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簡便に高純度なタンパク質の精製ができるシステム! Dock Purification System

掲載日情報:2009/08/03 現在Webページ番号:3724

シスメックス /
シスメックス株式会社 タンパク質開発センター

簡便に組換え体タンパク質を高純度精製できる,画期的な精製システムです。Ca2+ の存在下で特異的に結合する Dockerin(Dock tag として応用)と Cohesin(Dock Catch Resin に使用)のタンパク質相互作用を利用しています。

特長

  • Dock tag は 60 アミノ酸残基の大きさのタグ分子で,Dock tag 融合タンパク質は従来のタグよりも活性を有する可溶性タンパク質として発現しやすくなっています。
  • Dock tag と Dock Catch Resin の Ca2+ の存在下でのアフィニティは Kd = 1 × 10-9 と高く,目的タンパク質の高純度精製が可能です。
  • 溶出バッファーは EGTA などのキレート剤を含む温和な条件のため,目的タンパク質溶出後そのまま次の実験に使用可能です。
  • 精製・溶出の際に様々な添加剤や界面活性剤が利用可能なため,リフォールディングや膜タンパク質の精製などにも対応できます。
  • 担体(Dock Catch Resin)の最大結合能:> 0.6 mg Dock tag 融合タンパク質/ ml resin

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精製例

C 末端に Dock tag または従来のタグを融合させたタンパク質を E. coli で発現し,上清をそれぞれのタグに応じた方法で精製した。


■ 発現結果(E. coli



上図:ウエスタンブロット(目的タンパク質に対する抗体で検出)
下図:CBB染色
lane1:菌体破砕液 lane2 :破砕液上清 lane3:破砕液沈殿
Dock tag 融合タンパク質は可溶性タンパク質として発現していることが分かる。


■ 精製結果


CBB 染色
lane4:精製前のライセート
lane5:精製時のフロースルー画分
lane6:溶出画分

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キット内容

  • pDOV1 vector
  • Dock catch resin
  • pDOV2 vector
  • Anti-Dock antibody

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操作法概略

Dock tag を融合させた目的タンパク質を E. coli やバキュロウイルスなどの系で発現し,そのライセート中のタンパク質をCa2+ 存在下で Dock Catch Resin に結合させる。Resin を洗浄後,キレート剤(EGTA など)を含む溶出バッファーで,Dock tag 融合タンパク質のみを回収する。

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E. coli 発現用 Dock tag 融合ベクター

E. coli 発現用 Dock tag 融合ベクター

Dock tag 配列が N 末端側(pDOV1 vector)または C 末端側(pDOV2 vector)に挿入された 2 種類のベクターがあります。Dock tag 配列とマルチクローニングサイトの間には,プロテアーゼ認識部位(Thrombin)が挿入されています。



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価格

[在庫・価格 :2020年06月04日 23時08分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数
Dock Purification Kit, for E.coli
中止
この製品の取扱は終了しました 0
説明文
法規制等
保存条件 法規備考
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Dock Purification Kit, for E.coli

文献数:0

  • 商品コード:KDK001
  • メーカー:KRU
  • 包装:1kit
  • この製品の取扱は終了しました

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■キット別売品

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詳細 商品名
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納期 文献数
Anti-Dock, Mouse-Mono
中止
この製品の取扱は終了しました 0
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抗原種 免疫動物 クラス 標識 Unlabeled
交差性 適用
クロナリティ フォーマット 性状 吸収処理
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[在庫・価格 :2020年06月04日 23時08分現在]

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Anti-Dock, Mouse-Mono

文献数:0

  • 商品コード:KAD006
  • メーカー:KRU
  • 包装:200μg
  • この製品の取扱は終了しました

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抗原種 免疫動物
交差性 適用
標識 Unlabeled 性状
吸収処理 クラス
クロナリティ フォーマット
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Dock Catch Resin

文献数:0

  • 商品コード:KDC004
  • メーカー:KRU
  • 包装:1ml
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Dock Catch Resin

文献数:0

  • 商品コード:KDC005
  • メーカー:KRU
  • 包装:5ml
  • この製品の取扱は終了しました

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pDOV1, Dock Expression Vector

文献数:0

  • 商品コード:KPD002
  • メーカー:KRU
  • 包装:10μg
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pDOV2, Dock Expression Vector

文献数:0

  • 商品コード:KPD003
  • メーカー:KRU
  • 包装:10μg
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

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