/non-silencing siRNA POC
Z axis ; Z’ factor (n=4)
Each transfection condition plots within red circle were high efficient and low cytotoxic/variation.

浮遊系細胞への適用 - Jurkat-2

Relative viability > 60%
POC (%) <15%
Z’ factor >0.5

Y axis:CellDeath/non-silencing siRNA viability counts
Gray bar ; un-treated cells viability counts

接着系細胞と同様に、浮遊系細胞においても十分な導入効率を見出せた。

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