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組換え体タンパク質発現・精製システム Strep - tag / Strep - Tactin System pASK-IBA Vector

掲載日情報:2010/10/12 現在Webページ番号:4545

ストレプトアビジンに結合する 8 アミノ酸残基から成るタグ(Strep - tag II)を融合させた組換え体タンパク質を E.coli 内で発現させるためのベクターです。組換え体タンパク質は、Strep - tag II とストレプトアビジン変異体タンパク質(Strep - Tactin)の可逆的な結合を利用して精製できます。様々なタイプの発現ベクター、精製カラム、試薬を組み合わせることにより、最適な精製結果が得られます。
本システムを使用して、金属配位タンパク質、膜タンパク質、分子量の大きなタンパク質、タンパク質複合体なども精製できます。

特長

  • Strep - tag II(Trp - Ser - His - Pro - Gln - Phe - Glu - Lys)は分子量が小さく、また生物学的に不活性なため、組換え体タンパク質の生理活性を妨げずに精製できます。また、精製したタンパク質のリフォールディングは必要ありません。
  • Strep - tag II の Strep - Tactin への結合力は通常のストレプトアビジンよりも 100 倍高いため、穏和なバッファー条件下でワンステップで精製できます。
  • pASK - IBA Vector シリーズは、tet プロモーターにより発現が厳密に制御されています。培地や E.coli 株の種類によらず使用できます。また、 E.coli に対して細胞毒性を示すタンパク質の発現にも有用です。
  • ベクター中のマルチクローニング部位(MCS)の両末端に、II S クラスの制限酵素認識配列(Eco31I、BsaI)を含んでおり、挿入配列を正確な向きにクローニングするのに有用です。
  • Strep - tag II は小さいので切断する必要はありませんが、プロテアーゼ切断配列を有するベクターを使用することで、切断・除去できます。
  • OmpA シグナル配列を有するベクターの使用により、ペリプラズムへ可溶性タンパク質として分泌させることも可能です。
  • Starter Kit には Strep - tag II 融合タンパク質を精製するためのカラムと試薬が含まれています。

pASK - IBA Vector にクローニングするための PCR プライマー設計ソフト( 無料)を IBA 社ホームページからダウンロードできます。

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操作法概略(精製)

Strep- tag / Strep - Tactin System pASK-IBA Vector操作法概略(精製)
  1. Strep - Tactin 固相化ゲルカラムに E.coli ライセートをアプライする。
  2. Washing buffer により、不純物(E.coli 由来のタンパク質など)を除去する。
  3. Desthiobiotin を加えたバッファーを添加して、組換え体タンパク質を溶出する。
  4. HABA を含む黄色溶液を添加すると Desthiobiotin がカラムから溶出し、再生が完了する(ゲルが赤く変色すればカラムが再利用可能)。

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発現ベクター

■ ペリプラズム発現(分泌発現)用ベクター(アンピシリン耐性)

商品コード ベクター名 Strep - tag の位置 6 × His-tag の位置 タグの除去 タグ除去に用いる酵素 発現形式 薬剤耐性遺伝子
2-1301-000 pASK-IBA2 C 末端 × 分泌発現 Amp
2-1303-000 pASK-IBA4 N 末端 ×
2-1305-000 pASK-IBA6 N 末端 Factor Ⅹ a
2-1311-000 pASK-IBA12 N 末端 Thrombin
2-1313-000 pASK-IBA14 N 末端 Enterokinase
2-1315-000 pASK-IBA16 N 末端 TEV protease
2-1332-000 pASK-IBA32 C 末端 ×
2-1344-000 pASK-IBA44 N 末端 C 末端 ×


■ 細胞質発現用ベクター(アンピシリン耐性)

商品コード ベクター名 Strep - tag の位置 6 × His-tag の位置 タグの除去 タグ除去に用いる酵素 発現形式 薬剤耐性遺伝子
2-1402-000 pASK-IBA3plus C 末端 × 細胞質発現 Amp
2-1404-000 pASK-IBA5plus N 末端 ×
2-1406-000 pASK-IBA7plus N 末端 Factor Ⅹ a
2-1412-000 pASK-IBA13plus N 末端 Thrombin
2-1414-000 pASK-IBA15plus N 末端 Enterokinase
2-1416-000 pASK-IBA17plus N 末端 TEV protease
2-1433-000 pASK-IBA33plus C 末端 ×
2-1435-000 pASK-IBA35plus N 末端 ×
2-1437-000 pASK-IBA37plus N 末端 Factor Ⅹ a
2-1443-000 pASK-IBA43plus C 末端 N 末端 ×
2-1445-000 pASK-IBA45plus N 末端 C 末端 ×
2-1463-100 pASK-IBA63a-plus C 末端 ×
2-1463-200 pASK-IBA63b-plus C 末端 ×
2-1463-300 pASK-IBA63c-plus C 末端 ×
2-1465-200 pASK-IBA65b-plus N 末端 ×

■ クロラムフェニコール耐性ベクター

商品コード ベクター名 Strep - tag の位置 6 × His-tag の位置 タグの除去 タグ除去に用いる酵素 発現形式 薬剤耐性遺伝子
2-1321-000 pASK-IBA2C C 末端 × 分泌発現 CAT
2-1322-000 pASK-IBA3C C 末端 × 細胞質発現
2-1323-000 pASK-IBA4C N 末端 × 分泌発現
2-1324-000 pASK-IBA5C N 末端 × 細胞質発現
2-1325-000 pASK-IBA6C N 末端 Factor Ⅹ a 分泌発現
2-1326-000 pASK-IBA7C N 末端 Factor Ⅹ a 細胞質発現


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