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ご要望に適した発現系を選択することができます 組換えタンパク質の受託発現・精製サービス

掲載日情報：2018/09/12 現在Webページ番号：4429

プロテインエクスプレス /
（株）プロテイン・エクスプレス
[メーカー略称：PEX]

組換えタンパク質の受託発現・精製サービスです。組換えタンパク質の発現系には、それぞれ一長一短があり、1種類の発現系のみでは、あらゆるタンパク質を産生することは困難です。（株）プロテイン・エクスプレスでは、基盤技術のブレビバチルス菌宿主ベクター系をはじめとして、多岐にわたる発現系（大腸菌、無細胞翻訳系など）を取りそろえており、お客様のご要望に適した発現系を選択することができます。精製工程においても、アフィニティ精製だけでなく、イオン交換カラム精製やサイズ排除クロマトグラフィなどにも対応いたします。
コンストラクトの設計から産生および精製までのトータルコンサルティングを行い、お客様のご要望に最大限対応できる柔軟なサービスを提供いたします。

※ 本製品は研究用です。研究用以外には使用できません。

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ブレビバチルス菌とは

ブレビバチルス菌（Brevibacillus choshinensis HPD31）は名古屋大学 鵜高教授らにより見いだされたタンパク質を菌体外に高分泌生産可能な宿主です1。グラム陽性菌のために、エンドトキシンを持たないこと、菌体外プロテアーゼ活性が低いこと、培養の容易さ、安全性（GILSP掲載宿主）の観点から組換えタンパク質の生産に優れた宿主です。
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生産例

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参考文献

  1. Takagi, H., et al., Int. J. Syst. Bacteriol., 43(2), 221～231(1993). [PMID:8494737]
  2. Asano, R., et al., MAbs., 10(6), 854～863(2018). [PMID:29985753]
  3. Kuwahara, A., et al., Bioengineered., 14(1), 2259093(2023). [PMID:37732741]


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クローニング、発現ベクター構築

概要

  • ご希望の遺伝子をベクターに組み込み、提供いたします。
  • ベクター、塩基配列確認データを納品いたします。
  • ご希望の遺伝子をお持ちで無い場合も人工遺伝子合成から対応いたします。

参考価格

納期 価格
クローニング、発現ベクター構築 4週間～ \110,000～

※ 価格は作業内容により変動します。詳細はお問い合わせ下さい。

オプション

  • 両鎖塩基配列確認
  • プラスミド大量調製
  • 低エンドトキシンプラスミド調製
  • 変異導入

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組換えタンパク質発現受託サービス

対応可能な発現系

発現系 特長 発現量 初期費用 後期費用 糖鎖修飾 S-S結合＊
ブレビバチルス菌1, 2, 3
（Brevibacillus choshinensis）
  • タンパク質を培地中に分泌することが可能。
  • 分泌タンパク質を正しい構造で産生できる。
  • 菌体外プロテアーゼが少ないので、培養中の分解が生じない。
  • グラム陽性菌のため、エンドトキシンがない。
 ○ ○ ◎ × ○
無細胞翻訳系4、5
（小麦胚芽、昆虫細胞）
  • 毒性を持つなど細胞内で生産できないタンパク質の生産が可能。
  • 界面活性剤などの各種添加剤存在下での生産が可能。
  • 直鎖の鋳型を使用できるので、ハイスループットでの発現確認を行える。
 △ ◎ △ × △
大腸菌
（E. coli）
  • 多様な宿主・ベクター系が市販されており、さまざまなターゲットに適応できる。
  • 高発現のため安価に産生が可能。
  • 封入体を形成することがある。
 ◎ ◎ ◎ × ×

＊ S-S 結合はリフォールディングで対応できる場合があります。
※ 中等度好熱性であるジオバチルス菌を用いたタンパク質発現も承ります。別途ご相談下さい。

参考価格

納期 価格
発現トライアル 2週間～ \90,000～
大腸菌培養（100 ml） 2週間～ \110,000～
大腸菌培養（1,200 ml） 2週間～ \130,000～
大腸菌培養（4,800 ml） 3週間～ \160,000～
大腸菌培養（20 L） 4週間～ お問い合わせ下さい

※ 価格は作業内容により変動します。詳細はお問い合わせ下さい。
※ ジャーファーメンターを用いた培養により、培養中のpHなどの制御や流加培養にも対応いたします。
※ 受託培養のみの試験も対応可能です。

参考文献

  1. Tojo, H., et al., J. Biotechnol., 33(1), 55～62(1994). [PMID:7764724]
  2. Takimura, Y., et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 61(11), 1858～1861(1997). [PMID:9404065]
  3. Yashiro, K., et al., Protein Expr. Purif., 23(1), 113～120(2001). [PMID:11570852]
  4. Seki, E., et al., Anal. Biochem., 377(2), 156～161(2008). [PMID:18375196]
  5. Aoki, M., et al., Protein Expr. Purif., 68(2), 128～136(2009). [PMID:19664715]

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組換えタンパク質精製受託サービス

概要

各種カラムによる精製を行います。

対応可能な精製カラムの例

  • アフィニティカラム（Niキレート、グルタチオン、プロテインA）
  • イオン交換カラム
  • ゲルろ過カラム

参考価格

納期 価格
Niキレートカラム精製（予備検討） 4週間～ \160,000～
Niキレートカラム精製 4週間～ \190,000～

※ 価格は作業内容により変動します。詳細はお問い合わせ下さい。



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技術情報

ブレビバチルス菌によるヘテロダイマーの作製

ブレビバチルス菌を用いて、CH1、CLドメインを介したヘテロダイマーの分泌生産を行いました。二重特異性抗体を容易に作製できる生産系であるといえます。

低分子型抗体であるFab、minibody、scFv-VHH、scFv-VHH2（図1）について、ブレビバチルス菌での生産を行いました。 その際、CH1、CLそれぞれに異なるエピトープタグをつけておき、二段階のアフィニティ精製を行うことで、ヘテロダイマーのみを効率的に回収することができます。

scFv-VHH、scFv-VHH2の精製後のSDS-PAGE（非還元条件、還元条件）の結果（図2）を示しますが、還元条件により、CH1、CLを介した二量体構造が解消され、各モノマーを確認することができます。 つまり、ブレビバチルス菌での生産においてもCH1、CLがジスルフィド結合を介したヘテロダイマーを形成することが分かります。 また、抗原認識部位であるscFv、VHH領域について、その抗原結合活性を保持していることを確認しています。 近年、注目されている二重特異性抗体（bispecific antibody）に対して、本生産系は有効な生産系の1つであると考えられます。

ブレビバチルス菌で生産可能なヘテロダイマー・二重特異性（バイスペシフィック）抗体
図1. ブレビバチルス菌で生産可能なヘテロダイマー・二重特異性（バイスペシフィック）抗体
画像概略
図2. scFv-VHH、scFv-VHH2の精製後のSDS-PAGE（非還元条件、還元条件）

ブレビバチルス菌によるビオチン標識タンパク質の生産

ビオチン‐アビジン（ストレプトアビジン）結合は特異的かつ強力な結合であり、この相互作用はタンパク質や核酸のさまざまな検出法および精製法に利用されています。ビオチンは低分子であり、標識タンパク質への影響が少ないことから、ビオチン標識タンパク質が多く用いられています。 今回、ブレビバチルス生産系でのビオチン標識タンパク質の生産を試みました。

ビオチンリガーゼ（BirA）遺伝子とビオチン化サイトをもったタンパク質遺伝子（Target X）をタンデムに導入した共発現プラスミドを構築しました。ビオチンリガーゼはビオチン化サイトを特異的に認識し、部位特異的にビオチン標識をすることができます。発現プラスミドをブレビバチルスに導入し、ビオチン含有培地で培養を行いました。培養上清にTarget Xタンパク質が分泌生産され、ビオチン標識されていることが確認されました（Lane 1）。培養上清をストレプトアビジンビーズに添加し素通り画分（Lane 2）を分析したところ、非標識のTarget Xタンパク質が検出されないことより、標識効率は高いものと考えられます。

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ご注文方法／価格

ご注文方法、お見積りなどの詳細は、当社受託・特注品担当（下記参照）までお問い合わせ下さい。

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お問い合わせ先

（受託・特注品業務担当）

jutaku@funakoshi.co.jp

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。

タンパク質発現