血液・培養細胞などから短時間で簡単にRNA抽出を行えるキット 簡易RNA抽出キット
掲載日情報：2015/10/08 現在Webページ番号：63520
血液、培養細胞などから約30分で簡便にRT-PCRに使用可能なRNAを抽出できます。キットには、100テスト分の試薬が含まれています。
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特長
- 試料量：103～106個の細胞、0.5～2.0μlの血液（ヘパリン、EDTA処理）
- 操作時間：約30分
- 使用回数：100回分
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操作方法概略
■培養細胞
- 細胞数が103～106個となるように調製した培養液を遠心チューブに移す。
- 遠心チューブを1,000 rpmにて3分間遠心する。収集した細胞ペレットを剥がさないように上清の培養液を静かに除去する。
- 細胞ペレットにPBS(-)を100 μl加え、ピペッティングにより細胞を再懸濁する。遠心チューブを1,000 rpmにて3分間遠心後、上清を除去し細胞を収集する。
- 細胞の入った遠心チューブに試薬Aを20 μl添加し、ピペッティングでよく撹拌し懸濁する。懸濁液を新しいPCRチューブに移す。
- 懸濁液が入ったPCRチューブをヒートブロックなどで75℃で5分間インキュベートする。
- PCRチューブを室温まで冷却した後DNase Iを1 μl添加し、ピペッティングにより撹拌する。その後、ヒートブロックなどで42℃で10分間、75℃で5分間インキュベートする。
- インキュベートした溶液*11〜2 μlを鋳型RNAとして逆転写反応に使用する（25 μl反応系の場合）*2
■血液試料
- 20 μlの試薬AをPCRチューブに添加する。
- 1のPCRチューブに、ヘパリンなどの抗凝固剤*3を添加した新鮮血0.5〜2.0 μlを添加し、ピペッティングにより、よく撹拌する。
- 2のPCRチューブをヒートブロックなどで75℃で5分間インキュベートする。
- PCRチューブを室温まで冷却した後、DNase Iを1 μl添加し、ピペッティングにより撹拌する。その後、ヒートブロックなどで42℃で10分間、75℃で5分間インキュベートする。
- インキュベートした溶液*11〜2 μlを鋳型RNAとして逆転写反応に使用する（25 μl反応系の場合）*2。
*1検体の種類や状態によってはインキュベートした溶液に沈殿物が見られる場合があります。沈殿物の除去は必須の工程ではありませんが、沈殿物を除去する場合は、PCRチューブを、4℃、5,000 rpmで5分間遠心し、上清を回収して下さい。
*2抽出液は、すみやかにRT-PCRなどに使用することをお薦めいたします。抽出液を使用する際は氷上で保持し、保存時は-20℃以下で保存して下さい。
*3ヘパリン、EDTAを添加した血液からRNA抽出可能であることを確認しています。
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使用例
培養細胞からのRNA抽出およびRT-PCRによる検出結果
105個に調製した接着細胞（HEK293T、図1）または浮遊細胞（Jurkat、図2）から、本製品を用いてRNAを抽出した。抽出液を鋳型RNAとし、ACTB mRNAを標的としたRT-PCRを行った。電気泳動によりRT-PCR産物を検出した。また、抽出液にゲノムDNAが残存していないことを確認するため、抽出液を鋳型としPCRを行った。PCR産物を電気泳動し、増幅断片が検出されないことを確認した。
マウス血液からのRNA抽出およびRT-PCRによる検出結果
抗凝固剤としてヘパリンを添加したマウス血液から、本製品を用いてRNAを抽出した。抽出液を鋳型RNAとし、H3f3a mRNAを標的としたRT-PCRを行った。電気泳動によりRT-PCR産物を検出した。また、抽出液にゲノムDNAが残存していないことを確認するため、抽出液を鋳型とし、PCRを行った。PCR産物を電気泳動し、増幅断片が検出されないことを確認した。
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キット内容
- 試薬A
- DeoxyribonucleaseⅠ(DNaseⅠ)
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価格
[在庫・価格 ：2024年04月27日 09時35分現在]
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カネカ 簡易RNA抽出キット(RT-PCR) |
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[在庫・価格 ：2024年04月27日 09時35分現在]
カネカ 簡易RNA抽出キット(RT-PCR)
文献数： 0
- 商品コード：KN-T110004
- メーカー：KNK
- 包装：1kit
- 価格：¥43,000
- 在庫：3個以上
- 納期：1週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
血液，培養細胞などから約30分で簡便にRT-PCRに使用可能なRNA抽出液を得ることができるRNA抽出キット。 |
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| 法規制等 | |||
| 保存条件 | -20℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
ニュース2022年12月1日号 p.23
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| 製品記事 | |||
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