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in vitroライゲーションを使用した迅速なアデノウイルスベクターシステム AdenoZap Cloning System

掲載日情報:2018/05/14 現在Webページ番号:6128

ウイルス作製用のコンストラクトを、in vitroライゲーションを用いて迅速かつ簡便に構築できるアデノウイルスベクターシステムです。

コスミドを利用したシステムAdenoQuick Cloning Systemについては、フナコシホームページをご覧下さい。

特長

  • 目的配列を組み込んだシャトルベクターを制限酵素で切断してLeft armを作製し、これとキットに含まれるアデノウイルスゲノム配列の大部分であるRight armを市販のT4 Ligaseを用いてライゲーションを行います。反応産物は、エタノール沈殿後にヘルパー細胞(HEK293細胞など)にトランスフェクションできるため、熟練が必要な巨大DNAの精製操作は不要です。
  • 制限酵素とリガーゼを用いるためdirectional cloningが可能で、目的ウイルス粒子のみが得られます。
  • シャトルベクターは、切断に用いる制限酵素を6塩基認識、8塩基認識、18塩基認識(I-SecⅠ:pZAP2.1 / 2.2の場合)と幅広く選択できます。
  • Right armはReady-to-useで、アデノウイルスのE3領域を含む(WT E3)製品と、欠失させた(⊿E3)製品からご選択できます。
  • 目的遺伝子のクローニングから、ヘルパー細胞へのトランスフェクションまでの操作を約3日間で行えます。コスミドのクローニングに要する時間(約5日間)を短縮することが可能です。
  • 細胞へトランスフェクション後、およそ7日後(早い場合は3日後)に組換えウイルスが得られます。
  • Ad5/35ハイブリッドファイバーとΔE3欠損により、最大9.6kbの発現カセットを挿入できるシャトルベクターがあります。

シャトルベクターに目的遺伝子発現用のプロモーター(CMVなど)は含まれません。プロモーターと目的遺伝子を含む発現カセットを挿入して下さい。

本製品はご購入時に専用の「使用目的確約書」が必要となります。詳細については当社受託・特注品業務担当(Tel. 03-5684-1645、Fax 03-5684-6539)までお問い合わせ下さい。


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操作方法概略

1.シャトルベクターに目的配列をクローニングする。
2.シャトルベクターを2種類の制限酵素で切断してLeft armを作製し、ゲル切り出しにより精製する。
3.Left armとRight armを市販のT4 Ligaseを用いてライゲーションする(1時間)。
4.エタノール沈殿をした後に、ヘルパー細胞(HEK293細胞など)にトランスフェクションする。
5.組換えウイルスが産生する。

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各キットの比較

キット名 製品コード シャトルベクター Left arm作製に使用できる制限酵素 Right arm名 E3領域の状態 Fiberの状態 E4領域の状態 目的配列の最大長
左側 右側
AdenoZap1.1 ZK-001 pZAP1.1 PacⅠ, SwaⅠ SfiⅠ, BstAPⅠ, DraⅢ, AlwNⅠ, PflMⅠ RightZAP1.1 WT E3 Ad5 WT 5.2 kb
ZK-002 pZAP1.2
AdenoZap1.2 ZK-003 pZAP1.1 RightZAP1.2 ⊿E3 (⊿2.7 kb) 7.9 kb
ZK-004 pZAP1.2
AdenoZap1.3 ZK-005 pZAP1.1 RightZAP1.3 Ad5/35 8.3 kb
ZK-006 pZAP1.2
AdenoZap1.4 ZK-007 pZAP1.1 RightZAP1.4 ⊿1.2 kb 9.6 kb
ZK-008 pZAP1.2
AdenoZap2.1 ZK-009 pZAP2.1 PacⅠ, SwaⅠ I-SecⅠ RightZAP2.1 WT E3 Ad5 WT 5.2 kb
ZK-010 pZAP2.2
AdenoZap2.2 ZK-011 pZAP2.1 RightZAP2.2 ⊿E3 (⊿2.7 kb) WT 7.9 kb
ZK-012 pZAP2.2

E3領域を欠失させた(⊿E3)製品ではより長い目的配列を組み込めますが、目的配列がヘルパー細胞の免疫系に影響を及ぼす場合は、E3領域を含む(WT E3)製品をご使用下さい。

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キット製品

[在庫・価格 :2024年07月18日 20時35分現在]

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Ad βgal DNA (5 transfections)
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Ad βgal DNA (5 transfections)

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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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