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Loading dye入りのマスターミックス Taq DNA Polymerase 2× Master Mix RED

掲載日情報:2014/09/26 現在Webページ番号:46104

あらかじめloading dye(赤色)が添加されている2倍濃縮のマスターミックスです。PCR後にdyeを加えずにそのままアガロース電気泳動が行えます。

Taq DNA Polymerase 2× Master Mix REDの製品イメージ画像

特長

  • ルーチンのPCRに最適なTaqポリメラーゼのマスターミックスです。テンプレートDNAとプライマーとを混ぜるだけでPCRに使用できます。
  • PCRに必要な各種dNTP、塩類、Tween 20、および耐熱性DNAポリメラーゼ(Taq)が含まれています。
  • アガロースゲルなどに直接アプライして電気泳動ができます。
  • キットに含まれるAmpliqon Taq DNA polymerase*1は、増幅した断片の末端にアデニンのオーバーハングを形成するため、増幅断片はTA cloningに最適です。
  • 2倍濃縮の製品のため、テンプレートやプライマー濃度が薄い場合に有効です。
  • MgCl2の終濃度が1.5 mMと2 mMの製品があります。
  • 高い再現性と収率を誇り、dUTPの取り込みや最長5 kbまでの増幅に対応しています。
  • 反応系や分析系に影響しない赤色のloading dye*2と特殊な安定化剤が添加されており、試薬調製の手間を大幅に省けるため、時間を節約でき、コンタミネーションリスクも軽減します。
  • 反応液が着色しているため、ピペッティングの視認性が高く、泳動の進行状況が目視確認*3できます。

*1 5 '→3' DNAポリメラーゼと5'→3エキソヌクレアーゼ活性を有しますが、3'-5 'エキソヌクレアーゼ活性と校正能力を欠いています。5'-3 'エキソヌクレアーゼ活性はPCR産物に3'dAオーバーハングを残すため、そのままTAクローニングを行うことが可能です。
*2 Loading dyeや安定化剤はPCRなどの下流の反応に干渉しませんが、必要に応じて、スピンカラム精製などの方法により、PCR産物から除去することができます。
*3 アガロースゲル(0.5~1.5%)の場合、dye frontは 300~1,000 bp相当の箇所に泳動されます。

組成

  • Tris-HCl pH 8.5, (NH4)2SO4, 3 or 4 mM MgCl2, 0.2% Tween 20
  • 0.4 mM of each dNTP
  • 0.2 units/μl Ampliqon Taq DNA polymerase
  • Inert red dye and stabilizer

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実験のイメージ

ゲルローディングのイメージ画像

増幅終了後、PCR産物をアガロースゲルなどに直接アプライできます。赤く着色されているので、ピペッティングとゲルローディングを目視しながら操作できます。赤い色素の先端は、0.5~1.5%アガロースゲルの場合300~1,000 bp相当の箇所で泳動されます。

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使用例

実験例1

他社のTaq DNAポリメラーゼマスターミックスとの比較・評価結果画像

Ampliqon Taq DNA Polymerase Master Mix REDを、他の2社のTaq DNAポリメラーゼマスターミックスと比較・評価した。長さの異なる4つDNAターゲット:PAH(203 bp)、Q8(727 bp)、CFTR(613 bp)、BAIP(788 bp)を用いて実験を行った。Ampliqon Taq DNA Polymerase Master Mix RED(AMPLICON)は、他社製品と比較して同等あるいはそれ以上のパフォーマンスを示した。それぞれの試薬は、メーカーのプロトコルに従い使用し、各レーンの左端にマーカーを置いた。

実験例2

 loading dyeとstabilizerがPCRの性能を妨害しない確認結果画像

赤色のloading dyeおよびstabilizerがPCRの結果に影響を及ぼさないことの確認を行った。2つの異なるDNAターゲット:PAH(203 bp)とBAIP(788 bp)を用い、Taq Master Mix REDを使用して2回増幅し、アガロースゲルで電気泳動を行った後に視覚化した。203 bpでも 88 bpでも、バンドの変化は認められなかった。


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Taq 2× Master Mix RED, 1.5 mM MgCl2

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