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播種せずに乾燥種子のまま形質転換体を選抜できるシロイヌナズナ用ベクター pFAST Vector

掲載日情報:2020/06/12 現在Webページ番号:4930

播種せずに乾燥種子のまま形質転換体を選抜できるシロイヌナズナ用ベクターです。形質転換された種子はGFPを発現するため,植物の成長を待つことなく乾燥種子のまま選抜可能です。

pFASTはGateway デスティネーションベクターです。
Gatewayシステムに関する特許はThermo Fisher Scientific社が保有しています。

播種せずに乾燥種子のまま形質転換体を選抜できるシロイヌナズナ用ベクター
播種せずに乾燥種子のまま形質転換体を選抜できるシロイヌナズナ用ベクター

上,右下,左下の順に転質転換第一世代,第二世代(分離比 約3:1),第三世代(ホモ系統)


pFASTベクターとその利点

FAST(Fluorescence-Accumulating Seed Technology)はベクター中のT-DNA領域に組み込まれたoil body膜上の種子特異的プロモーター(OLE1プロモーター)により制御されたOLE1-GFP融合タンパク質がT1種子中で発現し,T-DNAが組み込まれた種子をGFPの蛍光によって選択的に識別できるという画期的な技術です。

OLE1(Oleosins1)はシロイヌナズナの種子のoil body膜上に多く存在する構造タンパク質です。OLE1プロモーターを使用することにより,形質転換体を選抜するためのGFP蛍光は乾燥種子のみで観察することができます。従って,形質転換体の選抜には収穫したT1種子をそのまま蛍光顕微鏡で観察するだけなので,吸水や滅菌をする必要がありません。

OLE1プロモーターによって制御される形質転換体選抜用のGFP蛍光は乾燥種子特異的であり,他の器官では蛍光が見られません。また,吸水後はしばらく蛍光が見られますが,吸水後5日の幼植物体では蛍光は見られないため,吸水後5日以降の器官でレポーター遺伝子を使用した実験を行うことも可能です。

OLE1-GFP融合タンパク質の蛍光は,挿入位置が同じ同一系統においてコピー数を反映します。従って,T2種子ではホモ・ヘテロの識別ができるので,この時点でホモ個体の選抜も可能です。


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特長

  • 形質転換した種子で発現するGFPの蛍光により,種子のまま選抜できます。植物の成長を待つ必要がありません。
  • 抗生物質選択に比べて,ホモ個体を得るまでの期間が短縮できます。
  • GFP蛍光は乾燥種子特異的であり,他の器官では蛍光が見られません。
  • 吸水後5日目以降であれば,各器官でのレポーター遺伝子を使用した実験を行うことが可能です。
  • 薬剤選択の必要がなく,植物に薬剤の悪影響がありません。
  • 選択の際に,種子の吸水や滅菌操作の必要がありません。

pFASTベクターのベクターマップ

[メーカー:INP]
品 名蛍 光選抜試薬商品コード
E. coli植 物
pFAST-G01 Vector
プロモーターレスのバイナリーベクター。
大学・研究機関用GFPSpc / StrHygIN3-VEC3110μg
企業用10μg
pFAST-G02 Vector
CaMV35Sプロモーターによる遺伝子高発現バイナリーベクター。
大学・研究機関用GFPSpc / StrBarIN3-VEC3210μg
企業用10μg
pFAST-G03 Vector
RNAiコンストラクト作製用のバイナリーベクター。一度のLR反応でRNAi用のコンストラクトの作製が可能。
大学・研究機関用GFPSpc / StrHygIN3-VEC33
企業用
pFAST-G04 Vector
GFP-GUS融合タンパク質の発現を指標にしたプロモーター活性解析用のバイナリーベクター。
大学・研究機関用GFP / GUSSpc / StrKmIN3-VEC34
企業用

Bar:ビアラフォス,Hyg:ハイグロマイシン,Km:カナマイシン,Spc:スペクチノマイシン,Str:ストレプトマイシン

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植物用Gatewayデスティネーションベクターご購入時のご注意

本製品は商業目的の使用が禁じられています。ご購入に際して事前にライセンス同意書のご提出が必要です。同意書に関してはこちらをご覧下さい。
詳細は当社受託・特注品担当(下記参照)までお問い合わせ下さい。


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価格

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