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GFP融合タンパク質を簡単に単離できるキット Chromotek GFP-Trap Kit

掲載日情報:2019/04/15 現在Webページ番号:3711

Chromotek社のGFP結合ビーズを用いたアフィニティ精製によって,細胞からGFP融合タンパク質を単離できるキットです。GFPと特異的に結合するラクダ科動物抗体由来タンパク質「GFP-Trap」をアガロースビーズに結合させた製品(GFP-Trap-A Kit)と磁性アガロースビーズに結合させた製品(Magnetic GFP-Trap-MA Kit)があります。


MEMO

ラクダ科動物抗体とは


通常の抗体は,それぞれ2つの重鎖と軽鎖からなる,大きな複合体分子(~150 kDa)です。しかし,この複合体構造のばらつきにより抗体の使用が制限されたり,阻害される場合があります。

一方,ラクダ科の動物が産生する抗体は軽鎖を欠き,重鎖のみで構成されています。そのため,1つの可変領域(VHH)のみで抗原を認識することができ,そのサイズはわずか~13 kDaです。

GFP融合タンパク質を簡単に単離できるキット GFP-Trap Kit

特長

  • 従来の免疫沈降による分離法で見られるような抗体H鎖・L鎖の混入や非特異的結合などが起こらず,目的のタンパク質を特異的に単離することができます。
  • 抗体による免疫沈降法よりも,はるかに高収率です。
  • 30分程度の反応で,GFP融合タンパク質をビーズに結合させることができます。
  • クロマチン免疫沈降法(ChIP:Chromatin Immunoprecipitation)をはじめとした,様々な用途に使用できます(下記「使用例」参照)。
  • 目的のGFP融合タンパク質と相互作用するタンパク質の探索などにも有用です。
  • 粒径:約80μm(GFP-Trap-A),約40μm(Magnetic agarose GFP-Trap-MA)
GFP融合タンパク質を簡単に単離できるキット GFP-Trap Kit

GFP発現細胞から抽出したタンパク質画分を,GFP-Trap-A Kitまたは従来の抗GFP抗体による免疫沈降で精製した後,SDS-PAGEおよびウエスタンブロッティングを行った。GFP-Trap-A Kitにより単離した画分は,非特異的産物が少なく,GFPを高効率かつ特異的に単離していることがわかる。
I:精製前のライセート
FT:精製時のフロースルー画分
B:精製画分
hc:抗体H鎖
lc:抗体L鎖

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本製品で精製できるGFPおよびGFP改変タンパク質

適合
wtGFP, eGFP, YFP, eYFP, CFP, BFP

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使用文献

  1. Webby, C. J., et al., Science, 325 (5936), 90~93 (2009).
  2. Rogowski, K., et al., Cell, 137 (6), 1076~1087 (2009).

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使用例

GFP融合タンパク質のクロマチン免疫沈降法(ChIP Assay)

GFP融合タンパク質を簡単に単離できるキット GFP-Trap Kit GFP融合タンパク質を簡単に単離できるキット GFP-Trap Kit

1. DNA-GFP標識タンパク質複合体とGFP-Trap Aビーズを混合し,インキュベートする。

2. 遠心によりGFP-Trap Aに結合したDNA-GFP標識タンパク質複合体を単離し,回収する。

3. DNAを精製し,PCRにより解析する。

IGF-binding protein 1(IGFBP1)およびInterleukin 6(IL6)遺伝子のプロモーター領域に結合するタンパク質HMGA1a(High motility group protein A1a)について,GFP-Trap Aを用いたChIPアッセイを行った。

試料として,GFP融合HMGA1a タンパク質(HMGA1a-GFP)を恒常発現するC2C12細胞を用いた。細胞にホルムアルデヒドを添加し,DNAに結合しているタンパク質を架橋した後,超音波で断片化した。調製した核タンパク質試料(500μg)にGFP-Trap A(5μg),抗GFP抗体(10μg),マウスIgG1アイソタイプコントロール(10μg)をそれぞれ加え免疫沈降を行った。回収したDNA-HMGA1a-GFP複合体からDNAを精製し,IGFBP1およびIL6のプロモーター領域と下流領域(distal region 1, 2)のプライマーペアを用いてリアルタイムPCRで解析した。グラフの縦軸はマウスIgG1アイソタイプコントロールを使用した結果に対する相対量を示している。

GFP-Trap Aを使用したChIPアッセイでは,抗GFP抗体を使用した場合よりも,特異的で高収率な結果が得られることがわかる。

GFP融合酵素の精製と活性測定

GFP融合タンパク質を簡単に単離できるキット GFP-Trap Kit
GFP融合タンパク質を簡単に単離できるキット GFP-Trap Kit
  1. GFP融合酵素を含む細胞ライセートとGFP-Trap Aビーズを混合する。
  2. 遠心によりGFP融合酵素とGFP-Trap Aビーズの複合体を単離し,回収する。
  3. 酵素活性を測定する。

DNA methyl transferase 1(Dnmt1)は哺乳動物細胞で最も多く含まれるDNAメチル基転移酵素である。GFP-Trap Aを用いて,細胞ライセートに含まれるGFP融合Dnmt1を1ステップで精製し,その酵素活性を測定した。

試料として,GFP融合Dnmt1(GFP-Dnmt1)および不活性型の変異体であるGFP融合Dnmt1(GFP-Dnmt1(P1229W))を恒常発現するHEK293T細胞を使用した。それぞれの細胞ライセートにGFP-Trap Aビーズを加えて混合し,免疫沈降を行った。回収したGFP-Dnmt1とGFP-Trap Aビーズ複合体に[3H]標識アデノシルメチオニンを含むメチル化酵素の活性測定試薬を添加し,酵素活性を測定した。

上図は回収したGFP-Dnmt1のSDS-PAGE像。下図は酵素活性の測定結果。ポジティブコントロールとして組換え体Dnmt1を使用した。「control」は酵素を加えていないネガティブコントロールを示す。

GFP-Trap Aにより,GFP-Dnmt1だけでなく不活性型の変異体GFP-Dnmt1(P1229W)も単離・回収できた。また,GFP-Trap Aビーズに結合した状態でも酵素活性の測定が可能であった。


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キット内容

商品コードをクリックすると価格表をご覧いただけます。

品名 iST-GFP Trap Kit GFP-Trap A Kit GFP-Trap MA Kit*
商品コード gtak-iST-8 gtak-20 gtmak-20
キット
内容
iST Kit
GFP-Trap A
GFP-Trap MA
Lysis buffer
Elution buffer
Wash buffer

別途,マグネットプレートが必要です。

[在庫・価格 :2019年06月24日 23時07分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数 リスト
GFP-Trap A Kit (20 reactions)
10日程度  0 追加
説明文
GFP融合タンパク質の単離・精製キット。担体:アガロースビーズ
法規制等
保存条件 4℃,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ

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10日程度  0 追加
説明文
GFP融合タンパク質の単離・精製キット。担体:磁性アガロースビーズ
法規制等
保存条件 4℃,凍結禁止 法規備考
掲載カタログ

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[在庫・価格 :2019年06月24日 23時07分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。

GFP-Trap A Kit (20 reactions)

文献数:0

  • 商品コード:gtak-20
  • メーカー:CHT
  • 包装:1kit
  • 価格:¥105,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:10日程度 
  • 法規制等:

説明文 GFP融合タンパク質の単離・精製キット。担体:アガロースビーズ
法規制等
保存条件 4℃,凍結禁止 法規備考
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GFP-Trap MA Kit (20 reactions)

文献数:0

  • 商品コード:gtmak-20
  • メーカー:CHT
  • 包装:1kit
  • 価格:¥105,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:10日程度 
  • 法規制等:

説明文 GFP融合タンパク質の単離・精製キット。担体:磁性アガロースビーズ
法規制等
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GFP結合ビーズ別売品

[在庫・価格 :2019年06月24日 23時07分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数 リスト
GFP-Trap-A
10日程度  0 追加
説明文
GFP融合タンパク質の単離・精製担体。担体:アガロースビーズ
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,凍結禁止 法規備考
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GFP-Trap MA
- 0 追加
説明文
GFP融合タンパク質の単離・精製担体。担体:磁性アガロースビーズ
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,凍結禁止 法規備考
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[在庫・価格 :2019年06月24日 23時07分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。

GFP-Trap-A

文献数:0

  • 商品コード:gta-20
  • メーカー:CHT
  • 包装:20tests
  • 価格:¥83,000
  • 在庫:無(発注済)
  • 納期:10日程度 
  • 法規制等:

説明文 GFP融合タンパク質の単離・精製担体。担体:アガロースビーズ
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,凍結禁止 法規備考
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GFP-Trap MA

文献数:0

  • 商品コード:gtma-20
  • メーカー:CHT
  • 包装:20tests
  • 価格:¥83,000
  • 在庫:1個
  • 納期:-
  • 法規制等:

説明文 GFP融合タンパク質の単離・精製担体。担体:磁性アガロースビーズ
別包装品 別包装品あり
法規制等
保存条件 4℃,凍結禁止 法規備考
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Magnetic Separator

[在庫・価格 :2019年06月24日 23時07分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数 リスト
1.5mL Magnetic Separator
1週間程度  0 追加
説明文
法規制等
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法規制等
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2週間程度  0 追加
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磁気ビーズ回収用のチューブラック。1.5 mlチューブを2本収容できる。
法規制等
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2週間程度  0 追加
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磁気ビーズ回収用のチューブラック。1.5 mlチューブを6本収容できる。
法規制等
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Magnetic Separator-24, BcMag
2週間程度  0 追加
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磁気ビーズ回収用のチューブラック。1.5~2.0 mlチューブを24本収容できる。
法規制等
保存条件 室温 法規備考
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[在庫・価格 :2019年06月24日 23時07分現在]

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1.5mL Magnetic Separator

文献数:0

  • 商品コード:LS001
  • メーカー:BLB
  • 包装:1piece
  • 価格:¥27,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
  • 法規制等:

説明文
法規制等
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BioMag MultiSep Magnetic Separator

文献数:0

  • 商品コード:MS001
  • メーカー:BLB
  • 包装:1piece
  • 価格:¥79,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:1週間程度 
  • 法規制等:

説明文
法規制等
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Magnetic Separator-2, BcMag

文献数:0

  • 商品コード:MS-01
  • メーカー:BIC
  • 包装:1piece
  • 価格:¥14,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:2週間程度 
  • 法規制等:

説明文 磁気ビーズ回収用のチューブラック。1.5 mlチューブを2本収容できる。
法規制等
保存条件 室温 法規備考
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Magnetic Separator-6, BcMag

文献数:0

  • 商品コード:MS-02
  • メーカー:BIC
  • 包装:1piece
  • 価格:¥36,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:2週間程度 
  • 法規制等:

説明文 磁気ビーズ回収用のチューブラック。1.5 mlチューブを6本収容できる。
法規制等
保存条件 法規備考
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Magnetic Separator-24, BcMag

文献数:0

  • 商品コード:MS-03
  • メーカー:BIC
  • 包装:1piece
  • 価格:¥45,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:2週間程度 
  • 法規制等:

説明文 磁気ビーズ回収用のチューブラック。1.5~2.0 mlチューブを24本収容できる。
法規制等
保存条件 室温 法規備考
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関連製品:GFP結合タンパク質

[在庫・価格 :2019年06月24日 23時07分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。
詳細 商品名
  • 商品コード
  • メーカー
  • 包装
  • 価格
  • 在庫
  • 法規制等
納期 文献数 リスト
GFP Binding protein
10日程度  0 追加
説明文
法規制等
保存条件 4℃,凍結禁止 法規備考
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[在庫・価格 :2019年06月24日 23時07分現在]

※ 納期として表示している期間は弊社発注日からの「目安」となり、納期を保証する物ではございません。実際には長くかかる場合もございます。ご注意ください。

GFP Binding protein

文献数:0

  • 商品コード:gt-250
  • メーカー:CHT
  • 包装:250μg
  • 価格:¥52,000
  • 在庫:無(未発注)
  • 納期:10日程度 
  • 法規制等:

説明文
法規制等
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お問い合わせ先

(テクニカルサポート 試薬担当)

reagent@funakoshi.co.jp

製品情報は掲載時点のものですが、価格表内の価格については随時最新のものに更新されます。お問い合わせいただくタイミングにより製品情報・価格などは変更されている場合があります。
表示価格に、消費税等は含まれていません。一部価格が予告なく変更される場合がありますので、あらかじめご了承下さい。