フローサイトメトリー用蛍光ミクロスフェアのセット製品 QuantumPlex Kitシリーズ

• 製品ラインナップ
• 特長
• ビーズ表面修飾の違いによる調製と試験方法
• データ解析例
• 使用文献
• 関連製品 Quantum MESF / Simply Cellular Microspheres

製品ラインナップ

ビーズの特性			プレーン			磁性ビーズ
品名			QuantiPlex		QuantiPlex SP	QuantiPlex M	QuantiPlex M SP
蛍光ビーズの種類（population）			5	2×5	1	5	1
表面修飾	ビーズ濃度 （ビーズ/ml）	平均粒径 （μm）	商品コード
カルボキシル基 （-COOH）	1×108	4.4	235	239	234	－	－
		5.5	238		237	－	－
		～6	－	－	－	250	251
ストレプトアビジン	1×106	4.4	215	219	214	－	－
		5.5	218		217	－	－
		～6	－	－	－	252	253

包装	1 ml	5 ml	10 ml
商品コード	XXXA	XXXB	XXXC

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特長

• QuantiPlex SP（単色蛍光ビーズ）とQuantiPlex M SP（単色蛍光磁性ビーズ）は、シンプレックスフローサイトメトリーアッセイ、またはマルチプレックスフォーマット移行前の結合化学およびアッセイパラメーターの最適化に有用です。
• QuantumPlexビーズに1種類の抗体を結合させることで、1つの試料で複数の分析物を測定できます。
• QuantumPlexビーズに異なる特異性を持つ複数の抗体を結合させることで、複数の試料を一度にスクリーニングできます。
• QuantumPlexビーズに抗原を結合させることで、特定の抗体の存在を調べることができます。

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ビーズ表面修飾の違いによる調製と試験方法

カルボキシル基（-COOH）

ビーズの調製方法

1. 使用前に各ボトルをボルテックスし、ビーズを均一に懸濁する。
2. リガンドで標識する10μl^*1の溶液を直ちに取り出す。
3. ビーズを活性化バッファーで2回洗浄し、同じバッファーに再懸濁する。
4. 攪拌しながらWSCを追加する。
5. 攪拌しながら、室温で15分間反応させる。
6. 結合するリガンドを溶解する（計算した単層の1～10倍過剰量を使用する）。 [TechNote 205 Covalent Couplingを参照]
7. ミクロスフェア溶液とリガンド溶液を混合し、一定に攪拌しながら室温で2～4時間反応させる。
8. 洗浄後、quenting solutionに再懸濁し、30分間穏やかに混合する。
9. 洗浄後、元の濃度で保存バッファーに再懸濁する。
10. 使用まで2～8℃で保管する。

測定方法

1. 調製したビーズを試料100μlに加え、30分間インキュベートする^*2。
2. ビーズを洗浄後、非特異的に結合した分析物を除去する。洗浄操作を繰り返す。





3. 蛍光標識抗体20μlをビーズに加え、30分間インキュベートする。
4. ビーズを洗浄し、非特異的に結合した抗体を除去する。洗浄操作を繰り返す。
5. すべてのビーズを1つのチューブにまとめ、フローサイトメーターでデータを収集する。

ストレプトアビジン

ビーズの調製方法

1. 使用前に各ボトルをボルテックスし、ビーズを均一に懸濁する。
2. リガンドで標識する10μl^*3の溶液を直ちに取り出す。
3. プロトコル^*4に従って、過剰のビオチン標識抗原または抗体を使用して抗原または抗体をビーズに結合させる。
4. ビーズを洗浄後、未結合の抗体をすべて除去する。
5. ビーズを約100μlのバッファーに再懸濁する。

測定方法

1. 調製したビーズを試料100μlに加えて30分間インキュベートする^*5。
2. ビーズを洗浄後、非特異的に結合した分析物を除去する。洗浄操作を繰り返す。





3. 蛍光標識抗体20μlをビーズに加え、30分間インキュベートする。
4. ビーズを洗浄し、非特異的に結合した抗体を除去する。洗浄操作を繰り返す。
5. フローサイトメーターでデータを収集する。

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データ解析例

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使用文献

QuantumPlex

• Moss, DM., et al.,
  "Detection of cryptosporidium antibodies in sera and oral fluids using multiplex bead assay.", J. Parasitol., 90(2), 397～404 (2004). [QuantumPlex COOH] [PMID：15165066]
• Yu, J. et al.,
  "A rapid pneumococcal serotyping system based on monoclonal antibodies and PCR.", J. Med. Microbiol, 57(Pt 2), 171～178 (2008). [QuantumPlex COOH] [PMID：18201982]
• Kellar, KL. and Iannone, M.,
  "Multiplexed microsphere-based flow cytometric assays.", Exp. Hematol., V30, 11, 1227～1237 (2002).（）
• Hale, M., et al.,
  "Homology-Directed Recombination for Enhanced Engineering of Chimeric Antigen Receptor T Cells.", Mol. Ther. Methods Clin. Dev., Vol 4, 192～203 (2017).（）
• Kellar, KL., et al.,
  "Multiplexed microsphere-based flow cytometric immunoassays.", Curr. Protoc. Cytom., Feb;Chapter 13, Unit13.1 (2006). [PMID：18770835]
• Dolgushin, SA., et al.,
  "Preliminary Tests of Multiplex Immunoassay for Detection of TORCH Infections in Human Blood Serum Using Flow Cytometry.", Biomed. Eng., Vol 49, 2, 85～89 (2015).（）
• Spiro, A., et al.,
  "A Bead-Based Method for Multiplexed Identification and Quantitation of DNA Sequences Using Flow Cytometry.", Appl. Environ. Microbiol., Vol 66(10), p4258～4265 (2000).（）

QuantumPlex M

• Yang, S., et al.,
  "Micro flow cytometry utilizing a magnetic bead-based immunoassay for rapid virus detection." Biosens. Bioelectron., Vol 24, 4, 855～862 (QuantumPlex M Streptavidin) (2008).（）
• Joslin, J., et al.,
  "A Fully Automated High-Throughput Flow Cytometry Screening System Enabling Phenotypic Drug Discovery.", 05/29 SLAS DISC, Adv. Life. Sci. R&D (QuantumPlex M COOH) (2018).（）

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関連製品 Quantum MESF / Simply Cellular Microspheres

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