簡便かつ高収率に組換えアデノウイルスを精製するキット アデノウイルス精製キット（Cell BioLabs社）
掲載日情報：2022/11/15 現在Webページ番号：63208
従来の塩化セシウム（CsCl）密度勾配法で用いる超遠心分離は不要です。スピンカラム法（Adenovirus Purification Miniprep Kit、#VPK-099）または精製用レジン（Adenovirus Purification Kit、#VPK-5112）の使用により、ごく短時間で簡便かつ高収率でアデノウイルスの精製・回収を行うことができるキットです。
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使用例
ViraBind Adenovirus MiniPrep Kit（#VPK-099）
本製品を用いて精製した組換えアデノウイルス（Ad-β GalまたはAd-Ras G12）を、COS-7細胞に50 MOI（multiplicity of infection）となるように感染させた。48時間後に、Ad-β Gal導入細胞でX-Gal染色を行い、β-galactosidaseの発現を確認した。また、Ad-Ras G12導入細胞で、ローダミン標識ファロイジンにより細胞骨格アクチンを染色をしたところ、活性型H-Rasによる誘導で起された細胞膜ラッフリング（波打ち現象）が観察された。
本製品で精製した組換えアデノウイルスの細胞導入例
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組換えアデノウイルスを用いた遺伝子導入とタンパク質発現について
組換えアデノウイルスの利用の背景
組換えアデノウイルスは、研究と治療の両面で大きな可能性を秘めています。目的細胞に遺伝物質を導入する上でアデノウイルスの使用には多くの利点があり、また組換え体タンパク質を高発現するため、分裂・非分裂双方の多くのタイプの哺乳動物細動への導入に使用されています。組換えアデノウイルスは、リポソーム法トランスフェクション試薬での導入効率が低い細胞株での遺伝子導入およびタンパク質発現に特に有用となります。
ウイルスが細胞に侵入した後も、導入遺伝子は染色体外に残ります（つまり、宿主染色体にインテグレートされないため、宿主遺伝子の活性化や不活性化は生じません）。最近では、組換えアデノウイルスはsiRNAの目的細胞への導入にも使用されています。
従来の組換えアデノウイルスの精製法の問題点
HEK293細胞およびその変異株は、ウイルス産生細胞として使用されています。組換えアデノウイルスは、高力価（1011 VP（ウイルス粒子数）/ml、最大1013 VP/mlまで濃縮可能）で増殖できます。従来、ウイルスを精製には、ウイルス上清のCsCl超遠心分離が用いられていました。超遠心分離の後、CsClは透析によって除去されますが、この一連の操作は手間と時間（16～24時間）を要しました。
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共通の特長
- 超遠心分離は不要です。
- 精製操作は、CsCl密度勾配遠心法に比べ簡便で、ごく短時間で完了します。
- ウイルスを高回収率で効率的に精製を行うことができます。
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製品の種類
商品コードをクリックすると各製品の価格表をご覧いただけます。
| 品名 | ViraBind Adenovirus MiniPrep Kit | PureVirus Adenovirus Purification Kit | |
|---|---|---|---|
| 商品コード | VPK-099 | VPK-5112 | |
| 精製フォーマット | スピンカラム | 精製用レジン | |
| 精製原理 | 方法 | カラムにウイルスを吸着させ、その後溶出する | 精製用レジンに夾雑物を吸着させる | 精製ウイルスの回収 | 溶出液中 | フロースルー中 |
| 操作時間 | 約30分 | 2時間以内 | |
| ウイルス回収率 | ＞95％ | ＞60～70％ | |
| 夾雑物（宿主由来タンパク質、核酸、その他）除去率 | － | ＞98％ | |
| 1 prep当たりの 最大処理量 |
T75フラスコ | 1本 | 4本 |
| 10 cmプレート | 1枚 | 4枚 | |
| ウイルス粒子数 | 1.0×1011 | － | |
| 使用回数 | 10 preps | ||
| キット内容 |
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精製例
ViraBind Adenovirus MiniPrep Kit（#VPK-099）
本製品を用いて組換えアデノウイルスAd-β Galを精製した。精製により得られた各フラクションを、12ウェルプレートで培養したA549細胞に感染させた。48時間後にX-Gal染色を行い、β Gal陽性細胞（青色）の数をカウントした。
図をクリックすると拡大します（
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本製品を用いた組換えアデノウイルスAd-β Galの精製
PureVirus Adenovirus Purification Kit（#VPK-5112）
本製品を用いて組換えAd-β Galウイルスを精製した。精製時の各フラクションのアデノウイルス力価をを☞ QuickTiter Adenovirus Titer Immunoassay Kit（#VPK-109）を用いたHexon染色により確認した。また、ウイルス産生細胞に由来するタンパク質および核酸夾雑物の除去をBCAタンパク質アッセイおよびCyQuant DNA/RNAアッセイによって確認した（データ非表示）。
組換えアデノウイルスAd-β Galの精製 （図をクリックすると拡大します（））
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FAQ
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価格
ViraBind Adenovirus Miniprep Kit
[在庫・価格 ：2024年04月26日 12時15分現在]
[在庫・価格 ：2024年04月26日 12時15分現在]
ViraBind Adenovirus Miniprep Kit (10preps)
文献数： 4
- 商品コード：VPK-099
- メーカー：CBO
- 包装：1kit
- 価格：¥150,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：1週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 |
アデノウイルスをスピンカラムで精製するキット。 |
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|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 室温 | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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| 製品記事 |
Cell Biolabs（セルバイオラボ）社製品特集 |
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PureVirus Adenovirus Purification Kit
[在庫・価格 ：2024年04月26日 12時15分現在]
| 詳細 | 商品名 |
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PureVirus Adenovirus Purification Kit(10 preps) |
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[在庫・価格 ：2024年04月26日 12時15分現在]
PureVirus Adenovirus Purification Kit(10 preps)
文献数： 0
- 商品コード：VPK-5112
- メーカー：CBO
- 包装：1kit
- 価格：¥171,000
- 在庫：無(未発注)
- 納期：1週間程度 ※※ 表示されている納期は弊社に在庫がなく、取り寄せた場合の目安納期となります。
- 法規制等：
| 説明文 | |||
|---|---|---|---|
| 法規制等 | |||
| 保存条件 | 室温,4℃ | 法規備考 | |
| 掲載カタログ |
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Cell Biolabs（セルバイオラボ）社製品特集 |
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