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mRNA の3' UTR とmiRNA の相互作用をスクリーニングするキット miR-Selection 3' UTR Target Selection Kit

掲載日情報:2010/09/13 現在Webページ番号:4505

mRNA の 3' UTR(非翻訳領域)と,miRNA の相互作用を簡便にスクリーニングするシステムです。細胞の生死と,ルシフェラーゼ発現の 2 種類のレポーターを用いています。

特長

  • mRNA の 3' UTR と miRNA の相互作用の有無を,細胞の生死で簡便かつ確実にスクリーニングできます。また,スクリーニングした組み合わせについて,相互作用の強度をルシフェラーゼ(FIRE)の発現で定量できます。
  • miRNA 発現レンチウイルスベクター は,System Biosciences 社の発現ベクター,配列組み込み済みベクター(Lentivector-BasedMicroRNA Precursor Construct), 発現ベクターのプール(MicroRNA Precursor Pooled Library)などを使用できます。
  • 別売品で,mRNA の3' UTR をあらかじめ組み込んであるレンチウイルスベクターもあります(下記参照)。

miR-Selection 3' UTR Target Selection Kit

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測定原理

miR-Selection 3' UTR Target Selection Kit

左:細胞中で Cytotoxic Sensor(Ctx)が発現していると,培地中の Ctx drug により細胞が死滅する。
右:挿入した mRNA の3' UTR と miRNA に相互作用があると,Ctx およびルシフェラーゼ(FIRE)の発現が抑制される。

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操作法概略

  1. 目的の mRNA の 3' UTR を,キットに含まれる miR-Selection Fire-Ctx Lentivector に挿入し,レンチウイルスパッケージングを行う。
  2. 3' UTR を挿入したベクターと未挿入のベクターそれぞれを,HEK 293 細胞 に導入する。ベクター中の EF1-Puro カセットを用い,安定発現細胞株を樹立する。
  3. 目的の miRNA を組み込んだレンチウイルスベクター を,樹立した細胞株に導入する。
  4. 培地に Ctx drug を添加して 4 日間培養する。mRNA の3' UTR と miRNA の相互作用が無い場合,細胞は死滅する。
  5. 生存した細胞について,ルシフェラーゼの発現を定量する。

キットには,レンチウイルスパッケージング試薬,miRNA 発現レンチウイルスベクター,HEK 293 細胞などは含まれていません。詳細は製品添付のマニュアルをご確認下さい。

miR-Selection 3' UTR Target Selection Kit
miR-Selection 3' UTR Target Selection Kit

c-Myc の 3' UTR および UTR なし(コントロール)を miR-Selection Fire-Ctx Lentivector により HEK 293 細胞に導入して,安定発現細胞株を樹立した。それぞれの細胞に miR-145 発現レンチウイルスを導入した後,培地に Ctx drug を添加した。
細胞の生存により,c-Myc の 3' UTR と miR-145 に相互作用があることが分かった。ルシフェラーゼアッセイでは,発現量が 63% 減少している。

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キット内容

  • miR-Selection Fire-Ctx lentivector plasmid (uncut)
  • 1000 × Ctx drug powder
  • Ctx resuspension buffer

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価格

[在庫・価格 :2021年11月30日 08時51分現在]

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MicroRNA Target Selection Kit (miR-Selection Lentivector+Ctx Drug)

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キット別売品

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Ctx Drug for MicroRNA Target Selection System, 1000×
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Ctx Drug for MicroRNA Target Selection System, 1000×

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3' UTR 組み込み済みレンチウイルスベクター

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miR-Selection Lentivector with HDAC1 3'UTR Construct

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  • 商品コード:MS428A-1
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(テクニカルサポート 試薬担当)

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